ניתוח תגובת שרשרת פולימראז כמותית של רירית הקיבה לאיתור הליקובקטר פילורי ועמידות לאנטיביוטיקה

מחקר זה משתמש ב-QPCR על רירית הקיבה כדי לזהות במהירות הליקובקטר פילורי, ואת העמידות שלו לאנטיביוטיקה, ומציע כלי אבחון מהיר ומדויק עם משמעות קלינית רבה לטיפול בזיהום זה. זה קריטי להבטיח תקני ניגודיות איכותיים עבור QPCR. כתוצאה מכך, ה-QPCR IC לגילוי הליקובקטר פילורי מוחזק בקריטריונים ספציפיים, ויש לעמוד בכל תנאי בו זמנית.

סטייה מוקדמת מבטלת את המבחן הדורש הפעלה חוזרת. אנו זקוקים לכלי אבחון רב עוצמה ומקיף לאיתור הליקובקטר פילורי ועמידות לתרופות. אנו משתמשים ב- QPCR של רירית הקיבה.

אנו משתמשים בפריימרים ספציפיים למטרה זו. אנו מאמינים שמחקרים עתידיים עם קבוצות חולים גדולות יותר יאמתו ויממשו את מלוא הפוטנציאל של QPCR ברירית הקיבה, וישפרו את האבחון, הניטור והטיפול בהליקובקטר פילורי. כדי להתחיל, פתח את שסתום מהדק הביופסיה והעביר אותו לאט ליד הדומיננטית.

כאשר ראש המלקחיים נמצא בשדה הראייה, פתח את דש המהדק ותפעל את האנדוסקופ ברירית הקיבה של אתר הדגימה. הפעל לחץ קל וסגור את מלקחיים הביופסיה כדי להדק את רקמת רירית הקיבה. בעזרת צבת, מחלצים את דגימות הרקמה ומניחים אותן בצינור הדגימה המכיל נוזל שימור.

לאחר שנדגמו כל האתרים, הדק את מכסה צינור הדגימה ואטום אותו כדי למנוע התייבשות. סמן את הצינורות עם מספר זיהוי ייחודי מבחוץ. הגש את הדגימות שנאספו לבדיקה בהקדם האפשרי, הימנע מאחסון.

התאם מראש את הטמפרטורה של אמבט מתכת ל 100 מעלות צלזיוס. אם הדגימה קפואה, הסר אותה ואפשר לה להגיע לטמפרטורת החדר. מערבבים היטב את הליזאט כדי להשעות את שרף החומצה האמינודיאצטית.

קח 100 מיקרוליטר ליזט לצינור צנטריפוגה עם אלמנט פילטר, והוסף רירית קיבה. מערבבים את התוכן באמצעות תנודת מערבולת. הניחו את צינור הצנטריפוגה באמבט המתכת בחום של 100 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות.

לאחר החימום, הסר את הצינור ותן לו להתקרר לטמפרטורת החדר. צנטריפוגה את הדגימה ב-9,500 גרם למשך חמש עד 10 דקות, והעבירו בזהירות את הסופרנטנט לתוך צינור צנטריפוגה מעוקר אחר. אם לא תמשיך מיד לשלב הבא, אחסן זמנית את הדגימה בארבע מעלות צלזיוס.

הסר את בדיקת הפריימר, תמיסת האנזים המעורבת ומאגר הזיהוי מהערכה. ממיסים את כל הרכיבים על קרח, או בשתיים עד שמונה מעלות צלזיוס. כדי לערבב את הדגימות, יש לנער אותן בעדינות ולבצע צנטריפוגה קצרה במהירות נמוכה.

מערבבים 12.5 מיקרוליטר של מאגר זיהוי, שבעה מיקרוליטר של בדיקת פריימר ו-0.5 מיקרוליטר של תמיסת אנזים. מערבבים את התוכן בצינור וצנטריפוגה קצרה. הוציאו 20 מיקרוליטר מתמיסת תגובת ה-PCR והוסיפו חמישה מיקרוליטרים של חומצת גרעין לכל תגובת PCR היטב.

הכנס את צינור התגובה לתוך התרמו-סייקלר הפלואורסצנטי PCR. הגדר את פרמטרי המחזור והפעל את התוכנית. אסוף אותות פלואורסצנטיים ב-58 מעלות צלזיוס עבור הסמנים הרצויים.

לאחר התגובה, שמור את הנתונים ונתח אותם באמצעות תוכנת QPCR ספציפית. מבחני ה-QPCR אישרו את נוכחותו של הליקובקטר פילורי בדגימות A, B, C ו-E, בעוד שדגימה F נמצאה שלילית. דגימה א' הייתה רגישה לשתי האנטיביוטיקות.

דגימה B הראתה עמידות הן לקלריתרומיצין והן ללבופלוקסצין. דגימה C הראתה עמידות לקלריתרומיצין, אך נותרה רגישה ללבופלוקסצין. דגימה E הייתה עמידה ללבופלוקסצין, אך רגישה לקלריתרומיצין.