研究杀虫剂对 秀丽隐杆线虫 神经元的影响

该协议是本科生进行真实研究的一种简单可行的方法，可以导致可发表的结果。主要优点是学生可以对自己决定的问题进行原创性研究。首先，通过在本生燃烧器火焰中小心地弯曲九毫升玻璃巴斯德移液器并关闭移液器的开口来制作溶液撒布器。

然后在每次铺展之前对撒布机进行乙醇灭菌。使用微量滴注器，将100微升稀释液放在琼脂的中心，并用灭菌的撒布器轻轻地涂抹在表面上。然后将覆盖的培养皿放在一边，让溶液浸入表面直至干燥。

对于超过12小时的暴露期，在添加线虫之前，在平板中加入50微升大肠杆菌的过夜培养物，而对于12小时或更短的急性实验，不需要在平板上放置大肠杆菌。使用微量移液管，将一毫升无菌水放在线虫板上。接下来，将水漱口以提升线虫，然后将与线虫一起取出液体到1.5毫升的微量离心管中。

10分钟后，当线虫在重力作用下沉降时，小心地取出至少500微升的水并丢弃。然后重悬线虫，并使用截止的黄色移液器吸头，将50至100微升悬浮蠕虫除去到每个治疗板上，确保每个板至少有10个成虫。准备两张载玻片，方法是仅在载玻片的一侧放置一块标签胶带，形成厚度均匀的垫子，然后在工作台上将干净的未使用的载玻片放置在它们之间。

使用微量滴将10微升的熔化琼脂糖滴到载玻片的中心。然后，通过将另一个干净的载玻片放在垂直于滴剂的载玻片的顶部并施加压力，使琼脂糖滴形成标记胶带的厚度，从而压平滴。然后，施加稳定的压力以分离两个载玻片。

然后将这台载玻片将琼脂面朝上放在台面上，让它干燥一到两分钟，然后再使用。要用琼脂糖垫添加制备的载玻片的线虫，在琼脂垫中加入含有一摩尔叠氮化钠的五微升水滴，这将麻醉蠕虫并动员它们。然后使用蠕虫镐将每个处理玻片10个线虫转移到液滴上，在转移线虫之前和之后应对其进行灭菌。

接下来，使用镊子添加盖玻片，方法是将其放置在一定角度并缓慢降低。然后，将准备好的湿支架放在荧光显微镜上，首先在10X放大倍率和相差下观察蠕虫，然后在40X放大镜下用相衬和荧光灯照明观察蠕虫。在显微镜载物台上一次放置一个准备好的湿支架，并使用显微镜载物台夹固定到位，然后开始使用最低放大倍率物镜（通常为10X）观察湿支架，并使用明亮的场或相差来可视化和聚焦线虫。

一旦线虫位于视野中，使用显微镜上的微调焦旋钮对其进行聚焦，然后通过转动刻度盘将照明切换到荧光，并将光引导到相机以捕获数字图像。接下来，使用成像软件调整照明，使神经元明亮地被照亮，但不会过度饱和。在某些时候，以与细胞图像相同的放大倍率获得标尺的单独图像，以为其图形提供放大比例。

使用多巴胺神经元表达GFP的菌株研究含锰农药对多巴胺神经元形态的影响，显示出明亮的信号。然而，如果神经元长时间暴露在光线下，荧光信号会漂白。此过程可以是为期数周的学生驱动项目的一部分，该项目还可以包括行为或其他数据。