这种新的主动脉束带技术允许诱导小鼠压力超负荷心脏肥大,方差较小,重现性更高。在主动脉周围放置一个固定直径的橡胶圈可诱导横主动脉的流速持续增加,从而产生可重复的心脏肥大。该程序应由已经具有啮齿动物麻醉和显微外科技术经验的人执行,或者有经验的人可以指导。
首先使用剪刀或手术刀在显微镜下对O形圈进行一次切割,以便在主动脉周围放置。用与 8-0 连接的针刺穿靠近切口的每个环面不可吸收缝合,并拉线。切开,一侧留两到三厘米,另一侧留两厘米,以在最后一步将 O 形环固定在主动脉周围。
手术前,取结扎辅助器,并将一个环侧的线端拉过结扎辅助器的孔。将带有附加 O 形圈的结扎助剂放在一边放置。剃除麻醉小鼠左侧胸部的皮毛。
然后将小鼠放回充满异氟烷的腔室中,以便在插管前充分镇静。手术前打开加热垫,将动物的体温保持在 37 摄氏度。将加热垫连接到直肠探头以自动保持小鼠的体温。
在加热垫周围拉伸橡皮筋,将鼠标与门齿固定在板上。将麻醉的鼠标仰卧放在加热垫上。将橡皮筋放在动物的门牙上,以将颈部伸展到盘子上。
将光源聚焦在喉咙上,以便气管插管时气管开口清晰可见。用一只手轻轻张开嘴,另一只手和小镊子放置插管辅助装置。轻轻移动舌头以清除气管开口。
将气管插管引入气管,另一方面,继续握住插管辅助装置。通过三向旋塞阀将气管插管位置连接到小鼠呼吸机,以确认正确的气管插管位置。根据制造商的说明监控正确的通风。
通过脚趾捏反射检查确认足够的麻醉深度。在眼睛上涂抹眼药膏,以避免手术过程中干燥。使用市售的消毒剂溶液对手术区域进行消毒。
使用剪刀,在剑突和左腋窝之间的一条线中间做一个 0.5 到 1 厘米长的皮肤切口。使用镊子将肌肉层与下面的肋骨分开,并将两个五毫米的牵开器放入切口以暴露胸腔。要开始左胸切开术,请使用微型弹簧剪刀在第二和第三肋骨之间的肋间肌肉上进行一到两毫米的切口。
打开胸腔,用45度角镊子张开切口。将三个胸部牵开器放入切口以打开胸腔以改善可视化。要暴露主动脉弓,请尝试用细尖 45 度角镊子抬起胸腺和脂肪组织并轻轻地将胸腺和脂肪组织与主动脉弓分开。
用一只手用 45 度角的镊子露出主动脉弓。另一方面,定位通过先前连接的一侧螺纹与连接助剂连接的 O 形圈。使用主动脉弓下的结扎辅助工具将线从尾部传递到头臂动脉和左颈总动脉之间的横主动脉的颅侧。
用镊子小心地将结扎辅助剂和主动脉弓之间的两根线都取走。取下结扎辅助装置,通过拉动两侧的螺纹,将 O 形圈轻轻地定位在足弓周围。成功定位后,用线和手术结固定 O 形圈。
打一个额外的结,以避免在每一侧打开它。结扎O形圈后,从切口中取出三个胸部牵开器。如果需要,通过用温热的 0.9% 等渗盐溶液填充胸部来消除胸部残留的空气。
要露出胸廓切口进行缝合,请再次取两个五毫米牵开器以将皮肤保持在侧面。用两条或三条6-0不可吸收的缝合线闭合胸部。取下两个牵开器,用三到五条4-0可吸收缝合线闭合皮肤。
然后关闭异氟醚并监测。捏住呼吸机的流出物两秒钟以重新充气肺部。手术后一天,通过测量狭窄处的最大流速,使用超声验证狭窄。
对于测量,请使用超声心动图和超声系统和频率为 30 兆赫兹的换能器探头。将麻醉动物仰卧放在加热垫上,并将加热垫与直肠探头连接以将体温保持在37摄氏度,并使用四个鼠标爪传感器用心电图监测心率。通过超声测量,成功实施 O 形环主动脉束带可增加狭窄处的流速。
对于此测量,将换能器头放在右侧胸骨旁,以通过二维成像定位主动脉弓。使用彩色多普勒观察主动脉中的血流,并用脉冲波多普勒测量狭窄处的血流速度。通过二维成像可视化左右颈总动脉。
将换能器头水平放置在颈部的左右两侧,呈 45 度角,并使用脉冲波多普勒确定血流速度。通过脉冲波多普勒超声测量的主动脉狭窄的血流速度增加,成功诱导主动脉瓣狭窄。此外,左右颈总动脉之间的血流速度比被确定为O形环主动脉束带的功能标志物。
术后两周,观察到舒张期左心室后壁和脑室间隔直径增加。此外,通过测量左心室射血分数降低,记录了心脏功能的进行性恶化。在将 O 形环固定在主动脉弓周围时,重要的是要用结关闭两侧的环以获得最佳效果。