间变性甲状腺癌和头颈部鳞状细胞癌患者来源异种移植模型的建立与表征

该协议有助于建立ATC和HNSCC PDX模型，以更好地反映肿瘤异质性，分子多样性并预测临床结果。该技术操作简单，成功率高，也适用于其他PDX型号。该技术可向抗癌药物敏感性筛查延伸，指导癌症患者的个性化治疗。

从未执行过此技术的个人可能会遇到一些困难，建议注意方案的每个细节。在含有无菌HTK溶液的50毫米离心管中获得ATC和HNSCC肿瘤样品后，用75%酒精消毒。使用无菌眼科镊子将肿瘤组织转移到装有盐水的六厘米培养皿中，并使用刀片将它们切成小块。

然后，将碎片转移到含有盐水的新六厘米培养皿中，并用密封膜包裹。将包装好的盘子放入冰盒中，用剪刀、镊子和接种针将其带到无病原体的动物室。麻醉小鼠后，去除右外侧胸部的毛发并用75%酒精消毒该区域。

用剪刀在右外侧胸中间做一个两毫米的切口。用镊子从培养皿中取出组织并将其放入穿刺针中。握住鼠标并收紧穿刺部位的皮肤。

将带有肿瘤片的穿刺器插入皮下间隙的切口中，然后移动到肩膀后部并推动穿刺器核心。要使用无菌纱布保留剩余的组织，请从肿瘤表面去除盐水，确保它不会过度潮湿。将四到六个组织碎片放入两毫升细胞冷冻保存管中，并向管中加入一毫升冷冻保存溶液。

然后，将管子放入梯度冷却箱中，并在零下 80 摄氏度下冷冻过夜。最后，将其转移到液氮中。为了复苏PDX模型肿瘤，请使用游标卡尺每周测量一次皮下肿瘤的长度和宽度。

计算肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线。然后，用剪刀，切割肿瘤周围的安乐死小鼠皮肤。用镊子取出肿瘤并将其放入培养皿中。

如前所述，进行肿瘤移植直到第五代小鼠。选择P5代ATC PDX模型小鼠的肿瘤组织。将其切成两到四立方毫米的碎片。

如前所述，将这些碎片皮下接种到裸体四到六周雌性 BALB/c 小鼠的右后背。当肿瘤生长50至150立方毫米时，将小鼠分为三组。在给予仑伐替尼，顺铂和对照每周两次后，测量小鼠的体重。

另外，测量肿瘤体积。相关性分析表明，ATC PDX模型构建的成功率不依赖于年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤分级和分化。HNSCC PDX模型构建中的肿瘤取药率表明，分化程度与模型成功率相关，其他参数不影响肿瘤取取率。

各PDX模型的肿瘤生长曲线表明，ATC样本稳定传递到P3代，而2例HNSCC样品在传递到P1代后未能形成肿瘤。大多数PDX模型的P0代肿瘤生长速度相对慢于后来的传代，这可能是由于小鼠微环境的适应。组织病理学检查表明，PDX肿瘤保留了原发肿瘤的形态特征。

与对照组相比，仑伐替尼治疗显着抑制肿瘤生长，并且在ATC PDX模型中显示出较低的肿瘤重量。此外，仑伐替尼处理的小鼠在其总重量上没有表现出明显的变化。过量的顺铂剂量导致显着的毒性，体重减轻甚至死亡就是证明。

新鲜肿瘤在切成碎片之前必须用生理盐水洗涤几次。通过活检肿瘤样本与它们混合并接种它们可能会导致肿瘤形成。该模型可用于肿瘤生物学研究、药物筛选、个性化治疗。