加速性骨关节炎内侧半月板和软骨划痕鼠模型的不稳定

这种方法模拟了人类创伤后骨关节炎的许多方面，使我们能够在更短的时间内研究疾病和可能疗法的影响。该技术的主要优点是，在短期内，在干预后仅两周，小鼠表现出一致的，可测量的骨赘形成，以及受影响腿部负荷的变化，表明疼痛。我们建议使用这种研究骨赘形成和软骨内骨化以及损伤驱动疼痛的模型。

内侧半月板韧带的识别和切割可能具有挑战性，因此我们建议在尸体上练习，直到有信心。帮助演示该程序的将是肌肉骨骼科学中心的研究助理Lynette Dunning。首先，指定一个无菌室进行手术，确保所有表面都是无菌的。

将无菌器械排列并放置在无菌窗帘上。然后，称量鼠标。用小毛夹将麻醉小鼠的皮毛夹在膝盖上，从胫骨中部到大腿中部的前侧和侧面。

通过在剃光的裸露皮肤上涂抹抗菌皮肤清洁剂来消毒皮肤。对于镇痛，每公斤丁丙诺啡皮下给药0.05毫克。将鼠标放在背侧，离开要向上操作的膝盖，并将鼠标的鼻子放在连接到麻醉装置的喷嘴中。

用带有小钥匙孔开口的无菌窗帘覆盖鼠标。将要手术的腿固定在膝盖上，夹角小于 90 度，髌韧带朝上，用手术胶带固定脚部。调整显微镜以聚焦于髌韧带。

用锯齿状镊子捏住膝盖外侧的皮肤。使用手术剪刀平行于髌腱远端做一个小切口。引入剪刀并将切口扩大到约 10 毫米。

将皮肤移到内侧，露出髌韧带和胫骨近端平台。使用11号刀片，沿着髌韧带的内侧从上到下切开一个切口。当到达髌韧带底部时，将刀片旋转 90 度并将切口从髌韧带向内侧延伸，以进入关节囊。

用钝尖镊子捏住髌韧带，旋转手腕将髌韧带移动到外侧，刚好暴露IFP。在仍然轻轻握住髌韧带的同时，用微型镊子捏住 IFP 以将其抬高并稍微向上移动。如果有出血，请用棉签按压。

识别内侧半月板的 MMTL，它将内侧半月板的颅角固定在胫骨前平台。用两毫米的小刀片弹簧剪刀小心地切断MMTL，保持内侧半月板和其他韧带完好无损。用三毫米的显微手术刀，在胫关节软骨上从后部到前部的方向上标记三个均匀间隔的凹痕。

用两到三个七毫米的小伤口闭合金属夹闭合皮肤。手术后五到七天之间取下金属夹。然后，在研究过程中的任何时候评估疼痛或步态。

通过分析膝关节的显微CT扫描来量化钙化组织。要分析软骨下骨硬化症，请选择胫骨内侧平台负荷中心的 VOI。然后，通过使用 CT 分析仪软件，在堆栈的二维冠状视图中选择描绘小梁结构的感兴趣区域，确定软骨下骨密度和微结构。

使用 CTVol 软件识别重建的三维图像堆栈中的骨赘。根据 OARSI 软骨损伤评分 19 和滑膜炎评分 20，在石蜡包埋的 5 微米切片上评估软骨损伤和滑膜炎。在诱导后八周内，DMM模型中的后腿负荷没有显着变化，而DCS小鼠在干预后两周内显着偏爱对侧或对照腿。

对侧和同侧腿之间的比率表明，诱导后4周，两种模型在受影响肢体的软骨下骨负荷区域的骨密度都增加。骨赘的出现在DCS小鼠中更为突出，与干预后两周的DMM模型相比，骨赘的数量和体积显着增加。DCS表现为内侧胫骨和股骨间室软骨损伤升高，引产后4周出现滑膜炎。

损伤应仅限于我们有意影响的结构，因此需要特别注意保持所有其他结构完好无损并尽量减少软骨的暴露。包括故意软骨划痕的修改使我们能够研究骨关节炎，重点是骨植物形成，早期骨关节炎或损伤疼痛，以及软骨损伤对整个关节的影响。