标准化大鼠冠状动脉环制备及实时记录血管直径动态张力变化

该方案详细介绍了大鼠冠状动脉的定位，分离和肌肉环固定。为各种心血管疾病的机制、探索和治疗提供了一种新的方法。该系统适用于和稳定记录体外动脉张力的动态变化，读数从60微米到10毫米。

我们建议新手首先应准确了解每个血管的解剖位置，并且可以从稍大的血管开始，例如胸动脉和肠系膜动脉。解离并取出心脏后，首先用医用塑料镊子轻轻挤压，从所有心腔排出残留的血液。将预处理的心脏快速置于含有95%氧气和5%二氧化碳饱和生理盐溶液的培养皿中，在4摄氏度下，pH值为7.40。

为了准确识别冠状动脉的解剖位置，根据示意图在光学显微镜下调整孤立心脏的姿势。用手术剪刀和镊子从肺动脉根部沿心室间隔切除左心室和右心室腔。为了将左右冠状动脉与心肌组织分离，请在光学解剖显微镜下解剖右心室，以彻底暴露右冠状动脉分支。

然后通过顺时针旋转心脏组织45度来识别左冠状动脉的位置。去除周围粘稠的心肌组织后，明确辨别脉动的左右冠状动脉。立即分离中间的冠状动脉，并在四摄氏度下完全浸入生理盐溶液中。

通过用解剖学剪刀垂直切割分离的动脉来记录不同刺激下的血管张力，从而获得约两毫米的动脉环。准备两根两根两厘米的不锈钢丝，预浸泡在饱和95%氧气和5%二氧化碳的四摄氏度生理盐溶液中。在光学解剖显微镜下，将两根导线沿着血管的方向平行穿过动脉环，并在血管腔的两端暴露相等长度的导线。

用前后钢丝将动脉环固定在充满95%氧气和5%二氧化碳的冒泡生理盐溶液的线显微照片的浴中。旋转水平螺钉旋钮以获得适当的前后间距，使两根导线水平，动脉环处于自然松弛状态。在恒温装置上安装DMT浴槽后，打开数据采集软件，确保记录到相应的路径信号。

设置参数。通过沿血管直径施加合理的张力，实现动脉环的最佳初始张力。此时，将显示的血管张力值设置为零。

之后，通过旋转浴的螺旋轴对动脉环施加三毫牛顿脉冲刺激。单击LCD面板将其设置为零毫牛顿并保持一小时。在37摄氏度pH 7.40的氧饱和生理盐溶液缓冲液中孵育一小时后，在张力控制面板上再次设置张力值为零毫牛顿。

使用线肌图技术执行冠状动脉环的收缩活性，并通过用60毫摩尔钾离子溶液刺激每个10分钟，在三个单独的操作中进行验证。每次刺激后，用氧饱和生理盐溶液冲洗浴，直到血管张力恢复到其初始状态。加入0.3微摩尔U46619到浴中，观察10分钟。

加入一个微摩尔芹菜素并观察血管效应。当扩张达到平台时，加入下一个浓度。向60毫摩尔钾预缩溶液中加入一微摩尔芹菜素，观察血管效应。

当扩张达到平台时，加入下一个浓度。向静息血管环中加入28毫摩尔钾离子。当收缩达到平台时，加入下一个浓度。

将0.01微摩尔U46619加入静息血管环。当收缩达到平台时，加入下一个浓度。在对动脉环施加初始三毫牛顿张力后，通过平行施加60毫摩尔钾离子浓度三次，其张力超过两毫牛顿。

因此，上述程序产生了具有出色生理活性的孤立冠状动脉环。将累积钾离子浓度或U46619加入到DMT620M的浴中，导致体外血管张力的浓度依赖性增加。当血管收缩效应达到平台时，加入下一个浓度的钾离子或U46619。

对于由钾离子和U46619收缩的孤立冠状动脉环，测试药物芹菜素以令人惊讶的浓度依赖性方式引起血管舒张。心脏从肺动脉根部沿着心室间隔解剖，暴露并分离两毫米冠状动脉肌环。在此程序之后，我们可以记录视网膜微血管，肾功能，肾动脉和大脑中动脉的血管张力。

从60微米到10毫米的区域动态。