Technik zu pilzförmigen (Taste) Papillen aus menschlichen Zunge sammeln

Zusammenfassung

Die Kenntnis der zugrunde liegenden molekularen Mechanismen Geschmacks Transduktion hat kürzlich bedeutende Fortschritte genossen, vor allem aufgrund der Verwendung von Tiermodellen. Doch die große Vielfalt in Geschmack Sensitivität und Spezifität bei Säugetieren Optionsscheinen Studien in menschlichem Gewebe. Wir beschreiben eine Biopsie-Technik auf lebende Geschmack Zellen aus der Papillen auf die menschliche Zunge zu sammeln.

Zusammenfassung

Der Geschmackssinn ist von entscheidender Bedeutung für das menschliche Leben. Er informiert den Körper über die Qualität von Lebensmitteln, die möglicherweise verschluckt werden und regt Stoffwechselprozesse, die den Verdauungstrakt Vorbereitung für die Verdauung. Stetige Fortschritte auf dem Weg zu Verständnis der frühen biochemischen und molekularen Ursachen Geschmack Transduktion (für eine Übersicht, Breslin und Spector, 2008 ¹⁾ hergestellt. Allerdings hat die bisherigen Fortschritte im Wesentlichen aus Tiermodellen geführt. Doch, da deutliche Unterschiede in der Rezeptor-Spezifität und Rezeptor-Dichte zwischen den Arten variieren, wird die menschliche Geschmack Transduktion nur mit menschlichen Geschmack Gewebe verstanden werden. Hier beschreiben wir eine Biopsie-Technik für die menschliche pilzförmigen Papillen, sichtbar als runde rosa vorderen Strukturen, etwa 0,5 mm im Durchmesser zu sammeln, die Geschmacksknospen enthalten. Diese biopsiert Papillen sind für verschiedene Zwecke einschließlich der Trennung von lebensfähigen Geschmacksknospe Zellen in situ Hybridisierung, Immunhistochemie und durch Techniken der Molekularbiologie, die Identifizierung des Geschmacks-spezifische neuartige Proteine ​​verwendet.

Protokoll

1. Einführung und Allgemeines

Das allgemeine Verfahren umfasst örtlicher Betäubung eine kleine (1 cm ²⁾ Gebiet der dorsalen Oberfläche der vorderen Zunge, durch Entfernung einer Anzahl (6-8) des pilzförmigen (Geschmacks-) Papillen aus, dass anästhesierten Bereich mit einer gekrümmten Feder micro gefolgt -Schere (McPherson-Vannas Art # SR 5603, Roboz, Rockville, MD). Die entfernten pilzförmigen Papillen sind etwa 0,25 mm ³ je. Es gibt sehr wenig nicht-Papillen (Geschmack) Epithelgewebe zusammen mit jeder Papille entfernt. New Papillen bilden in diesem Bereich nach 3 bis 5 Wochen und wieder funktionierende Geschmacksknospen (Spielman und Brand, unveröffentlichte Beobachtungen). Es gibt keinen spürbaren Einfluss auf Geschmack oder Aroma von Lebensmitteln nach dem Entfernen dieser geringen Menge des Geschmacks Material. Aus Studien, dass die einzelnen Geschmacksknospen gezählt haben im erwachsenen menschlichen Zunge, kann man davon ausgehen, dass die menschliche Zunge etwa 5000 Geschmacksknospen enthalten sein. Unser Verfahren entfernt höchstens 20 bis 25 dieser Geschmacksknospen (im Durchschnitt ~ 3,5 bis 4 Geschmacksknospen pro pilzförmigen Papillen in menschlichen) ^2, oder etwa 0,4% der Gesamtzahl. Darüber hinaus gibt es keine Schmerzen, die mit der chirurgischen Verlust dieses Gewebe verbunden. Man fühlt sich natürlich leichte Schmerzen an der Injektionsstelle nur, wie die Nadel in die Zunge. Nach der Anästhesie abgeklungen ist, gibt es gelegentlich leichte Beschwerden seit weniger als einem Tag, aber dieses Unbehagen ist viel weniger als das, was man erlebt, nachdem versehentlich "Beißen" Einsen Zunge.

In den vergangenen Jahren haben wir ein alternatives Verfahren, das keine Anästhesie entwickelt. Die Technik für die Gewebeentnahme ist für beide. Der einzige Unterschied in der Vorgehensweise ist, dass der Chirurg nicht mehr um eine 1 cm ² Durchmesser Bereich, wo die Narkose gerichtet war beschränkt. Vielmehr kann er / sie jedem Standort auf der dorsalen Oberfläche der Zunge, wo prominente Papillen erscheinen zu wählen. Die Gesamtzahl der entfernten Papillen auf 6-8 sind in beiden Techniken beschränkt, mit oder ohne Betäubung Wenn richtig durchgeführt, ist das Unbehagen zu beseitigen 6-8 pilzförmigen Papillen Geschmack als weniger ein Problem, wenn die Schmerzen mit der Verwaltung der zugehörigen Vergleich Lokalanästhesie Eine allgemeine Befragung von Personen, die beiden Verfahren unterzogen, das heißt, mit und ohne Anästhesie, zeigten, dass eine überwältigende Mehrheit der Untertanen würden ohne Lokalanästhesie in alle künftigen Biopsien verzichten. Der Chirurg, der diese Technik (AIS) und mehrere Kollegen von der Autorin, die Biopsien ohne Narkose durchgeführt gelehrt entwickelt, haben es an sich selbst ausprobiert und bezeugen, dass die Beschwerden nur vorübergehend ist und wird als geringer als die von Beißen der Zunge. Schließlich wurden Dutzende von Personen, die Biopsie vereinbart werden gefragt, ob sie bereit wären, um das Entfernen einer Papille ohne Betäubung versuchen und wenn sie es als zu schmerzhaft, sie würden Anästhesie unterziehen zu urteilen, haben alle zugestimmt, mit der Entfernung der Papillen, ohne weiter Anästhesie.

Die gesamte Biopsie sollte nicht länger als 5-10 Minuten. Ist eine Betäubung eingesetzt weitere 2-3 Minuten zugegeben. Die Biopsie ist in der Regel in den Morgenstunden durchgeführt. Vor Biopsie, sind Freiwillige angewiesen, eine leichte Mahlzeit zwei Stunden vor dem geplanten Beginn zu essen. Bei Biopsie ist eine schriftliche Einverständniserklärung erhalten. Ausschlusskriterien bei der Biopsie umfassen solche mit schweren chronischen Erkrankung, sei es durch Medikamente kontrolliert werden oder nicht (zB keine Magen-Darm-Erkrankungen, neurodegenerative Erkrankungen, Krebs, Blutkrankheiten, Allergie gegen die Lokalanästhetika, etc.) die mit Herzfrequenz größer als 100 oder weniger als 60; systolischer Blutdruck höher als 145 oder weniger als 100; diastolischen Blutdruck von mehr als 90 oder weniger als 60, und die Meinung des Chirurgen, die das Subjekt in der Studie teilzunehmen.

Schließlich ist es wichtig zu berücksichtigen, dass die Biopsie Verfahren sollten in der gleichen Anlage, bei der Gewebe zur Untersuchung verarbeitet werden, da Gewebe Integrität schnell verloren geht, wie wir oft durch die nachlassende Qualität der mRNA haben festgestellt, durchgeführt werden. Um diese Probleme zu minimieren die Zunge Gewebe sollte so schnell wie möglich verarbeitet werden.

2. Betreff Vorbereitung

1. Das Thema wird in einem Behandlungsstuhl oder einem Sitz mit Kopfstütze sitzt.
2. Überprüfen Sie die Herzfrequenz und Blutdruck zum Zeitpunkt der Biopsie. Sollte das Motiv fallen außerhalb der Reichweite von Blutdruck, Herzfrequenz oder mündliche Kompetenz, empfiehlt der Chirurg das Thema, das er / sie sofort Termin vereinbaren, um einen Arzt zu sehen.
3. Kontrollieren Sie die Mundhöhle für allgemeine Gesundheits-Gewebe, mit viel Liebe zum Anzeigen von Xerostomie, geografische Zunge oder Zunge Läsionen. Jedes Thema Anzeichen von Erkrankungen der Mundhöhle, einschließlich Zunge Läsionen oder Xerostomie sind von der Studie ausgeschlossen. Weisen Sie das Thema in den Mund mit Wasser ausspülen, um alle Verschmutzungen aus der mündlichen Cavit entferneny. Bei Bedarf ist die Zunge mit einem Einweg-Zunge scrapper, um die Plaque oder Schmutz zu entfernen, die in die Zunge während der Injektion der Narkose durchgeführt werden könnte gereinigt. Der Chirurg verwendet steriler Gaze-Pads in einer behandschuhten Hand an der vorderen Viertel der Zunge zu halten, wie es aus der Mundhöhle erstreckt.
4. Ist eine Betäubung verwendet, ein 1cc Tuberkulin-Spritze mit einer 28 Gauge x ½ "Nadel mit 0,25 ml Lidocain (2%) mit Adrenalin (1:100.000) wird langsam zu einem Ort direkt unter der dorsalen Oberfläche des vorderen Teils der Zunge gespritzt . Die Website der Anästhesie ist distal der Sammelstelle, um Störungen durch die Lidocain mit nachfolgenden Studien zu vermeiden. Zum Vergleich ist die Menge von Lidocain injiziert (0,25 ml) etwa ein Viertel der Menge in der Regel für Nerven-Block in zahnärztlichen Eingriffen (0,8 ml bis 1 ml) gegeben. Nach dem Einführen der Nadel, sondern vor der Injektion des Betäubungsmittels sorgt Aspiration, dass kein Blutgefäß getroffen wird. Diese Vorsichtsmaßnahme getroffen wird, obwohl es anatomisch unwahrscheinlich, dass ein großes Schiff in der Nähe der dorsalen Oberfläche geschlagen werden soll. Die einzige Arterien auf der Dorsalseite sind die dorsalen lingual Arterien kleinen Blutgefäße in erster Linie liegt mehr hinter dem vorderen Drittel, wo das Gewebe der Ernte stattfindet. Je größer lingual Arterien und Venen der lingualen auf der ventralen Oberfläche der Zunge laufen, weit weg von der dorsalen Fläche erhalten Betäubung ³ entfernt. Die 1 cm anästhesierten Gebiet zu sein scheint etwas blass im Vergleich mit dem umgebenden Gewebe. Dies ist aufgrund der Schwellung des Gewebes, wie es die kleinen Blutgefäße komprimiert. Es ist auch wegen der vasokonstriktorischen Wirkung des Adrenalins. Nach etwa einer Minute wird eine Sonde verwendet, um den Bereich für Taubheit testen. Wenn das Gebiet ist nicht taub, kann eine zweite Injektion (0,1-0,2 mL) gegeben werden.

3. Zungenpapillen Removal Technique

1. Die vorderen Viertel der Zunge des Themas ist in steriler Gaze umwickelt (Abbildung 1) und hielt in der linken Hand des Chirurgen (wenn die Durchführung der Biopsie mit der rechten Hand). Eine Ecke des Gaze wird offen gelassen, damit der Chirurg auf die Zunge frei von Speichel abzuwischen. Die Zunge muss festgehalten werden, aber natürlich nicht, um unnötige Beschwerden verursachen. Die Spitze des Zeigefingers der linken Hand unter die Zunge direkt unter der Stelle, wo die Biopsie durchgeführt positioniert. Durch Drücken der Zeigefinger nach oben, wird die Zunge erstreckte sich über die Spitze des Fingers machen den Papillen ragen leicht Biopsie.
2. Kriterien für die Auswahl Papillen für die Biopsie: Geschmack Papillen sind leicht zu unterscheiden von den umliegenden filliform Papillen durch ihre Form und Größe. Pilzförmigen Papillen sind rund und etwas isoliert von der Umgebung. In ihrer unmittelbaren Nachbarschaft gibt es einen kreisförmigen Raum ohne filliform Papillen (2A, blaue Pfeile). Dieser Raum ist etwa 1 mm im Durchmesser. Ein weiteres Merkmal der pilzförmigen Papillen ist eine erweiterte Kapillare Verzweigung sichtbar oben auf den meisten pilzförmigen Papillen der jungen Probanden. Obwohl Verzweigung vereinfacht das Auffinden von pilzförmigen Papillen zu erleichtern, sind sie nicht unbedingt gute Prädiktoren für die Existenz von Geschmacksknospen in die Papille. In der Regel beginnt man die Ernte zum vorderen Ende und bewegt sich weiter weg von der Spitze der Zunge, um jede Kapillare Blutungen aus Verschleierung der Ort der nächsten Gewebe Sammlung zu vermeiden.
3. Sobald eine gute Papille identifiziert worden ist, eine Feder Mikro-Schere (McPherson-Vannas, gebogen, scharfe Schneidkante 5 mm, Kamm, Strichstärke 0,2 mm Gesamtlänge 3 "(RS-5603, Roboz) wird verwendet, um es Clip aus. zur effizienten Nutzung der mikrochirurgischen Schere sollte man nicht die Spitze der Klinge zum Schneiden, sondern so weit im Innern der Klinge wie möglich (Abbildung 1, vergrößerte Bild und Abbildung 3), nahe dem Schnittpunkt mit der gegenüberliegenden Klinge. Die Entfernung der Papille ist mit einem Schnitt Umzug der Schere (Abbildung 1) erreicht. Die weiter innen die offene Messer der gezielten Papille erscheint, desto effektiver ist das Schneiden. Es sollte darauf geachtet werden, daß sich die Lage der Schere muss parallel mit der dorsalen Oberfläche der Zunge.
4. Manchmal ist die Zunge wird trocken, wie der Chirurg versucht, eine Papille zur Entfernung identifizieren. Nach dem Trocknen wird die Fähigkeit des Bedieners, klar zu sehen, die eine pilzförmige Papillen anspruchsvoller und macht Gleiten der Klingen über die Papille sehr schwierig. Eine zu trockene Zunge in der Regel macht das Metal Blade-Stick auf der Zunge macht die zarten chirurgischen bewegen sich weniger kontrollierbar. Lassen Sie den Gegenstand in der Nähe seiner / ihren Mund und Speichel in Kontakt mit der Oberfläche der Zunge kommen hilft den Prozess. Übermäßig nasse Zunge ist auch nicht gut. Mit der Ecke des Gaze, die man benutzt, um die Zunge zu halten hilft in diesem Prozess.
5. Jede Kapillare Blutungen, die auftreten tut, ist durch Abtupfen mit steriler Gaze behandelt. Blutung hört meist innerhalb von wenigen Minuten nuten und nicht mit zusätzlichen Gewebe Ernte beeinträchtigen. Da die Papillen oberhalb der epithelialen Oberfläche der Zunge zu verlängern, und nur die oberen 3 / 4 einer pilzförmigen Papille entfernt wird (Abbildung 2B), die Teil des pilzförmigen zeigt Gaumen ist etwas Blutungen zu erwarten.
6. Mit einem kleinen Dumont Pinzetten (Pattern-Typ), sind die entfernten Papillen in gekühltem grundlegende Ringer-Puffer geladen werden (130 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl _2, 1 mM MgCl _2, 1 mM Na-Pyruvat, 20 mM HEPES-Na , pH 7,2; Osmolalität von ~ 305 Millisekunden osmols) für nachträgliche Manipulationen. Es ist zwingend notwendig, NIEMALS Prise der Papille zwischen den Schaufeln einer Pinzette. Das Gewebe ist sehr empfindlich und sollte mit äußerster Vorsicht behandelt werden.
7. Nach Entfernung der Papillen, bleibt das Thema in den Lehrstuhl für 10-15 Minuten. Jedes Thema wird gesagt, nicht auf ihre betäubt die Zunge beißen, sondern ihre Zunge in Ruhe zu halten. Die Patienten sollten visuell durch den behandelnden Arzt überwacht werden. Anästhesie wird voraussichtlich nachlassen in ca. 30-60 Minuten. Da die Seite von Papillen Entfernung kann etwas wund nach der Biopsie, sind sie angewiesen, sich bewusst sein, würzig oder scharf (Temperatur) Essen, kohlensäurehaltige Getränke oder Getränke, die entweder extrem kalt oder heiß sind. Ein weiteres Indiz ist die Probanden, dass jede leichte rötliche Färbung des Speichels ist normal und wird bei Auflösung des Gerinnsels nicht mehr.
8. Die Themen sind zu sehen 30-40 Tage nach der Entfernung der Papillen für die Bewertung der Stelle, wo die Papillen wurden entfernt. Zu diesem Zeitpunkt Geschmack Papillen sollten vollständig regeneriert haben.

5. Repräsentative Ergebnisse

Tissue gesammelt werden für die Immunhistochemie, RT-PCR, in situ Hybridisierung, Kalzium-Imaging, Patch-Clamp-und Gewebekultur verwendet werden. Wenn richtig ausgeführt das Aussehen der Papillen sind gesund aussehende, weiß, ca. 0,5-1 mm im Durchmesser (Abbildung 2B).

Papillen für die Immunhistochemie gesammelt werden, basierend auf bestehenden und publizierten Protokollen ⁴ verarbeitet. Ein typisches Geschmacksknospe aus einer paraformaldehide-fixed Geschmack Papille ist in Abbildung 4A gezeigt.

Biopsiert Papillen kann auch enzymatisch behandelt werden ⁵ bis Dissoziation Geschmacksknospe Zellen zu erreichen. Nach der enzymatischen Spaltung können die Zellen für aufrechterhalten werden bis zu 4 Stunden in einer feuchten Petrischale bei 4C. In diesem Zustand können sie für einzelne Zelle PCR (Abbildung 4B), Ca-imaging, etc. verwendet werden

Zellen zeigen eine Vielzahl von Formen, viele werden schlank und bipolare (Abbildung 5A und 5B) als eine von Geschmacksknospe Zelle erwarten würden. Beim Sammeln von Zellen oder die Durchführung Ca-imaging, nach etwa 20 Minuten unter einem Mikroskop, beginnen die Zellen zu apoptotischen Bläschen (Abbildung 6A und 6B, Pfeile) und viele von ihnen werden rund entwickeln. Mit einer Technik in unserem Labor entwickelt, wurden die Zellen einzeln abgeholt mit einem Patch-Pipette, wie in Abbildung 5A und 5B gezeigt.

Wie oben erwähnt, beginnen Papillen nach 5 bis 8 Wochen nachwachsen. Abbildung 7A zeigt das Aussehen der Zunge, wo 8 pilzförmigen Papillen von der linken Seite ein Freiwilliger die Zunge entfernt wurden ohne Verwendung von Anästhesie. Unsere 8 leichte rötliche Flecken, wo die Papillen snipped off waren. Keine Blutung nach der Operation beobachtet. Die vorliegende Aufnahme wurde 10 Minuten nach der Biopsie entnommen. 7B ist ein Bild von der Zunge des gleichen Motivs 40 Tage nach der Biopsie gesehen. Beachten Sie alle Papillen sind nachgewachsen. Um festzustellen, ob die regenerierten Papillen funktionsfähig sind, fragten wir uns freiwillig zu einer zweiten Biopsie zustimmen mit der exakt gleichen Papillen. Zur korrekten Ermittlung der geeigneten Papillen wir wieder ernten Planung waren, erzielten wir ein Raster (Abbildung 7C), dass die 8 Papillen, die in erster Linie wurden entfernt und überlagert es über die Zunge aus dem gleichen Freiwilligen nach 40 Tagen post ersten Biopsie passt . Begünstigt durch die Kontur der Zunge und der Abstand vom Rand in das Netz, einmal erkannt, haben wir ein paar der gleichen genauen Papillen entfernt und verarbeitet sie für die Immunhistochemie. 4A ist eine dieser Papillen. Beachten Sie die Umrisse eines Geschmacksknospe (in gelb) und die immunpositive Färbung für Phospholipase Cβ2 (PLCβ2), ein Typ-2-Geschmack Zelltransduktion-assoziierte Enzym. Diese Daten zeigen, dass die Verwendung der Biopsie, wie hierin beschrieben, die pilzförmigen Papillen ausreichend regenerieren um 40 Tage, um auch an Stelle wahrscheinlich funktionelle Geschmacksnerven.

Abbildung 1. Die vorderen Viertel der Zunge des Themas ist in steriler Gaze gewickelt und hielt in der linken Hand des Chirurgen. Die Zunge darf festgehalten werden. Das vergrößerte Bild auf der rechten Seite zeigt die korrekte Position der Schere und die Lage der Papille in Bezug auf die Klinge.

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Abbildung 2. (A) pilzförmigen Papillen sind mit blauen Pfeilen dargestellt. Dies sind runde Gebilde etwas von seiner Umgebung und in ihrer unmittelbaren Nähe gibt es einen kreisförmigen Raum ohne filliform Papillen isoliert. (B) pilzförmigen Geschmack Papille an der Spitze der Feder Mikro-Schere Sekunden nach entfernt wurde.

Abbildung 3. Selbst eine pilzförmige Papillen mit einem Spiegel und keine Anästhesie Biopsie. Der Einschub zeigt die allgemeine Position der Schere, die parallel mit der dorsalen Oberfläche der Zunge muss. Wenn es richtig gemacht und schonend, ist die Anästhesie von nahezu allen Probanden verzichtet.

Abbildung 4 A. Immunhistochemie einer Geschmacksknospe. Eine pilzförmige Papillen visualisiert Nomarski-Optik mit Antikörpern gegen Phospholipase β2 und getaggt mit Red Fluorescent Protein. Der Umriss des Geschmacksknospe und ein paar beschriftet Geschmack Zellen sind in gelb dargestellt.

B. RT-PCR eines Kandidaten säuerlichen Geschmack Rezeptor, Acid Sensing Ion Channel 1 (ASIC1). M = Marker. Spuren 1 bis 4 wurden einzelne Zelle RT-PCR für ASIC1 aus vier verschiedenen Freiwilligen. Nach der Sammlung, pilzförmige Papillen enzymatisch gespalten waren, Zellen einzeln abgeholt und die Expression von ASIC1 gemacht wurden. Lanes 2 und 4 hatten einen normalen Ausdruck ASIC1.

Abbildung 5. A. Bild der einzelnen Geschmack Zellen abgeholt mit einem Patch-Pipette. Eine große Epithelzelle sichtbar ist in der linken unteren Ecke (5A). Zwei rote Blutkörperchen sind ebenfalls sichtbar oberhalb der Patch-Pipette und hinter dem Glaszylinder. Der Geschmack Zelle ist etwa 30-50 Mikrometer lang und etwa 6 Mikrometer breit. Als Referenz wird ein rotes Blutkörperchen etwa 7-8 Mikrometer im Durchmesser. B. zeigt einen anderen Geschmack Rezeptor-Zelle von vier Epithelzellen umgeben ist. Der Geschmack Zelle sieht knackig.

Abbildung 6. A. Bilder von Zellen, die Apoptose-Bläschen (ghost wie runde Blasen an den Geschmack Zelle, Pfeile) zu entwickeln begann. B. Die Zellen werden nicht mehr geerntet werden, wenn ihr Aussehen ändert sich wie hier gezeigt.

Abbildung 7. A. Zehn Minuten nach der Entnahme von 8 Geschmack Papillen mit keine Anästhesie. Die chirurgische Seiten sichtbar sind, wie leicht rötliche Flecken. Keine Blutung bemerkt.
B. Das gleiche Zunge 40 Tage nach der Biopsie. Beachten Sie alle Papillen regeneriert. Zur Identifizierung des entfernten Papillen als nachgewachsen, wurde ein Gitter mit der Website, auf der rechten Seite Bild erstellt und verschoben über die regenerierte Papillen auf der linken Seite Bild.
C. Die regenerierte Papillen erschienen in der exakt gleichen Stelle. Harvesting Papillen wieder aus dieser Gruppe durch Immunhistochemie nachgewiesen, dass das regenerierte Papillen funktionelle Geschmack Zellen enthalten (siehe Abbildung 4A) gefolgt.

Diskussion

Ein bemerkenswerter Vorteil der Verwendung von menschlichen Zellen ist ihre Spezifität. Das Verfahren hier im Detail beschrieben bietet Zunge Gewebe für die Isolierung des Geschmacks-Rezeptor-Zellen aus Mensch. Diese Geschmacks-Zellen können für molekulare Studien eingesetzt werden, suche, um Moleküle wichtig für die Transduktion des Geschmacks Informationen zu entdecken, und für die Kalzium-Imaging-Studien, die Geschmack-Zell-Aktivität zu überwachen, um Reize. Darüber hinaus kann die Zunge Gewebe durch dieses...

Materialien

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Name	Company	Catalog Number	Comments
McPherson-Vannas. Curved, sharp cutting edge 5mm. Comb, tip width 0.2 mm overall length 3"		Roboz Surgical Instruments Co., Inc. Gaithersburg, MD 20898	RS-5603, Roboz
Small Dumont forceps		Roboz Surgical Instruments Co.	RS-4915, Roboz