يقدم هذا البروتوكول بالتفصيل توطين وفصل وتثبيت الحلقة العضلية للشرايين التاجية للفئران. توفير طريقة جديدة لآليات واستكشاف وعلاج أمراض القلب والأوعية الدموية المختلفة. النظام مناسب والتسجيل المستقر للتغيرات الديناميكية للتوتر الشرياني في المختبر ، وقراءة قطرها من 60 ميكرومتر إلى 10 ملم.
نقترح أن المبتدئين يجب أن يفهموا أولا بدقة الموقع التشريحي لكل وعاء ويمكن أن يبدأوا بوعاء أكبر قليلا مثل الشريان الصدري والشريان المساريقي. بعد فصل القلب وإزالته ، ابدأ بتصريف الدم المتبقي من جميع غرف القلب عن طريق الضغط بشكل معتدل باستخدام ملقط بلاستيكي طبي. ضع القلب المعالج مسبقا بسرعة في طبق بتري يحتوي على 95٪ من الأكسجين و 5٪ من محلول الملح الفسيولوجي المشبع بثاني أكسيد الكربون عند أربع درجات مئوية ، وتبلغ قيمة الرقم الهيدروجيني 7.40.
لتحديد الموقع التشريحي للشرايين التاجية بدقة ، اضبط وضع القلب المعزول تحت المجهر الضوئي وفقا للمخطط التخطيطي. قطع تجاويف البطين الأيسر والأيمن على طول الحاجز بين البطينين من جذر الشريان الرئوي باستخدام مقص جراحي وملاقط. لفصل الشرايين التاجية اليسرى واليمنى عن أنسجة عضلة القلب، قم بتشريح البطين الأيمن تحت المجهر التشريحي البصري لفضح فرع الشريان التاجي الأيمن بدقة.
ثم حدد موضع الشريان التاجي الأيسر عن طريق تدوير أنسجة القلب 45 درجة في اتجاه عقارب الساعة. بعد إزالة أنسجة عضلة القلب اللزجة المحيطة ، قم بتمييز الشرايين التاجية اليسرى واليمنى النابضة بشكل صريح. افصل الشرايين التاجية في الوسط على الفور وانغمس تماما في محلول الملح الفسيولوجي عند أربع درجات مئوية.
الحصول على حلقة شريانية من حوالي مليمترين عن طريق قطع الشريان المنفصل عموديا بمقص تشريحي لتسجيل توتر الأوعية الدموية تحت محفزات مختلفة. قم بإعداد سلكين من الفولاذ المقاوم للصدأ بسنتيمترين وانقع مسبقا في محلول ملح فسيولوجي بأربع درجات مئوية مشبع بنسبة 95٪ من الأكسجين و 5٪ من ثاني أكسيد الكربون. مرر كلا السلكين بالتوازي عبر الحلقة الشريانية جنبا إلى جنب مع اتجاه الوعاء تحت المجهر التشريحي البصري ومع أسلاك متساوية الطول مكشوفة في طرفي تجويف الأوعية الدموية.
قم بإصلاح الحلقة الشريانية باستخدام الأسلاك الفولاذية الأمامية والخلفية في حمام المجهر السلكي المملوء بمحلول الملح الفسيولوجي الفقاعي بنسبة 95٪ من الأكسجين و 5٪ من ثاني أكسيد الكربون. قم بتدوير المقبض اللولبي الأفقي للحصول على تباعد أمامي وخلفي مناسب بحيث يكون السلكان أفقيين وتكون الحلقة الشريانية في حالة طبيعية من الاسترخاء. بعد تثبيت حمام DMT على جهاز الترموستاتي ، افتح برنامج الحصول على البيانات لضمان تسجيل إشارة المسار المقابلة.
تعيين المعلمات. تحقيق التوتر الأولي الأمثل للحلقة الشريانية عن طريق تطبيق توتر معقول على طول قطر الوعاء. عند هذه النقطة، اضبط قيمة توتر الأوعية الدموية المعروضة على الصفر.
بعد ذلك ، ضع محفزا نبضيا نيوتن ثلاثة مللي على الحلقة الشريانية عن طريق تدوير المحور الحلزوني للحمام. انقر فوق لوحة LCD لضبطها على صفر مللي نيوتن والاحتفاظ بها لمدة ساعة واحدة. بعد الحضانة لمدة ساعة واحدة في محلول الملح الفسيولوجي المشبع بالأكسجين عند 37 درجة مئوية درجة حموضة 7.40 ، اضبط قيمة التوتر على صفر مللي نيوتن مرة أخرى على لوحة التحكم في التوتر في المجهر السلكي.
قم بإجراء النشاط الانقباضي لحلقة الشريان التاجي باستخدام تقنية myograph السلكية والتحقق من صحتها في ثلاث عمليات منفصلة عن طريق التحفيز باستخدام 60 ملليمولار من محلول أيون البوتاسيوم لمدة 10 دقائق لكل منهما. بعد كل تحفيز ، اغسل الحمام بمحلول الملح الفسيولوجي المشبع بالأكسجين حتى تعود نغمة الأوعية الدموية إلى حالتها الأولية. أضف 0.3 ميكرومولار U46619 إلى الحمام وراقب لمدة 10 دقائق.
أضف أبيجينين ميكرومولار واحد ولاحظ تأثيرات الأوعية الدموية. عندما يصل التمدد إلى هضبة ، أضف التركيز التالي. أضف أبيجينين ميكرومولار واحد إلى محلول ما قبل انكماش البوتاسيوم 60 مللي مول لمراقبة تأثير الأوعية الدموية.
عندما يصل التمدد إلى هضبة ، أضف التركيز التالي. أضف 28 ملليمولار أيون البوتاسيوم إلى حلقة الأوعية الدموية أثناء الراحة. عندما يصل الانكماش إلى هضبة ، أضف التركيز التالي.
أضف 0.01 ميكرومولار U46619 إلى حلقة الأوعية الدموية أثناء الراحة. عندما يصل الانكماش إلى هضبة ، أضف التركيز التالي. بعد تطبيق توتر نيوتن أولي بثلاثة ملليمترات على الحلقة الشريانية، تجاوز توترها أكثر من مليملين نيوتن من خلال تطبيق تركيز أيون البوتاسيوم 60 ملليمولار بالتوازي ثلاث مرات.
وهكذا أدت الإجراءات المذكورة أعلاه إلى حلقة تاجية معزولة ذات نشاط فسيولوجي ممتاز. تمت إضافة تركيز أيون البوتاسيوم التراكمي ، أو U46619 إلى حمام DMT620M ، مما أدى إلى زيادة تعتمد على التركيز في نغمة الأوعية الدموية في المختبر. تمت إضافة التركيز التالي لأيون البوتاسيوم أو U46619 عندما وصل تأثير تضيق الأوعية إلى هضبة.
بالنسبة للحلقات التاجية المعزولة المقيدة بأيون البوتاسيوم و U46619 ، تسبب عقار الاختبار apigenin في توسع الأوعية بطريقة تعتمد على التركيز بشكل مدهش. يتم تشريح القلب على طول الحاجز البطيني من جذر الشريان الرئوي ، مما يعرض ويفصل الحلقة العضلية التاجية التي يبلغ طولها مليمترين. بعد هذا الإجراء ، يمكننا تسجيل توتر الأوعية الدموية في الأوعية الدقيقة في شبكية العين ، ووظائف الكلى ، والشريان الكلوي ، وفي الشريان الدماغي الأوسط.
منطقة ديناميكية من 60 ميكرومتر إلى 10 ملم.
