一种小鼠腹膜透析导管放置的逆行植入方法

先前的腹膜透析小鼠模型方案存在局限性，无法长期使用。本研究解决了这些限制，例如导管盘绕和移位。该技术可防止PD导管因机械原因而发生故障，从而可以更长时间地使用它们来研究病理学，例如腹膜纤维化。

该技术将为探测腹膜纤维化的分子发病机制和新疗法提供更好的小鼠模型。PD在人类中的一个关键限制。PD是儿童ESKD患者肾脏替代治疗的主要药物。

这个优化的模型将提供更好的试验台来研究人类PD的所有问题。动物模型的生成具有学习曲线。本分步视频将帮助个人实施该技术，以成功生成腹膜透析的持久模型。

首先将完全麻醉的8至12周龄C57黑色/ 6J小鼠置于左侧位置。按照手稿中的规定剃除小鼠后，通过将鼠标的右胁暴露在加热毯上来对手术区域进行消毒。然后将无菌手术单放在小鼠身上。

将接入端口口袋指定在鼠标尾部上方一厘米处。用非惯用食指和拇指握住安装段，放在靠近尾巴的指定区域。将导管放在皮肤上方，并估计导管插入腹腔内的位置。

然后标记分配的管插入位置，尊重管子在前中线附近的最小弯曲。用鼠标耳标器在储液罐部分的框架上打一个侧孔。在尾巴上方一厘米处做一个水平的一厘米宽的皮肤切口。

然后从下面的肌肉层中钝切地解剖皮下平面，为导管放置做一个袋子，以确保安装端口自由地驻留在理想的端口袋中。通过定制的侧孔的3-0缝合线。通过收紧通过的缝合线将通道固定在肌肉床上，保持头管路线。

在中线附近的正式标记区域切开一厘米的切口。在切开的腹壁肌肉周围放置一条松散的钱包绳缝线，并用 4-0 圆形可吸收缝合线。在靠近右中线的肌肉层上做一个一厘米的切口，并将导管的近端毛毡穿过切口内。

将导管穿过准备好的通道。在管子周围收紧准备好的钱包绳缝合线，同时将第二根毡放在肌肉层上的钱包绳外，并用 3-0 条可吸收缝合线关闭皮肤。确保放置的导管正常工作。

使用连接到端口的特定Huber针头上的一毫升注射器检查功能。将生理盐水注入安装端口。在确认对阻力零容忍的平稳流动后，用3-0可吸收缝合线关闭端口储液器周围的皮肤切口。

用Huber针进入端口，向端口注入100微升生理盐水以确认专利过程。然后注入200微升脂多糖，接着注入100微升生理盐水进行管灌，确保无阻力。注射 LPS 7 天和植入导管两周后，计划腹膜活检。

确认麻醉成功后，从膀胱到剑突下做一个中线皮肤切口。然后用冷PBS灌注筋膜下平面。确保在不干扰腹膜完整性的情况下完全解剖平面。

对苏木精和伊红染色切片的分析显示，腹膜下间隙的细胞外基质（ECM）显着增加。对照小鼠腹膜下间隙的平均ECM是LPS暴露小鼠的一半。Masson的三色染色可检测纤维化，测量强度密度归一化为表面积。

使用内皮细胞标志物CD31分析血管改变和腹膜下间隙扩大，并在随机选择的高倍视野图像中测量为积分密度。与对照组相比，观察到LPS诱导的小鼠腹膜下纤维化增加三倍，血管增加约八至九倍，腹膜下间隙增加两倍，标记为SP。将导管放在皮肤上方并标记导管插入点，同时避免管子弯曲。

插入应靠近内部中线。提供更耐用的小鼠PD导管放置方法将使研究人员能够设计和执行长期实验来探测和靶向腹膜衰竭。