이 방법은 인간의 외상 후 골관절염의 여러 측면을 모델링하여 더 짧은 시간 내에 질병과 가능한 치료법의 영향을 조사 할 수있는 방법을 제공합니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 개입 후 2 주 만에 단기간에 마우스가 일관되고 측정 가능한 골 괴사 형성뿐만 아니라 통증을 나타내는 영향을받는 다리의 하중 변화를 보였다는 것입니다. 우리는 osteophyte 형성 및 연골 내 골화뿐만 아니라 부상으로 인한 통증에 대한이 모델을 사용하는 것이 좋습니다.
내측 반월상 연골 인대의 식별 및 절단은 어려울 수 있으므로 자신감이 생길 때까지 시체에 대해 연습하는 것이 좋습니다. 이 절차를 시연하는 데 도움이되는 것은 근골격계 과학 센터의 연구 조교 인 Lynette Dunning입니다. 시작하려면 수술을 수행 할 멸균 실을 지정하여 모든 표면이 멸균되도록하십시오.
멸균 커튼에 멸균기구를 배치하고 놓습니다. 그런 다음 마우스의 무게를 잰다. 마취 된 마우스의 털을 무릎, 앞면 및 옆면에 작은 머리 깎기로 정강이 중간에서 허벅지 중간까지 클립합니다.
면도하고 노출된 피부에 항균 피부 클렌저를 발라 피부를 소독합니다. 진통의 경우, 부 프레 노르 핀 킬로그램 당 0.05 밀리그램을 피하 투여하십시오. 마우스를 위쪽으로 조작할 무릎을 남기고 등쪽에 놓고 마우스의 코를 마취 장비에 연결된 노즐에 놓습니다.
작은 열쇠 구멍이있는 멸균 드레이프로 마우스를 덮으십시오. 무릎을 90도 미만의 각도로 고정하고 슬개골 인대가 위쪽을 향하고 발이 수술 테이프로 고정되도록 수술할 다리를 배치합니다. 슬개골 인대에 초점을 맞추도록 현미경을 조정합니다.
톱니 모양의 집게로 측면의 무릎 피부를 꼬집습니다. 수술 용 가위를 사용하여 원위 슬개 건과 평행하게 작은 절단을하십시오. 가위를 소개하고 컷을 약 10mm로 확장하십시오.
피부를 내측으로 이동하여 슬개골 인대와 근위 경골 고원을 노출시킵니다. 11 번 블레이드를 사용하여 슬개골 인대의 내측을 따라 위에서 아래로 절개하십시오. 슬개골 인대의 바닥에 도달하면 블레이드를 90도 돌리고 절개 부위를 슬개골 인대에서 내측쪽으로 확장하여 관절낭에 접근합니다.
무딘 끝 집게로 슬개골 인대를 꼬집고 손목을 돌려 슬개골 인대를 측면으로 움직여 IFP가 노출될 정도로만 합니다. 슬개골 인대를 가볍게 잡고 마이크로 핀셋으로 IFP를 꼬집어 올리고 약간 위쪽으로 움직입니다. 출혈이 있으면 면봉으로 압력을 가하십시오.
내측 반월판의 두개골 뿔을 전경골 고원에 고정시키는 내측 반월판의 MMTL을 식별합니다. 작은 2mm 블레이드 스프링 가위로 MMTL을 조심스럽게 절단하고 내측 반월판 및 기타 인대를 그대로 둡니다. 3 밀리미터의 미세 수술 칼로 경골 관절 연골에 뒤쪽에서 앞쪽 방향으로 3 개의 균일 한 간격의 들여 쓰기를 표시하십시오.
2 개 또는 3 개의 작은 7 밀리미터 상처 봉합 금속 클립으로 피부를 닫으십시오. 수술 후 5-7 일 사이에 금속 클립을 제거하십시오. 그런 다음 연구 중 어느 시점에서든 통증이나 보행을 평가하십시오.
무릎 관절의 Micro-CT 스캔을 분석하여 석회화 된 조직을 정량화합니다. 연골하 골 경화증을 분석하려면 내측 경골 고원 부하의 중심에서 VOI를 선택하십시오. 그런 다음 CT 분석기 소프트웨어를 사용하여 스택의 2차원 관상 보기에서 경골 골단, 연골하 플레이트 또는 전체 연골하 뼈로 섬유주 구조를 묘사하는 관심 영역을 선택하여 연골하 골밀도와 미세 구조를 결정합니다.
CTVol 소프트웨어를 사용하여 재구성된 3차원 이미지 스택에서 골괴사를 식별합니다. 파라핀 내장 5 마이크로 미터 섹션에서 OARSI 연골 손상 점수 19 및 활막염 점수 20에 따라 연골 손상 및 활막염을 평가합니다. 유도 후 8주 이내에 DMM 모델에서 후방 다리 하중에는 유의미한 변화가 없었으며, DCS 마우스는 개입 후 2주 후에 반대쪽 또는 대조군 다리를 유의하게 선호했습니다.
반대쪽 다리와 동측 다리 사이의 비율은 두 모델 모두 유도 후 4 주 후에 영향을받은 사지의 연골 하 뼈 부하 영역에서 골밀도가 증가했음을 나타냅니다. 골괴사의 출현은 DCS 마우스에서 더 두드러졌으며, 개입 2 주 후 DMM 모델에 비해 수와 부피가 크게 증가했습니다. DCS는 내측 경골 및 대퇴 구획에서 연골 손상이 증가하고 유도 4 주 후에 활막염이 나타납니다.
손상은 우리가 의도적으로 영향을 미치고자 하는 구조로 제한되어야 하므로 다른 모든 구조를 그대로 유지하고 연골의 노출을 최소화하기 위해 특별한 주의가 필요합니다. 의도적 인 연골 긁힘을 포함하도록 수정하면 골 형성, 조기 골관절염 또는 부상 통증에 초점을 맞춘 골관절염과 전체 관절에 대한 연골 손상의 영향을 조사 할 수 있습니다.
