Questo protocollo aiuta a stabilire modelli ATC e HNSCC PDX che riflettono meglio l'eterogeneità del tumore, la diversità molecolare e predicono gli esiti clinici. La tecnica è semplice da usare, ha un alto tasso di successo e può essere adatta anche ad altri modelli PDX. Questa tecnica può essere estesa verso lo screening della sensibilità ai farmaci anti-cancro per guidare il trattamento personalizzato del paziente oncologico.
Un individuo che non ha mai eseguito questa tecnica può incontrare alcune difficoltà e si raccomanda di prestare attenzione ad ogni dettaglio dello schema. Dopo aver ottenuto campioni di tumore ATC e HNSCC in una provetta da centrifuga da 50 millimetri contenente soluzione sterile di HTK, disinfettarli con alcol al 75%. Utilizzare una pinza oftalmica sterilizzata per trasferire il tessuto tumorale in una capsula di Petri di sei centimetri piena di soluzione salina e tagliarli a pezzetti usando una lama.
Quindi, trasferire i pezzi in una nuova capsula di Petri di sei centimetri contenente la soluzione salina e avvolgerla con pellicola sigillante. Metti il piatto avvolto in una ghiacciaia, portalo nella stanza degli animali priva di agenti patogeni con forbici, pinze e aghi per inoculazione. Dopo aver anestetizzato il mouse, rimuovere i peli sul torace laterale destro e disinfettare l'area con alcol al 75%.
Usa le forbici per fare un'incisione di due millimetri nel mezzo del torace laterale destro. Con una pinza, prendere il tessuto dalla capsula di Petri e metterlo nell'ago del trocar. Tenere il mouse e stringere la pelle nel sito di puntura.
Inserire il trocar con il pezzo di tumore nell'incisione nello spazio sottocutaneo, quindi spostarsi nella parte posteriore della spalla e spingere il nucleo del trocar. Per riservare il tessuto rimanente utilizzando una garza sterile, rimuovere la soluzione salina dalla superficie del tumore, assicurandosi che non sia eccessivamente bagnata. Mettere da quattro a sei pezzi di tessuto in un tubo di crioconservazione cellulare da due millilitri e aggiungere un millilitro di soluzione di crioconservazione nel tubo.
Quindi, posizionare il tubo in una scatola di raffreddamento a gradiente e congelarlo a meno 80 gradi Celsius durante la notte. Infine, trasferirlo in azoto liquido. Per rianimare i tumori modello PDX, utilizzare i calibri Vernier per misurare la lunghezza e la larghezza del tumore sottocutaneo una volta alla settimana.
Calcola il volume del tumore e disegna la curva di crescita del tumore. Quindi, usando le forbici, tagliare la pelle di topo eutanasia che circonda il tumore. Rimuovere il tumore con una pinza e metterlo in una capsula di Petri.
Eseguire il trapianto di tumore fino alla quinta generazione di topi, come precedentemente dimostrato. Selezionare il tessuto tumorale di un topo modello ATC PDX di generazione P5. Taglialo in due o quattro pezzi di millimetri cubi.
Inoculare questi pezzi per via sottocutanea come precedentemente dimostrato, sul dorso destro di un topo BALB / c femmina nudo da quattro a sei settimane. Quando il tumore cresce da 50 a 150 millimetri cubici, dividere i topi in tre gruppi. Dopo aver somministrato lenvatinib, cisplatino e controllo due volte a settimana, misurare il peso corporeo del topo.
Inoltre, misurare il volume del tumore. L'analisi di correlazione mostra che il tasso di successo della costruzione del modello ATC PDX non dipendeva dall'età, dal sesso, dal diametro del tumore, dal grado tumorale e dalla differenziazione. Il tasso di prelievo del tumore nella costruzione del modello HNSCC PDX ha dimostrato che il grado di differenziazione era associato al tasso di successo del modello, mentre gli altri parametri non influenzavano il tasso di prelievo del tumore.
Le curve di crescita tumorale per ciascun modello PDX hanno illustrato che i campioni ATC sono stati stabilmente passati alla generazione P3, mentre due casi di campioni HNSCC non sono riusciti a formare tumori dopo essere passati alla generazione P1. Il tasso di crescita tumorale della generazione P0 per la maggior parte dei modelli PDX è stato relativamente più lento rispetto ai passaggi successivi, probabilmente a causa dell'adattamento del microambiente murino. L'esame istopatologico ha dimostrato che i tumori PDX mantengono le caratteristiche morfologiche dei tumori primitivi.
Il trattamento con lenvatinib ha inibito significativamente la crescita tumorale e ha mostrato un peso tumorale inferiore nel modello ATC PDX rispetto al gruppo di controllo. Inoltre, i topi trattati con lenvatinib non hanno mostrato cambiamenti visibili nel loro peso complessivo. L'eccessivo dosaggio di cisplatino ha provocato una tossicità significativa, come evidenziato dalla perdita di peso e persino dalla morte.
I tumori freschi devono essere lavati più volte con soluzione salina normale prima di essere tagliati a pezzi. La miscelazione mediante campioni tumorali sottoposti a biopsia e inocularli causerà probabilmente la formazione di tumori. Questo modello può essere utilizzato per la ricerca sulla biologia tumorale, lo screening farmacologico, la terapia personalizzata.
