神经退行性和精神健康障碍是由突触通讯的变化引起的。多因素事件以我们不完全理解的方式改变突触受体。突触膜的微移植提供了对这些改变的洞察力。
该技术的主要优点是可以记录在人脑中工作的天然大脑受体的活动，因此代表了我们正在研究的疾病。突触受体是调节大脑电活动的药物的主要靶标，但是了解这些受体如何变化，可以开发更好的疗法来恢复其功能。这种方法已经成功地应用于不同的物种，从昆虫，鱼类，哺乳动物，但也可以应用于大脑以外的膜受体，例如肌肉和肿瘤。
可能性是广泛的。修剪注射针很棘手。太小可以阻止蛋白质注射，而两个大可以杀死细胞。
它有助于使用一致的测量，例如剃须刀片的边缘。首先，在带有漂浮湿冰的浴缸中对从感兴趣的人脑区域制备的选定样品进行三次超声处理。每次使用五秒钟的循环，并在两次循环之间在湿冰上等待一分钟。
在放置样品之前，将一微升样品放在热塑性塑料上，并根据需要在表面上压痕，以防止样品移动。使用握住纳米注射器的机械手的旋钮定位针，并将其移向要填充的样品。一旦针尖进入样品中，按住填充按钮，直到取出足够的样品。
10个卵母细胞需要约0.5微升样品。使用旋钮将纳米注射器的针头移回最高位置。用针头穿透表面正下方的卵母细胞，不要更深，并使用脚踏板注射样品。
等待大约两到三秒钟。注射成功后，细胞将膨胀。使用操纵器上的旋钮退出单元格。
移动培养皿，使下一个卵母细胞与针对齐。重复该过程，直到注射了培养皿中所需数量的卵母细胞，然后将纳米注射器缩回其原始位置并取出针头。确保一孔卵母细胞未注射以用作对照。
打开用于记录离子电流的所有设备，然后打开台式计算机，然后登录到 WinEDR 版本 3.9.1。确保程序正在运行，并且记录已设置为“光盘”。之后，设置录制持续时间，并清除“模拟器”选项。
对于电压电极部分，关闭负容量补偿。将浴电极部分的增益选择器开关设置为10，然后将选择增益倍数的三位切换开关设置为x1。LED灯将指示增益乘法器的选择。
关闭箝位模式选择器，输入直流增益控制，并将增益控制设置为全带宽开环的一半左右。将命令设置为 40 毫伏，将保持控制设置为负，将比例乘数设置为 x2。对于电流电极，在刺穿卵母细胞之前，使用VE偏移建立零参考。
接下来，打开 WinEDR 版本 3.9.1 软件，转到顶部菜单，然后选择“文件”，然后选择“新建”。创建您自己的文件夹并保存文件。在主菜单中，选择“录制”，然后选择“录制到磁盘”。
将琼脂桥放在记录室后面的相应圆孔中，连接记录室中用作接地参考的电极的孔。将 1x 铃声工作溶液添加到相应的灌注阀中。打开阀门，直到记录室充满林格氏溶液。
使用左右手持电极的机械手，将电极针引导到装满Ringer's溶液的记录室中。通过将VM和VE偏移旋钮归零，然后按下电极测试按钮来检查每个电极的电阻。电阻应在0.5至3兆欧之间。
如果电阻超出范围，请使用新的微电极进行更换。接下来，用新鲜的铃声溶液填充录音室。使用玻璃移液器将非注射或微移植的卵母细胞置于记录室的中心。
确保卵母细胞在显微镜下清晰可见，动物一面朝上。将电极引导至振铃器溶液中，直到它们接触卵母细胞膜。用两个电极轻轻刺穿动物侧的卵母细胞膜，并记录静息膜电位。
打开铃声的解决方案流。使用卵母细胞钳位放大器，将模式更改为慢速电压钳位，并将保持电压设置为80毫伏。显示器上的电流应为负，通常在 0 到 0.4 微安之间。
转到“文件”、“新建”，然后在软件上保存录制文件以创建新文件，然后保存录制文件。按“录制”，然后按“录制到光盘”以开始录制。使用“标记图表”对话框将相关信息添加到文件中。
通过打开阀门，并将它们灌注到记录室中15秒钟，应用激动剂进行化学刺激。记录完成后，将电压钳位调至关闭位置，然后关闭振铃器解决方案阀。取出卵母细胞，并丢弃以下人脑样本的制度政策，然后停止记录并保存文件。
将录制文件的副本保存到 USB 驱动器。从那里，打开要分析的所需文件。要测量 AMPA 最大响应和 GABA A 峰值响应，首先，通过查找红线来建立 0 水平或基线，然后将其拖动到 Ringer 应用程序或基线生成的电流。
建立 0 电平后，通过将绿色垂直读出光标拖动到图形跟踪器的所需部分来确定响应测量值。记录来自注射有人类突触受体膜的卵母细胞的离子电流。AMPA受体用100微摩尔kainate激活，GABA A受体用1毫摩尔GABA激活。
从鱼雷的电器官共注射过滤膜，富含乙酰胆碱受体，以及编码GABA排一受体的cDNA进入动物极，主要产生两组卵母细胞，基于它们的反应。一组卵母细胞对乙酰胆碱有很大的反应，但对一个微摩尔GABA没有反应。另一组卵母细胞对乙酰胆碱的反应为零或低，但对GABA的反应很大。
图形图像显示了第一组和第二组峰值电流平均值的平均值加减标准误差。第二组中的一个卵母细胞具有较大的GABA和乙酰胆碱反应，表明细胞核破裂。因此，响应的分布偏向于低值，如膜电流分布的平均值和中位数之间的差异所示。
低反应卵母细胞的原因之一是膜被注射，并被困在卵母细胞的细胞核中。这里显示了注射到动物或植物极中的卵母细胞的GABA和kainate反应，这些卵母细胞具有从非AD脑和AD大脑获得的未过滤膜。在不靶向细胞核的情况下注射动物极附近的卵母细胞比注射到植物极中的卵母细胞具有更大的反应，从而允许研究具有非常低数量的受体的组织样品。
尝试此过程时，请始终监视您的铃声级别。在重要的录音中，你总是会用完，然后它会使用你的结果，卵母细胞的死亡，以及非常有价值的数据的丢失。按照这个程序，我们可以进行蛋白质免疫负载来验证突触受体或目标蛋白质的存在。
它允许测量不同大脑区域和不同脑部疾病的全局兴奋与抑制突触比率，从而可以直接测试对疾病原因的理论预测。
