小鼠粪便分离和微生物群移植

在这里，我们描述了一种协议，以指导其他人调查疾病中生态失调的机制，从收集粪便样本到使用瑞士卷法研究肠道变化。首先，用70%乙醇喷洒安乐死小鼠的胸部和侧面，并小心地打开皮肤和腹膜腔以暴露胃肠道。隔离盲肠，并使用无菌手术剪刀将其切成两半。

短暂暴露盲肠，从回肠近端切开 0.5 厘米，在与结肠的连接处远切 0.5 厘米。将分离的盲肠转移到无菌培养皿上。使用无菌刮刀将盲肠内容物转移到无菌管中，并将等分试样储存在 80 摄氏度的冰箱中。

将新鲜或先前冷冻的粪便颗粒以 1 至 20 的比例重新悬浮在无菌盐水中，并涡旋直至均质化。使匀浆通过 30 微米孔的尼龙过滤器以去除大颗粒物质。以79G离心5分钟，收集上清液用于移植。

口服管饲法，每只无菌受体小鼠连续三天口服100微升浆液，随后每三天管饲一次，持续两周。轻轻地将鼠标放在预热的鼠标支架上的约束装置中，并将尾巴放在外面。小心地用胶带粘住顶部，不要捏住它，以免对鼠标造成压力。

让鼠标放在支架中，然后将其放在尾套机平台上三到五分钟，用一张纸覆盖以适应。使用尾袖体积描记法收集至少三轮收缩压测量值，并平均每只动物的平均收缩压的所有轮次测量值。无菌地从安乐死小鼠中收集盲肠内容物。

为了收获肠道和其他组织，请在小鼠中找到组织，并用剪刀切除它们，以检查肠道微生物群在心脏代谢健康中的作用。第一天，从肛门侧解剖小鼠肠道到胃侧。并将整个分离的胃肠道放入含有PBS的培养皿中。

轻轻地从胃端拉出近端，并用手去除周围的脂肪和结缔组织。分离小肠，并用每个长度制作Z型锯齿形。然后，切割以获得十二指肠、空肠和回肠。

通过切开盲肠下方的肠道部分来分离结肠。切开十二指肠、空肠、回肠和结肠。使用注射器和带球尖的针头小心地冲洗并用PBS清洗肠道，而不会撕裂肠道。

将肠子放在滤纸上，并在纸上标记部分的名称，然后在左上角标记P表示近端，D表示左下角的远端。用球尖剪刀纵向剪肠。打开滤纸上的肠子，并根据需要用更多的PBS清洗。

将肠子夹在两张滤纸之间，并将滤纸钉在肠子附近的四个点或角落。浸泡在 10% 福尔马林中性缓冲溶液中，并在室温下用平台摇杆以 5 rpm 的速度摇匀过夜。在第二天，在蒸馏水中用搅拌棒在覆盖有铝箔的烧杯中加热准备好的 2% 琼脂糖。

要取回组织，请剥离上部滤纸，然后从近端滚动肠道，使近端首先进入内部，然后向内滚动，使腔也位于载玻片内侧。根据需要用一两根 30 号针别针。使用一次性研究生转移移液器吸出一毫升琼脂糖，并将琼脂糖倒在平坦表面上的滚动肠道切片上，同时避免组织中出现气泡。

琼脂糖冷却并凝固后，使用剃须刀片修剪组织切片周围多余的琼脂糖。最后，将肠道切片放入组织处理或包埋盒中，并将它们浸泡在 70% 乙醇中，温度为 4 摄氏度。此处显示了从正常盐饮食和高盐饮食的小鼠获得的盲肠含量中物种生物多样性的估计。

肠道微生物群对高盐的反应变化包括细菌生物多样性的减少。非度量多维缩放表明，来自正常盐和高盐饮食小鼠的细菌形成单独的簇。高盐与厚壁菌与拟杆菌的比率增加有关。

来自高盐喂养小鼠的粪便微生物群移植使无菌小鼠易患血管紧张素II诱导的高血压。与接受正常盐肠道微生物群的小鼠相比，转移高盐诱导的肠道微生物群与无菌小鼠的收缩压显着增加有关。代表性图像显示了从没有或伴有蛋白尿的高脂血症小鼠获得的髂骨中的载脂蛋白A-I染色。

该协议在人类和啮齿动物供体的关键实验考虑因素中调整了实现成功FMT的步骤。