权力下放的损害导致子宫内膜疾病的病毒,例如死亡,复发性流产。该方法为子宫内膜分散的研究提供了良好可靠的动物模型。这种人工分散的卵巢切除术模型可以避免安吉丽娜对激素的影响,这通常可以高度可重复的结果,组内差异很小。
在手术前一天开始用高温高压灭菌器对手术器械进行消毒。将保护性眼膏涂抹在眼球上,以防止麻醉期间干燥。当小鼠完全麻醉时开始手术。
将小鼠置于手术表面上的俯卧位置,并在用肥皂水润湿后剃掉背部的毛发。用70%乙醇消毒皮肤。在平行于脊柱的双后肢大腿根部上缘 0.5 厘米处找到手术切口部位。
以切口部位为中心,用碘伏对切口区域消毒三次。用剪刀做一个约0.5到1厘米的纵向切口。切开筋膜并用镊子被动地分开肌肉。
通过薄肌肉层在靠近肾脏下极的切口区域找到一块白色脂肪垫。用止血夹夹住脂肪块,并将脂肪垫包裹的卵巢从切口中拉出。用弯曲的镊子夹住卵巢和输卵管的连接处,并用剪刀沿着卵巢蒂取出卵巢。
使用电凝笔或在酒精灯上加热的一毫升注射器的针头止血。用生理盐水冲洗手术切口以防止组织粘连。使用4-0缝合线分别播种肌肉和皮肤,并再次用碘伏对手术切口进行消毒。
将小鼠置于笼子中的俯卧位置,并在25摄氏度的培养箱中复苏。配备光源和通风系统约两个小时。手术后注意小鼠。
将它们单独放回原来的喂食处,直到它们完全恢复并给它们足够的水和食物。皮下注射100纳克雌激素和50微升芝麻油到每只小鼠中三天,然后休息两天。在50微升芝麻油中向每只小鼠注射1毫克黄体酮和10纳克雌激素,再注射三天。
操作小鼠在第三次雌激素孕酮联合注射后6小时诱导人工残留模型。找到输卵管下端的子宫角,沿子宫角缓慢注入20微升芝麻油。将组织推回,缝合切口,让小鼠恢复。
用嵌入石蜡中的10%福尔马林固定三到五毫升的子宫组织并切片。用苏木精和伊红染色切片以观察形态变化。将另外三到五毫米的子宫组织嵌入最佳切割温度化合物中,在液氮中冷冻并储存在零下80摄氏度的冰箱中。
在10微米内冷冻切片组织,并通过偶氮偶联方法检测子宫组织中的碱性磷酸酶活性。由油诱导的小鼠人工分散子宫的一般形态更接近妊娠期子宫。子宫体变厚,子宫腔比非诱导侧小。
诱导子宫角的体积和重量明显高于非诱导侧。苏木精和子宫组织伊红染色显示,腺体消失,诱导撕裂的子宫内膜末期基质分化为大的圆形细胞质和多核蜕膜细胞,细胞边界不明确。非诱导侧切片显示正常生理状态下的子宫内膜组织形态。
偶氮偶联法结果表明,油诱导侧碱性磷酸酶含量显著高于非诱导侧。QPCR结果显示,PRL-8-A-2、ALPL和IGFBP-1在诱导角中的mRNA表达显著高于非诱导角,表明油可以诱导小鼠人工分散。Homo 補充是一個漫長的過程,需要特別注意 homo 之間的污染,這是成功之鍵。
在此模型的基础上,可以进行子宫角注射腺病毒,研究特定分子调控残留的相关机制。