분권화의 손상은 사망, 재발 성 유산과 같은 자궁 내막 장애의 바이러스로 이어집니다. 이 방법은 자궁 내막 분권화 연구를위한 훌륭하고 신뢰할 수있는 동물 모델을 제공합니다. 난소 절제술을 통한 이 인공 분권화 모델은 호르몬에 대한 안젤리나의 영향을 피할 수 있으며, 이는 종종 그룹 내 사소한 차이로 재현성이 높은 결과를 얻을 수 있습니다.
수술 하루 전에 고온 고압 살균기로 수술 기구의 소독을 시작합니다. 마취 중 건조를 방지하기 위해 안구에 보호용 눈 연고를 바르십시오. 마우스가 완전히 마취되면 수술을 시작하십시오.
마우스를 수술면에 엎드린 자세로 놓고 비눗물로 적신 후 뒤쪽의 머리카락을 면도하십시오. 70 % 에탄올로 피부를 소독하십시오. 척추와 평행 한 양쪽 뒷다리의 허벅지 뿌리 위쪽 가장자리에서 0.5 센티미터의 수술 절개 부위를 찾으십시오.
절개 부위를 중심으로 절개 부위를 iodophor로 세 번 소독합니다. 가위를 사용하여 약 0.5-1 센티미터의 세로 절개를하십시오. 근막을 자르고 핀셋으로 근육을 수동적으로 분리하십시오.
얇은 근육층을 통해 신장의 아래쪽 극에 가까운 절개 부위에서 흰색 지방 패드 조각을 찾으십시오. 지혈 클립으로 지방 덩어리를 고정하고 지방 패드로 감싼 난소를 절개 부위에서 빼냅니다. 구부러진 핀셋으로 난소와 나팔관의 접합부를 고정하고 가위로 난소 척추를 따라 난소를 제거하십시오.
전기 응고 펜이나 알코올 램프에서 가열 된 1 밀리리터 주사기 바늘을 사용하여 출혈을 멈추십시오. 조직 유착을 방지하기 위해 수술 절개 부위를 생리 식염수로 헹굽니다. 4-0 봉합사를 사용하여 근육과 피부를 각각 뿌리고 수술 절개 부위를 다시 iodophor로 소독합니다.
새장에서 엎드린 자세로 마우스를 놓고 섭씨 25도 인큐베이터에서 소생시킵니다. 약 2 시간 동안 광원과 환기 시스템을 갖추고 있습니다. 수술 후 생쥐에주의를 기울이십시오.
완전히 회복될 때까지 원래의 먹이 장소에 혼자 놓고 충분한 물과 음식을 제공하십시오. 참기름 50 마이크로 리터에 에스트로겐 100 나노 그램을 3 일 동안 각 마우스에 피하 주사 한 후 2 일간 휴식을 취하십시오. 1 밀리그램의 프로게스테론과 10 나노 그램의 에스트로겐을 50 마이크로 리터의 참기름에 3 일 동안 각 마우스에 주입하십시오.
마우스를 조작하여 3차 에스트로겐 프로게스테론 복합 주사 후 6시간 후에 인공 잔류 모델을 유도하였다. 나팔관의 하단에서 자궁 뿔을 찾아 자궁 뿔을 따라 천천히 참기름 20 마이크로 리터를 주입하십시오. 조직을 뒤로 밀고 절개 부위를 봉합하고 마우스가 회복되도록합니다.
자궁 조직의 3-5 밀리리터를 파라핀에 포함 된 10 % 포르말린으로 고정하고 절개하십시오. 형태학적 변화를 관찰하기 위해 헤마톡실린과 에오신으로 섹션을 염색합니다. 자궁 조직의 또 다른 3-5 밀리미터를 최적의 절단 온도에 넣고 액체 질소에서 동결시킨 다음 섭씨 영하 80도 냉동고에 보관하십시오.
조직을 10 마이크로미터로 동결절편하고 Azo 커플링 방법에 의해 자궁 조직에서 알칼리성 포스파타제 활성을 검출한다. 기름에 의해 유도 된 생쥐의 인공 분산 자궁의 일반적인 형태는 임신 중 자궁의 형태에 더 가깝습니다. 자궁체가 두꺼워지고 자궁강이 유도되지 않은 쪽보다 작아집니다.
유도 된 자궁 뿔의 부피와 무게는 유도되지 않은 쪽의 부피와 무게보다 훨씬 높습니다. 자궁 조직의 헤마톡실린 및 에오신 염색은 땀샘이 사라지고 유도된 찢어진 자궁내막 말단 기질 세포가 불분명한 큰 원형 세포질 및 다핵 탈락 세포로 분화되는 것을 보여주었다. 유도되지 않은 측면 절편은 정상적인 생리학적 상태 하에서 자궁내막 조직 형태를 보여줍니다.
Azo 커플링법의 결과, 오일 유도측의 알칼리성 포스파타제 함량이 비유도측의 함량보다 유의하게 높은 것으로 나타났다. QPCR 결과는 유도된 뿔에서 PRL-8-A-2, ALPL 및 IGFBP-1의 mRNA 발현이 유도되지 않은 뿔보다 유의하게 높았으며, 이는 오일이 마우스에서 인공 분권화를 유도할 수 있음을 시사합니다. 호모 보충은 성공의 열쇠 인 호모 간의 오염에 특별한주의가 필요한 긴 과정입니다.
이 모델을 기반으로 아데노바이러스의 자궁 뿔 주사를 수행할 수 있으며, 이는 잔류를 조절하는 특정 분자의 관련 메커니즘을 연구할 수 있습니다.
