胃粘膜定量聚合酶链反应分析检测 幽门螺杆菌 和抗生素耐药性

本研究使用胃粘膜上的 QPCR 快速检测幽门螺杆菌及其抗生素耐药性，为治疗这种感染提供了一种快速、准确的诊断工具，具有重要的临床意义。确保 QPCR 的造影剂质量标准至关重要。因此，用于检测幽门螺杆菌的 QPCR IC 符合特定标准，并且必须同时满足每个条件。

早期偏差使需要重新运行的测试无效。我们需要一个强大而全面的诊断工具来检测幽门螺杆菌和耐药性。我们使用胃粘膜 QPCR。

为此，我们使用特定的引物。我们相信，未来针对更大患者群体的研究将验证并实现胃粘膜 QPCR 的全部潜力，从而加强幽门螺杆菌的诊断、监测和治疗。首先，打开活检夹阀并将其缓慢移动到惯用手。

当镊子头部在视野内时，打开夹瓣并在采样部位的胃粘膜处作内窥镜。轻轻按压并关闭活检钳以夹住胃粘膜组织。使用钳子提取组织样品并将其放入装有保存液的采样管中。

采样完所有站点后，拧紧采样管盖并密封以防止干燥。在管子外面用唯一的标识号标记。尽快将采集的样本提交检测，避免储存。

提前将金属浴的温度调节到 100 摄氏度。如果样品被冷冻，请将其取出，并使其达到室温。充分混合裂解物以悬浮氨基二乙酸树脂。

将 100 μL 裂解物放入带滤芯的离心管中，加入胃粘膜。使用涡旋振荡混合内容物。将离心管放入 100 摄氏度的金属浴中 10 分钟。

加热后，取出试管，让它冷却至室温。将样品以 9， 500 G 离心 5 至 10 分钟，然后小心地将上清液转移到另一个灭菌标记的离心管中。如果不立即进行下一步，请将样品暂时储存在 4 摄氏度。

从试剂盒中取出引物探针、混合酶溶液和检测缓冲液。将所有成分在冰上或 2 到 8 摄氏度下融化。要混合样品，请轻轻摇动样品并低速进行短暂离心。

混合 12.5 μL 检测缓冲液、7 μL 引物探针和 0.5 μL 酶溶液。混合试管中的内容物并短暂离心。分装 20 μL PCR 反应溶液，并向每个 PCR 反应孔中加入 5 μL 核酸。

将反应管插入荧光 PCR 热循环仪中。设置循环参数并运行程序。在 58 摄氏度下收集所需标记物的荧光信号。

反应后，保存数据并使用特定的 QPCR 软件进行分析。QPCR 检测证实样品 A、B、C 和 E 中存在幽门螺杆菌，而样品 F 检测呈阴性。样品 A 对两种抗生素都敏感。

样品 B 对克拉霉素和左氧氟沙星均表现出耐药性。样品 C 显示对克拉霉素耐药，但仍然对左氧氟沙星敏感。样品 E 对左氧氟沙星耐药，但对克拉霉素敏感。