口腔插管和通气肺缺血再灌注手术小鼠模型

通气肺缺血再灌注手术可用于研究多个过程的肺部特异性病理生理学，包括肺移植、肺栓塞和复苏后出血性创伤后的肺损伤。该模型最大限度地减少了肺不张、机械通气和缺氧的炎症贡献。它保持完整的体内循环免疫系统，并允许长期研究。

该模型可以深入了解无菌炎症如何在肺内得到控制和调节。显微外科技术首先需要数小时的练习。在开始之前，仔细的组织和计划很重要。

此外，它可以由安乐死的小鼠最初练习，而不会分散心脏活动及其引起的运动。左侧PA的血瘀使其更容易可视化和操纵。首先，轻轻地将光纤柔性灯放在麻醉小鼠的气管上，略低于声带。

调整照明水平，使在观察小鼠口腔咽部时只看到暗场，除了从声带下方发出的红光。对于插管，用惯用手握住镊子，用它们轻轻握住舌头并将舌头从口腔中拉出。使用非惯用手握住的镊子打开下颌，并将镊子推入喉部以抬起会厌。

此时，从镊子中松开舌头。观察声带。它们应该根据每次呼吸打开和关闭。

在预装导丝的情况下握住套管，将导线尖端插入声带。接下来，要非常小心，不要通过握住套管外但声带上方的一部分来移动电线，撤回套管，只留下电线，其远端在气管内。此时，对声带进行第二次可视化，以确认钢丝远端尖端仍然穿过发光的声带并进入气管，并且不在未点燃的食道中。

接下来，将导线放在嘴外，左手的弯曲镊子稳定在坚硬的表面上，并小心地将带有胶带翅膀的 20 号导管推进到导线上。一旦导线的远端从导管或气管插管的后端出来，用弯曲的镊子握住该端，并将导管平稳地推进到气管中。接下来，用弯曲的镊子小心地从导管的远端取下导线，而不会移开导管的位置。

接下来，在固定之前将导管短暂连接到呼吸机，以确认正确放置在气管而不是食道中。通过观察机械通气依赖性双侧胸壁运动和无胃充气来确认气管放置。插管后，将导管连接到呼吸机上，呼吸机的标题容积为 0.2 至 0.225 毫升，呼吸频率为 120 至 150 次/分钟，以确认口腔插管的气管位置是否正确。

然后断开鼠标通过口腔管自主呼吸。剃掉左胸区到左肩胛骨的小鼠毛发。使用酒精棉签去除多余的剃光头发并对手术区域进行消毒。

然后将鼠标放在左侧或四分之三转动位置的加热垫上。将气管插管连接到呼吸机。在使皮肤切口后，在肌肉层下方插入三个无菌牵开器。

接下来，确定第二个肋间隙并用超细镊子握住第二根肋骨。然后，向上拉肋骨，使用无菌的12号弯曲手术刀刀片通过分离并切割第二至第三空间的肋间肌肉进入复数空间。考虑暂停通气以减少左肺尖损伤。

沿肋骨方向使用最小、最窄的牵开器头，沿第三肋向左使用中等大小的牵开器，沿第二肋骨表面向右使用最大的牵开器。使用弹性牵开器绳索缓慢而渐进地回缩胸部。用无菌棉签或手术海绵移开左肺尖，暴露并识别左肺动脉或 PA。

使用右手的微型镊子超细镊子和左手的PA或血管扩张钳轻轻暴露并创建左侧PA和支气管都可见的区域。使用PA钳，拿起左侧PA并轻轻但牢固地向上拉动，头部以可视化下面的透明支气管。将解剖显微镜上的放大倍数增加到四倍，同时将PA从支气管上收回时，小心地将封闭的超细镊子穿过左PA和支气管之间的空间。

然后用这些镊子握住并拉动 7-0 或 8-0通过上方左肺动脉和下方支气管之间的空间缝合前匕首。接下来，通过打一个滑结来包围左侧 PA，以在 PA 中形成遮挡。此时血流中断很容易可视化，标志着缺血期的开始。使用 24 至 28 号针通过左前胸的不同入口点将结的自由端外部化，并用一小块胶带固定缝合线的末端，以便以后更容易识别。

接下来，在啮齿动物呼吸机上使用正压和呼气压力阀或管道，重新充气肺以将尽可能多的空气排出胸腔。然后，用两条中断的 4-0 尼龙缝合线关闭胸腔，然后关闭肌肉和皮肤层，并应用局部麻醉。断开鼠标与呼吸机的连接，小心地将其放在加热垫上进行术后护理，以在恢复期间保持体温。

确保在鼠标移动过程中清晰地控制和可视化外部化的滑结。在缺血期结束时轻轻拉动外部化的滑结。此处显示了品系C3H和C57黑六的野生型小鼠肺切片的组织学。

经过1小时缺血和3小时再灌注后，两种菌株均观察到肺左组织内强烈的中性粒细胞浸润。然而，与C57黑六相比，C3H菌株显示出明显更高的炎症水平。在左PA和左支气管之间通过单丝期间的错误可能导致未挽救的手术，左PA灾难性出血或左支气管不可逆转的损伤。

这是技术上最具挑战性的步骤，在第一次学习此过程时需要反复练习。再灌注后约1小时或更短时间内，小鼠从肺缺血再灌注手术中恢复后，可在3小时或24至48小时后进行气管内滴注活菌，以模拟缺血再灌注引起的无菌肺损伤后的感染。在缺血再灌注后，也可以以类似的方式在气管内安装其他可以调节无菌炎症的药物。

该技术有助于发现和确认中性粒细胞的逐步运输和激活，以响应肺部的无菌损伤和感染。