Method Article
Orthotopen Tiermodellen von Eierstockkrebs zu replizieren besser menschlicher Erkrankungen und damit zu unserem Verständnis der Tumorprogression und Ansprechen des Tumors auf die Therapie. Ein Maus-Modell erhält eine intrabursalen Injektion von Luciferase-exprimierenden Eierstock-Tumorzellen. Die Behandlung erfolgt über eine orale Sonde verabreicht. Das Tumorwachstum wird durch Überwachung In vivo Imaging-System.
Krebs beim Menschen und Ansprechen auf die Therapie ist besser in orthotopen Tiermodellen vertreten. Dieser Beitrag beschreibt die Entwicklung eines orthotopen Mausmodell von Eierstock-Krebs, Behandlung von Krebs über die orale Verabreichung von Medikamenten und Überwachung von Tumorzellen Verhalten als Reaktion auf medikamentöse Behandlung in Echtzeit mit in-vivo-Imaging-System. In diesem orthotopen Modell sind Ovarialtumor Zellen, die Luciferase topisch durch die Injektion direkt in der Maus Bursa, wo jeder Eierstock ist beigefügt angewendet. Nach Injektion von D-Luciferin, ein Substrat der Glühwürmchen-Luciferase, Luciferase-exprimierenden Zellen zu generieren Biolumineszenz-Signale. Dieses Signal wird durch die in-vivo-Imaging-System erkannt und kann für eine nicht-invasive Mittel zur Überwachung des Tumorwachstums, Verteilung und Regression in einzelnen Tieren. Drug Administration über eine orale Sonde ermöglicht eine maximale Dosierung Volumen von 10 ml / kg Körpergewicht, um direkt in den Magen abgegeben werden und ähnelt Abgabe von Medikamenten in der klinischen Behandlungen. Daher beschriebenen Techniken hier, Entwicklung eines orthotopen Mausmodell des Ovarialkarzinoms, die orale Verabreichung von Medikamenten, und in-vivo-Bildgebung, zum besseren Verständnis des menschlichen Ovarialkarzinoms und Behandlung nützlich und verbessert gezielt diese Krankheit.
I. Herstellung von Eierstockkrebs Tumor Cells
II. Intrabursalen Injection
Dieses Verfahren erfordert Unterstützung durch eine zweite Person. Alle chirurgischen Eingriffen unter aseptischen Bedingungen durchgeführt. Dazu gehört das Tragen chirurgische Kleidung und mit sterilen chirurgischen Instrumenten, Spritzen und Nadeln.
III. Orale Gabe Verwaltung
IV. In Vivo Imaging
Wir nutzen die Caliper Life Sciences, um das Verhalten von Zellen in intrabursalen Hohlraum injiziert zu überwachen. Versuche mit diesem System haben in der Regel einen Zeitraum von 4 ~ 16 Wochen ab dem Zeitpunkt der Tumor-Implantation.
V. repräsentative Ergebnisse
Abbildung 1. In-vivo-Bildgebung von Eierstock-Tumor-Zellen in einem orthotopen Mausmodell. OVCAR5 Zellen, die Luciferase wurden intrabursally in rechten Eierstock injiziert und bebildert über die Zeit. Die Bilder wurden 13 (links), 17 (Mitte) und 22 (rechts) übernommen Tage nach der Injektion mit der IVIS Spectrum Imaging-System. Dorsalseite ist im oberen Bedienfeld angezeigt und Bauchseite ist in unteren Bereich. Beachten Sie, dass die peritoneale Ausbreitung von Tumorzellen 22 Tage nach der Injektion.
Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften her von Institutional Tiere Fox Chase Cancer Center der Pflege und Nutzung Ausschusses durchgeführt.
Eierstockkrebs ist die häufigste Todesursache unter allen gynäkologischen Malignomen 1. Die hohe Sterblichkeit dieser Erkrankung ist vor allem aufgrund der späten Diagnose und der Mangel an zuverlässigen Diagnoseverfahren 2. Darüber hinaus konventionellen Chemotherapie häufig Begegnungen Chemoresistenz und Rückfall des Cancer 3. Daher ist neuer Therapeutika benötigt, um effektiv Ziel dieser Krankheit. In der Entwicklung neuer Therapien gezielt menschliche Eierstock-Krebs ist es entscheidend, um eine repräsentative Tiermodell zu entwickeln.
Ein orthotopen Tiermodell hat Vorteile gegenüber herkömmlichen Xenograft-Modellen (zB subkutane oder intraperitoneale Injektionen von Tumorzellen) in die 1) es gibt den primären Ort der Tumorbildung, 2) er stellt gemeinsamen Standort von Metastasen, und 3) bietet Tumorzellen Interaktion mit den entsprechenden Mikroumgebung 4, 5, 6, 7, 8. Nagetiere haben eine einzigartige bursal Membran, die den Eierstock umgibt und ist kontinuierlich mit den Eileiter. Diese einzigartige Anatomie der Nager ermöglicht Injektion von Eierstock-Tumorzellen orthotop. Intrabursally injiziert Ovarialtumor Zellen verhalten sich ähnlich wie beim Menschen eine Krankheit, und wuchs damit im intrabursalen Membran und Ausbreitung in Bauchhöhle als Tumor fortschreitet. Die Injektion von Zellen stabil exprimiert Luciferasen oder fluoreszierende Proteine erlaubt auch die Verfolgung Verhalten von Tumorzellen in Echtzeit. Bioluminescent und / oder Fluoreszenz-Imaging-Technologie macht es möglich, immer wieder Bild Tumorzellen über einen längeren Zeitraum und studieren das Tumorwachstum,-verteilung und Regression in nicht-invasive Weise 9, 10, 11.
Bei der Festlegung der orthotopen Modell, ist es wichtig, schnell zu entfernen, die Nadel aus der Bursa nach der Injektion. Abrupte Entfernen der Nadel verschließt die Einstichstelle und verhindert das Austreten von injizierten Zellen. Doch zur gleichen Zeit sollte die Bewegung sanft sein nicht auf die Bursa reißen. Bei Entweichung während der Injektion kann es Zellen, die Samen in den Bauch verursachen und möglicherweise verwirren die Studie, dh vorzeitige Verbreitung außerhalb des Eierstocks. In diesem Fall sollte die spezifische Tier erfasst und verfolgt für die Entwicklung mehrerer Tumor-Websites in das Bauchfell vor der Behandlung oder alternativ aus den nachfolgenden Analysen ausgeschlossen. Vor der Durchführung eine orale Sonde, ist es entscheidend, die Länge der Sonde Rohr durch Messung von der Spitze den Kopf des Tieres bis zur letzten Rippe zu überprüfen. Es ist hilfreich, das Rohr an der Nase des Tieres Zeichen und geben sie nicht die Röhre Vergangenheit dieser Marke. Insertion des Tubus Vergangenheit dieser Kennzeichnung können in eine Perforation in den Magen führen. Die Bestimmung der Länge der Röhre ist besonders wichtig bei jüngeren Tieren oder Tieren mit einem Gewicht von unter 20 g. Beim Einsetzen des Magensonde Nadel durch die Speiseröhre, sollte es keinen Widerstand oder Kampf aus dem Tier sein. Es ist wichtig, nicht die Lösung oder Suspension zu schnell zu verwalten, da dies zum Rückfluss führen kann und in der Folge zu liefern ungenaue Dosis-Volumen-sowie das Hinzufügen Stress für das Tier. Für vergleichbare Bildergebnisse von Zeit zu Zeit ist es wünschenswert, damit die Zeit konsistent zwischen Injektion von Luciferase-Substrat-und Imaging. Der Zeitablauf kann, indem Reihe von Bildern nach Substrat-Einspritzung und beobachten die Kinetik der Signale bestimmt werden. Entwicklung eines orthotopen Mausmodell des Ovarialkarzinoms, die orale Verabreichung von Medikamenten, und in-vivo-Bildgebung erforderlich sind Techniken zum besseren Verständnis der Entstehung und Ausbreitung von Eierstockkrebs und Bewertung neuer Therapieschemata, die letztlich zu verbessern kann das Ergebnis der Patienten mit dieser tödlichen Krankheit.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Ketamine Hydrochloride | Vedco, Inc. | Not Available | |
Xylazine Hydrochloride | Lloyd, Inc. | Not Available | |
Acepromazine | Vedco, Inc. | Not Available | |
D-Luciferin Potassium Salt | ![]() | 122796 |
Genehmigung beantragen, um den Text oder die Abbildungen dieses JoVE-Artikels zu verwenden
Genehmigung beantragenThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. Alle Rechte vorbehalten