Este estudio utiliza la QPCR en la mucosa gástrica para detectar rápidamente Helicobacter pylori y su resistencia a los antibióticos, ofreciendo una herramienta diagnóstica rápida, precisa y de gran importancia clínica para el tratamiento de esta infección. Es fundamental garantizar estándares de contraste de calidad para QPCR. En consecuencia, el IC de QPCR para la detección de Helicobacter pylori se mantiene según criterios específicos, y cada condición debe cumplirse simultáneamente.
La desviación temprana invalida la prueba que requiere una repetición del proceso. Necesitamos una herramienta diagnóstica potente y completa para detectar el Helicobacter pylori y la resistencia a los fármacos. Utilizamos la mucosa gástrica QPCR.
Utilizamos imprimaciones específicas para este fin. Creemos que los estudios futuros con grupos de pacientes más grandes validarán y realizarán todo el potencial de la QPCR de la mucosa gástrica, mejorando el diagnóstico, el seguimiento y el tratamiento de Helicobacter pylori. Para comenzar, abra la válvula de pinza para biopsia y muévala lentamente hasta la mano dominante.
Cuando la cabeza de las pinzas esté en el campo de visión, abra la solapa de pinza y manipule el endoscopio en la mucosa gástrica del sitio de muestreo. Aplique una ligera presión y cierre las pinzas de biopsia para sujetar el tejido de la mucosa gástrica. Con unos alicates, extraiga las muestras de tejido y colóquelas en el tubo de muestreo que contiene líquido de conservación.
Una vez que se hayan muestreado todos los sitios, apriete la tapa del tubo de muestreo y séllela para evitar que se seque. Etiquete los tubos con un número de identificación único en el exterior. Envíe las muestras recolectadas para su análisis lo antes posible, evitando el almacenamiento.
Ajuste la temperatura de un baño de metal a 100 grados centígrados con anticipación. Si la muestra está congelada, retírela y deje que alcance la temperatura ambiente. Mezclar bien el lisado para suspender la resina de ácido aminodiacético.
Tome 100 microlitros de lisado en un tubo de centrífuga con un elemento filtrante y agregue la mucosa gástrica. Mezcle el contenido usando oscilación de vórtice. Coloque el tubo de centrífuga en el baño de metal a 100 grados centígrados durante 10 minutos.
Después de calentar, retire el tubo y deje que se enfríe a temperatura ambiente. Centrifugue la muestra a 9.500 g durante cinco a 10 minutos y transfiera cuidadosamente el sobrenadante a otro tubo de centrífuga marcado esterilizado. Si no continúa con el siguiente paso inmediatamente, almacene temporalmente la muestra a cuatro grados centígrados.
Retire la sonda de cebado, la solución enzimática mezclada y el tampón de detección del kit. Derrita todos los componentes en hielo, o a dos u ocho grados centígrados. Para mezclar las muestras, agítelas suavemente y realice una breve centrifugación a baja velocidad.
Mezcle 12,5 microlitros de tampón de detección, siete microlitros de sonda de cebador y 0,5 microlitros de solución enzimática. Mezcle el contenido en el tubo y centrifugue brevemente. Dispensar 20 microlitros de la solución de reacción de PCR y añadir cinco microlitros de ácido nucleico en cada pocillo de reacción de PCR.
Inserte el tubo de reacción en el termociclador fluorescente de PCR. Configure los parámetros del ciclo y ejecute el programa. Recoja señales de fluorescencia a 58 grados Celsius para los marcadores deseados.
Después de la reacción, guarde los datos y analícelos utilizando un software QPCR específico. Los ensayos de QPCR confirmaron la presencia de Helicobacter pylori en las muestras A, B, C y E, mientras que la muestra F resultó negativa. La muestra A fue susceptible a ambos antibióticos.
La muestra B mostró resistencia tanto a la claritromicina como a la levofloxacina. La muestra C mostró resistencia a la claritromicina, pero sigue siendo susceptible al levofloxacino. La muestra E fue resistente a levofloxacino, pero susceptible a claritromicina.
