针对咖啡浆果螟子下皮测试控制剂和杀虫剂 的方法

该方法使用生咖啡果实来测试杀虫剂对咖啡浆果螟的毒性。杀虫剂应用在昆虫侵扰之前或之后进行，以研究昆虫的抗死亡率和其他影响。使用含有足够昆虫生长营养的真正绿咖啡是评估化合物在模拟自然条件下对昆虫的毒性的最合适方法。

该协议允许评估化学杀虫剂的毒性作用以及对真菌或驱虫物质等病原体的毒性作用。这种水果和昆虫的感染是关键步骤，因为消毒不当会导致昆虫因污染而死亡。昆虫质量也很重要，因为弱小的昆虫会高估有毒产品的结果。

视觉演示可以识别果实虫害过程的适当阶段，在适当的时候传播有毒物质。以及解剖水果的方法。演示该过程的将是来自实验室的研究助理克劳迪娅·马丁内斯。

首先，在咖啡种植园开花后120至150天的生长年龄清晨收集绿咖啡果实。选择大约300种大小均匀的健康水果，并取出花梗。将生咖啡果实浸入2%的肥皂溶液中，揉搓彻底清洁。

然后用清水冲洗水果三次。将它们浸入0.5%次氯酸钠溶液中，并以每分钟110转的速度将其放在摇床上10分钟。用清水冲洗水果三次，并用无菌纸巾擦干。

将水果放置在距离紫外线源55厘米处15分钟，在支持紫外线的水平层流站内照射水果。每五分钟移动一次水果，以确保整个水果的适当照射。为了建立生物测定，将同一天出现的咖啡浆果螟浸入0.5%次氯酸钠溶液中，并用刷子缓慢搅拌10分钟。

用平纹细布过滤这些昆虫，并用无菌蒸馏水清洗三次。用无菌纸巾去除多余的水。每个实验单元准备一组30个生咖啡果实，并将它们放在塑料盒中。

使用便携式喷雾器装置应用不同浓度的测试产品进行评估，这里使用5%和6%的生物碱乳液。作为对照，用水喷洒一组生咖啡水果。每次处理至少使用三个实验单元，一个接一个地喷洒。

在无菌罩中，释放每个生咖啡果实的两个咖啡浆果螟虫成虫，并在30分钟后盖上盒子。将装有受感染的生咖啡果实的塑料盒放在黑暗中，在受控条件下将房间或培养箱内。1、7、15 和 21 天后，计算每个盒子中水果外的螟虫果实以及活昆虫和死虫的数量。

在感染后20天，在10倍放大镜下解剖每个绿咖啡果实，并计算每个水果中被昆虫破坏的健康种子或种子的数量。计算不同的咖啡浆果螟生物阶段。观察每个种子中死亡昆虫的数量，以确定每个实验单元的昆虫死亡率。

在无菌罩中，将咖啡浆果螟成虫以二比一的比例释放到先前消毒的生咖啡果实中，并允许感染在21摄氏度下进行三个小时。大多数生咖啡水果应该在三小时后感染，咖啡浆果螟的腹部仍然暴露在外。选择46种受感染的水果，并将它们放在96孔塑料架中，以便将处理直接喷洒在穿孔水果的咖啡浆果螟上。

喷洒三个架子至少三次进行处理，一个接一个，并在30分钟后覆盖架子。20天后，在10倍放大的立体显微镜下解剖绿咖啡果实，并计算每个水果中被昆虫破坏的健康种子或种子的数量。计算不同的咖啡浆果螟生物阶段和每个种子中死亡昆虫的数量，以确定每个实验单位的昆虫死亡率。

按照评估对水果具有保护作用的产品的初始步骤，并将生咖啡水果成人释放到塑料盒中。然后计算从盒子中飞走的咖啡浆果螟的数量以及感染生咖啡果实的数量。孵化后，在受控条件下，然后在感染后20天进行解剖，并计算种子和死亡昆虫，按照咖啡浆果螟虫感染后概述的步骤评估产品。

数一数从绿色咖啡果实中移出或飞离果实的咖啡浆果孔的数量。喷洒每次处理后，然后按照在受控条件下孵育的步骤确定每个实验单元的昆虫死亡率。5%和6%的杀虫剂施用于咖啡浆果螟，第20天导致昆虫死亡率高，与对照相比差异显著。

可见，施用二药可产生94%的健康种子，一施用杀虫剂可产生89%的健康种子。对照组37%的种子没有感染。在感染后的情况下，产品穿透昆虫角质层，导致昆虫死亡。

死亡率最高的是杀虫剂二。在评估的第20天，杀虫剂的影响反映在健康未感染种子的百分比中。与对照组中发现的昆虫种群相比，咖啡种子内的昆虫种群减少，喷水。

虫媒病原体和驱虫剂的联合作用导致最小的种子损伤和最大的昆虫死亡率。这种水果的感染和昆虫的消毒确保了方案的成功。该方法还可用于评估咖啡果实对咖啡浆果螟的耐受性或抗性。

在抗虫咖啡种子的情况下，也可以观察到对昆虫种群的负面影响。该方法不仅可以用于昆虫学中评估具有不同作用模式的杀虫剂，还可以用于植物育种以评估耐受品种和植物病理学，以研究果实/病原体的相互作用。