Teil 1: Aufbau und Vorbereitung der Haut <ol><li> Stellen Sie die folgenden Sensoren Atemgürtel, EMG, EKG, Hautleitwert, Temperatur, Boden; </li><li> Bereiten Sie die Haut durch sanftes Reiben mit einem Alkoholtupfer in den folgenden Orten: Stirn über die Augen für EMG, Innenseite der beiden Handgelenke für EKG, hinten links für den Boden (Standort der Masseelektrode kann je nach verwendeten Geräte); </li><li> Attach-Sensoren auf der Haut an den folgenden Orten: Atmung Gürtel um die Taille, EMG auf der Stirn über jedem Auge, EKG auf der Innenseite jedes Handgelenk, Hautleitfähigkeit auf Mittelfinger der linken Hand, Thermometer auf den Zeiger der linken Hand, Boden auf der Rückseite der linken Hand; </li><li> Wählen Sitzung für Atmung + HRV; </li><li> Stellen Sie sicher, dass tät, akzeptabel für alle Sensoren ist und dass die Sensoren reagieren auf Client-Bewegung und produziert vernünftige Messwerte werden. </li></ol> Teil 2: Recording <ol><li> Erklären Sie das Verfahren an den Client. </li><li> (Min 0-2) Weisen Sie den Kunden, still zu sitzen mit offenen Augen. Nehmen Sie eine Zwei-Minuten-Basislinie. </li><li> (Min 2-4) Am Ende der zwei Minuten beginnt eine Zwei-Minuten-kognitiven Stressor - arithmetische Probleme allmählich in der Schwierigkeit, ohne Verwendung von Pen &amp; Paper oder Taschenrechner (gelöst werden, wenn die Arithmetik ist besonders schwierig für den Kunden, fragen Sie sie wiederholt subtrahieren Sieben tolle Startplätze von 100, dh &quot;serial Siebener&quot;). Geben Sie die folgenden Anweisungen, um den Kunden: &quot;In den nächsten 2 Minuten, ich werde bitten Sie, einige mathematische Probleme zu lösen. Bitte arbeiten Sie so schnell wie du kannst und sag mir die Antwort &quot;. Geben Sie keine Rückmeldung, ob der Client die Antwort richtig oder falsch ist und nur minimale Unterstützung (zB, &quot;just do so gut du kannst&quot;), um nicht den milden Stress induzierenden Eigenschaften dieser Übung zu beseitigen. </li><li> (Min 4-6) Lassen Sie den Kunden wissen, dass dieser Teil der Bewertung ist vorbei und fragen Sie ihn / sie, still zu sitzen mit offenen Augen für 2 Minuten. </li><li> (Min 6-8) Begin physischen Stressoren: Schalten Sie laute schädlichen Lärm (Babys weinen, Autounfälle, etc.) und bitten Sie den Kunden, um die Geräusche zu hören, ohne Tuning aus. </li><li> (Min 8-10) Schalten Sie Lärm, und bitten Sie den Kunden, still zu sitzen mit offenen Augen für 2 Minuten. </li><li> (Min 10-12) Begin emotionalen Stressor: fragen Sie den Client über eine stressige Vorfall, dass sie gut daran erinnern, sprechen, sind die Details der Veranstaltung, was sie denken und fühlen. Geben minimal empathische Reaktion, um nicht die Reaktion auf Stress zu mildern. </li><li> (Min 12-14) Unterbrechen Sie die Client-Geschichte, auch wenn er / sie nicht abgeschlossen ist, und weisen Sie den Client, still zu sitzen mit offenen Augen. </li><li> Stoppen Sie die Aufnahme, die Daten zu speichern, und lassen Sie den Kunden wissen, dass die Bewertung erfolgt. </li></ol> Teil 3: Nachbereitung und Planung der Behandlung <ol><li> Fragen Sie den Kunden über ihre Erfahrungen bei der Bewertung. Welche Teile wurden besonders belastend und warum? Hat er / sie fühlen sich alle physiologischen Veränderungen passiert? </li><li> Bewertung von Daten nach den Kriterien in Anhang I beschrieben </li><li> Wählen physiologische Parameter, die auf der Grundlage dieser Analyse behandelt werden müssen. Wenn Auslesen des Sensors an der Basislinie ist höher oder niedriger als normal, ist das Ziel der Behandlung dem Klienten zu helfen, die physiologischen Parameter zu bringen, um normal in einer nicht-belastenden Umfeld. Wenn Auslesen des Sensors während der Stressfaktor ist höher oder niedriger als normal, ist das Ziel der Behandlung zu helfen, den Client zu identifizieren Stressoren und in der Lage sein normales Niveau der physiologischen Funktionen unter Stress zu halten. Wenn Auslesen des Sensors während der Ausfallzeit zeigt Mangel an Erholung, ist das Ziel der Behandlung dem Klienten zu helfen machen, dass physiologische Parameter auf ein normales Niveau schnell nach einem Stressfaktor. Einige oder alle diese Ziele können in den Behandlungsplan aufgenommen werden. </li></ol> Anhang I Stress Beurteilung Leitlinien für die Auslegung (Alle &quot;fett&quot; Antworten weisen auf Bereiche zu richten) <table border="0"><tbody><tr><td colspan="3"> EMG (normal lesen &lt;3 Mikrovolt) </td></tr><tr><td> 1. Ist EMG erhöhten zu Beginn der Studie? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 2. Ist EMG erhöhte vorbei an der Grundlinie an jedem der 3 Stressoren? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 3. Gibt es Rückgewinnung von EMG auf Basisniveau während der Ruhezeiten? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td colspan="3"> Herzfrequenz (Normbereich 60-80 Schläge pro Minute) </td></tr><tr><td> 1. Ist die Herzfrequenz zu Studienbeginn erhöht? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 2. Ist die Herzfrequenz erhöhte vorbei an der Grundlinie an jedem der 3 Stressoren? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 3. Gibt es Erholung der Herzfrequenz auf den Ausgangswert während der Ruhezeiten? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td colspan="3"> Atemfrequenz (normal &lt;12 Atemzüge pro Minute) </td></tr><tr><td> 1. Ist die Atemfrequenz bei Studienbeginn erhöht? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 2. Ist die Atemfrequenz erhöht Vergangenheit die Basis für jeden Stressor? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 3. Gibt es Erholung der Atemfrequenz auf den Ausgangswert während der Ruhezeiten? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td colspan="3"> Hautleitfähigkeit </td></tr><tr><td> 1. Ist die Hautleitfähigkeit zu Studienbeginn erhöht? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 2. Ist die Hautleitfähigkeit erhöhten Vergangenheit die Basis für jeden Stressor? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 3. Gibt es Erholung der Hautleitfähigkeit zu den Ausgangswerten während der Ruhezeiten? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td colspan="3"> Finger Temperatur (normal lesen&gt; 90F) </td></tr><tr><td> 1. Ist Finger Temperatur niedrig zu Studienbeginn? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 2. Hat Finger Temperaturabsenkung Vergangenheit die Basis für jeden Stressor? </td><td> y es _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 3. Gibt es Erholung der Finger Temperatur zum Ausgangswert während der Ruhezeiten? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td colspan="3"> Die Herzfrequenz-Variabilität (Normen unterscheiden sich je nach Alter) </td></tr><tr><td> 1. Ist die Herzfrequenz-Variabilität gering zu Studienbeginn? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 2. Ist die Herzfrequenz-Variabilität zu verringern Vergangenheit die Basis für jeden Stressor? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 3. Gibt es Erholung der Herzfrequenz-Variabilität während der Ruhezeiten? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr></tbody></table> Anhang I Stress Beurteilung Interpretation: <table border="0"><tbody><tr><td colspan="3"> EMG (normal lesen &lt;3 Mikrovolt) </td></tr><tr><td> 1. Ist EMG erhöhten zu Beginn der Studie? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 2. Ist EMG erhöhte vorbei an der Grundlinie an jedem der 3 Stressoren? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 3. Gibt es Rückgewinnung von EMG auf Basisniveau während der Ruhezeiten? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> Herzfrequenz (Normbereich 60-80 Schläge pro Minute) </td></tr><tr><td> 1. Ist die Herzfrequenz zu Studienbeginn erhöht? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 2. Ist die Herzfrequenz erhöhte vorbei an der Grundlinie an jedem der 3 Stressoren? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 3. Gibt es Erholung der Herzfrequenz auf den Ausgangswert während der Ruhezeiten? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> Atemfrequenz (normal &lt;12 Atemzüge pro Minute) </td></tr><tr><td> 1. Ist die Atemfrequenz bei Studienbeginn erhöht? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 2. Ist die Atemfrequenz erhöht Vergangenheit die Basis für jeden Stressor? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 3. Gibt es Erholung der Atemfrequenz auf den Ausgangswert während der Ruhezeiten? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> Hautleitfähigkeit (normal lesen &lt;5 micro Ohm) </td></tr><tr><td> 1. Ist die Hautleitfähigkeit zu Studienbeginn erhöht? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 2. Ist die Hautleitfähigkeit erhöhten Vergangenheit die Basis für jeden Stressor? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 3. Gibt es Erholung der Hautleitfähigkeit zu den Ausgangswerten während der Ruhezeiten? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> Finger Temperatur (normal lesen&gt; 90F) </td></tr><tr><td> 1. Ist Finger Temperatur niedrig zu Studienbeginn? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 2. Hat Finger Temperaturabsenkung Vergangenheit die Basis für jeden Stressor? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 3. Gibt es Erholung der Finger Temperatur zum Ausgangswert während der Ruhezeiten? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> Die Herzfrequenz-Variabilität (Normen unterscheiden sich je nach Alter) </td></tr><tr><td> 1. Ist die Herzfrequenz-Variabilität gering zu Studienbeginn? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr><td> 2. Ist die Herzfrequenz-Variabilität zu verringern Vergangenheit die Basis für jeden Stressor? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr><tr> &lt;td&gt; 3. Gibt es Erholung der Herzfrequenz-Variabilität während der Ruhezeiten? </td><td> Ja _ </td><td> keine _ </td></tr></tbody></table> Behandlungsplanung: Wenn eine Lesung ist höher oder niedriger als normal an der Grundlinie, ist Ziel der Behandlung zu helfen Kunden zu bringen, dass physiologische Parameter, um normale, unter allen Umständen Wenn eine Lesung ist höher oder niedriger als normal während der Stressfaktor ist Ziel der Behandlung zu helfen Kunden identifizieren Stressoren und in der Lage sein normales Niveau der physiologischen Funktionen unter Stress zu halten Wenn ein Messwert zeigt fehlende Erholung während Wartezeiten, ist Ziel der Behandlung zu helfen Kunden zu bringen, dass physiologische Parameter auf normales Niveau schnell nach einem Stressfaktor.

<ol>
	<li>Arena, J., Schwartz, M. S., Schwartz, M. S., Andrasik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychophysiological+assessment+and+biofeedback+baselines.">Psychophysiological assessment and biofeedback baselines.</a> A Practitioners Guide. , 128-158 (2005).</li><li>Schwartz, N. M., Schwartz, M. S., Schwartz, M. S., Andrasik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definitons+of+biofeedback+and+applied+psychophysiology.">Definitons of biofeedback and applied psychophysiology.</a> A Practitioners Guide. , 27-42 (2005).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Abgeschlossen psychophysiologischen in der appendi Stress Assessment bietet eine Biofeedback-Therapeuten mit Informationen, die für die Formulierung einer Behandlung zu planen. Diese Einschätzung liefert Informationen sowohl über die individuelle Reaktion Stereotypie oder Einheitlichkeit der bestimmten physiologischen Reaktionen auf alle Stressoren und Reiz-Reaktions-Spezifität oder einzelne einzigartigen physiologischen Reaktionen auf verschiedene Arten von Stressoren. Mit diesen Informationen ist der Kunde dann in...

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psychophysiological stress assessment using biofeedback 

In der letzten halben Jahrhundert Forschung in Biofeedback ist das Ausmaß gezeigt, die der menschliche Geist kann die Funktion des autonomen Nervensystems zu beeinflussen, die früher als außerhalb der bewussten Kontrolle. Indem die Menschen beobachten, Signale von ihren eigenen Körpern, ermöglicht Biofeedback sie stärkeres Bewusstsein für ihre physiologischen und psychologischen Reaktionen wie Stress zu entwickeln und zu lernen, um diese Reaktionen zu ändern. Biofeedback Praktiker kann dieser Prozess durch die Beurteilung Leute s Reaktionen auf leicht belastende Ereignisse und die Formulierung einer Biofeedback-basierte Behandlung planen zu erleichtern. Während Stress Beurteilung der Praktiker ersten Aufzeichnungen eine Basis für physiologische Messungen, und dann stellt der Client mit mehreren milden Stressoren, wie eine kognitive, körperliche und emotionale Stressoren. Vielzahl von Stressfaktoren wird vorgestellt, um eine Person Reiz-Reaktions-Spezifität oder Unterschiede in der jeder Mensch reagiert auf qualitativ unterschiedliche Stimuli zu bestimmen. Dieses Video demonstriert den Prozess der psychophysiologischen Stress Beurteilung mittels Biofeedback und Gegenwart allgemeine Leitlinien für die Planung der Behandlung.

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Psychophysiological Stress Assessment Using Biofeedback

In diesem Video werden wir beschreiben eine Methode zur Beurteilung der Person psychophysiologische Reaktion auf Stress mit Biofeedback. Wir werden außerdem allgemeine Leitlinien für die Planung der Behandlung.

Psychophysiologische Stress Assessment mit Biofeedback

In the last half century, research in biofeedback has shown the extent to which the human mind can influence the functioning of the autonomic nervous ...

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Research

JoVE Journal

Biology

Psychophysiological Stress Assessment Using Biofeedback 

13.3K Aufrufe.  Cambridge Health Alliance. In diesem Video werden wir beschreiben eine Methode zur Beurteilung der Person psychophysiologische Reaktion auf Stress mit Biofeedback. Wir werden außerdem allgemeine Leitlinien für die Planung der Behandlung.

Serie: Psychophysiological Stress Assessment Using Biofeedback

Monitoring Plant Hormones During Stress Responses

Plant hormones and related signaling compounds play an important role in the regulation of plant responses to various environmental stimuli and stresses. Among the most severe stresses are insect herbivory, pathogen infection, and drought stress. For each of these stresses a specific set of hormones and/or combinations thereof are known to fine-tune the responses, thereby ensuring the plant's survival. The major hormones involved in the regulation of these responses are jasmonic acid (JA), salicylic acid (SA), and abscisic acid (ABA). To better understand the role of individual hormones as well as their potential interaction during these responses it is necessary to monitor changes in their abundance in a temporal as well as in a spatial fashion. For the easy, sensitive, and reproducible quantification of these and other signaling compounds we developed a method based on vapor phase extraction and gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) analysis (1, 2, 3, 4). After extracting these compounds from the plant tissue by acidic aqueous 1-propanol mixed with dichloromethane the carboxylic acid-containing compounds are methylated, volatilized under heat, and collected on a polymeric absorbent. After elution into a sample vial the analytes are separated by gas chromatography and detected by chemical ionization mass spectrometry. The use of appropriate internal standards then allows for the simple quantification by relating the peak areas of analyte and internal standard.

A simple method is provided that allows for the rapid extraction and analysis of multiple plant hormones from small tissue samples. The procedure uses vapor phase extraction as the solemn purification step. Samples are analyzed by GC/MS with chemical ionization that produces mainly (M+1)+ ions.

Überwachung Pflanzenhormone bei Stress Responses

Plant hormones and related signaling compounds play an important role in the regulation of plant responses to various environmental stimuli and stresses. ...

Forschung

Biologie

Microsurgical Clip Obliteration of Middle Cerebral Aneurysm Using Intraoperative Flow Assessment

Cerebral aneurysms are abnormal widening or ballooning of a localized segment of an intracranial blood vessel.  Surgical clipping is an important treatment for aneurysms which attempts to exclude blood from flowing into the aneurysmal segment of the vessel while preserving blood flow in a normal fashion.  Improper clip placement may result in residual aneurysm with the potential for subsequent aneurysm rupture or partial or full occlusion of distal arteries resulting in cerebral infarction.  Here we describe the use of an ultrasonic flow probe to provide quantitative evaluation of arterial flow before and after microsurgical clip placement at the base of a middle cerebral artery aneurysm.  This information helps ensure adequate aneurysm reconstruction with preservation of normal distal blood flow.

Description of the surgical obliteration of a cerebral aneurysm utilizing an ultrasonic flow probe to assess arterial flow prior to and after aneurysm clip placement.

Mikrochirurgische Clip Obliteration des Nahen zerebralen Aneurysmen mit Intraoperative Flow-Bewertung

Cerebral aneurysms are abnormal widening or ballooning of a localized segment of an intracranial blood vessel.  Surgical clipping is an important ...

A Quantitative Assessment of The Yeast Lipidome using Electrospray Ionization Mass Spectrometry

Lipids are one of the major classes of biomolecules and play important roles membrane dynamics, energy storage, and signalling1-4. The budding yeast Saccharomyces cerevisiae, a genetically and biochemically manipulable unicellular eukaryote with annotated genome and very simple lipidome, is a valuable model for studying biological functions of various lipid species in multicellular eukaryotes2,3,5. S. cerevisiae has 10 major classes of lipids with chain lengths mainly of 16 or 18 carbon atoms and either zero or one degree of unsaturation6,7. Existing methods for lipid identification and quantification - such as high performance liquid chromatography, thin-layer chromatography, fluorescence microscopy, and gas chromatography followed by MS - are well established but have low sensitivity, insufficiently separate various molecular forms of lipids, require lipid derivitization prior to analysis, or can be quite time consuming. Here we present a detailed description of our experimental approach to solve these inherent limitations by using survey-scan ESI/MS for the identification and quantification of the entire complement of lipids in yeast cells. The described method does not require chromatographic separation of complex lipid mixtures recovered from yeast cells, thereby greatly accelerating the process of data acquisition. This method enables lipid identification and quantification at the concentrations as low as g/ml and has been successfully applied to assessing lipidomes of whole yeast cells and their purified organelles. Lipids extraction from whole yeast cells for using this method of lipid analysis takes two to three hours. It takes only five to ten minutes to run each sample of extracted and dried lipids on a Q-TOF mass spectrometer equipped with a nano-electrospray source.

We describe a new quantitative lipidomics method for identifying numerous lipid species in yeast using survey-scan electrospray ionization mass spectrometry (ESI/MS). This method exceeds currently available methods for lipid identification and quantification in the ability to resolve various molecular forms of lipids, sensitivity, and speed.

Eine quantitative Bewertung der Hefe Lipidome mit Elektrospray-Ionisation-Massenspektrometrie

Lipids are one of the major classes of biomolecules and play important roles membrane dynamics, energy storage, and signalling1-4. The budding yeast ...

The use of Biofeedback in Clinical Virtual Reality: The INTREPID Project

Generalized anxiety disorder (GAD) is a psychiatric disorder characterized by a constant and unspecific anxiety that interferes with daily-life activities. Its high prevalence in general population and the severe limitations it causes, point out the necessity to find new efficient strategies to treat it. Together with the cognitive-behavioral treatments, relaxation represents a useful approach for the treatment of GAD, but it has the limitation that it is hard to be learned. The INTREPID project is aimed to implement a new instrument to treat anxiety-related disorders and to test its clinical efficacy in reducing anxiety-related symptoms. The innovation of this approach is the combination of virtual reality and biofeedback, so that the first one is directly modified by the output of the second one. In this way, the patient is made aware of his or her reactions through the modification of some features of the VR environment in real time. Using mental exercises the patient learns to control these physiological parameters and using the feedback provided by the virtual environment is able to gauge his or her success. The supplemental use of portable devices, such as PDA or smart-phones, allows the patient to perform at home, individually and autonomously, the same exercises experienced in therapist's office. The goal is to anchor the learned protocol in a real life context, so enhancing the patients' ability to deal with their symptoms. The expected result is a better and faster learning of relaxation techniques, and thus an increased effectiveness of the treatment if compared with traditional clinical protocols.

The Project on Virtual Reality Intelligent Multi-sensor System for the Treatment of Anxiety-related Disorders (INTREPID) is aimed at developing a multi-sensor context-aware virtual reality system for the treatment of anxiety-related disorders.

Der Einsatz von Biofeedback in der klinischen Virtual Reality: Die INTREPID Projekt

Generalized anxiety disorder (GAD) is a psychiatric disorder characterized by a constant and unspecific anxiety that interferes with daily-life ...

Assessment of GFP Expression and Viability Using the Tali Image-Based Cytometer

Single-cell and population information are commonly obtained either by flow cytometry or fluorescence microscopy. However, these two methods provide different information. Flow cytometry gives quantitative multi-parametric information about physical characteristics and staining or expression, but doesn't allow for visualization. Stand-alone fluorescence microscopy provides visual data, but doesn't allow for straightforward quantitative measurements1.
Image-based cytometry bridges the gap between these two methods, enabling the quick visualization and simultaneous quantitative analysis of thousands of cells in heterogeneous populations2. Here, we present a method for performing cell viability and green fluorescent protein (GFP) expression assays using the Tali Image-Based Cytometer3. The Tali instrument is a 3-channel (bright field, green fluorescence, red fluorescence) benchtop assay platform that offers several advantages over flow cytometry and fluorescence microscopy. The Tali cytometer is less expensive, takes up less bench space, requires less maintenance, and the work flow has been simplified so that the operation and analysis is much simpler and quicker. The Tali cytometer is capable of performing a range of suspension cell-based assays, including GFP and red fluorescent protein (RFP) expression, apoptosis4-6 and cell viability analysis with propidium iodide (PI)7-11.
Here, we demonstrate the use of the Tali instrument in performing a cell viability assay in cells expressing GFP. GFP-transduced cells are stained using the Tali Viability Kit - Dead Cell Red. The cells are then pipetted into a Tali Cellular Analysis Slide and loaded into the cytometer. Bright field, red fluorescence and green fluorescence images are captured and analyzed using assay specific algorithms. Histograms are then generated to display cell size, PI fluorescence intensity, and GFP fluorescence intensity. These parameters can then be thresholded to home in on a specific cell population.
A side-by side comparison of the Tali Image-Based Cytometer and traditional flow cytometry demonstrates that the two methods provide comparable data regarding cell viability and protein expression. However, the Tali instrument provides additional visual information about the cell population that cannot be obtained using a flow cytometer.

This protocol describes how to perform cell viability and fluorescence expression assays using the Tali Image-Based Cytometer.

Beurteilung der GFP Expression und Lebensfähigkeit Mit der Tali Image-Based Cytometer

Single-cell and population information are commonly obtained either by flow cytometry or fluorescence microscopy. However, these two methods provide ...

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of central nervous system injuries in vivo, possibly by reducing oxidative stress. However, effects of R/NIR-LT on oxidative stress have been shown to vary depending on wavelength or intensity of irradiation. Studies comparing treatment parameters are lacking, due to absence of commercially available devices that deliver multiple wavelengths or intensities, suitable for high through-put in vitro optimization studies. This protocol describes a technique for delivery of light at a range of wavelengths and intensities to optimize therapeutic doses required for a given injury model. We hypothesized that a method of delivering light, in which wavelength and intensity parameters could easily be altered, could facilitate determination of an optimal dose of R/NIR-LT for reducing reactive oxygen species (ROS) in vitro.
Non-coherent Xenon light was filtered through narrow-band interference filters to deliver varying wavelengths (center wavelengths of 440, 550, 670 and 810nm) and fluences (8.5 x 10-3 to 3.8 x 10-1 J/cm2) of light to cultured cells. Light output from the apparatus was calibrated to emit therapeutically relevant, equal quantal doses of light at each wavelength. Reactive species were detected in glutamate stressed cells treated with the light, using DCFH-DA and H2O2 sensitive fluorescent dyes.&#160;
We successfully delivered light at a range of physiologically and therapeutically relevant wavelengths and intensities, to cultured cells exposed to glutamate as a model of CNS injury. While the fluences of R/NIR-LT used in the current study did not exert an effect on ROS generated by the cultured cells, the method of light delivery is applicable to other systems including isolated mitochondria or more physiologically relevant organotypic slice culture models, and could be used to assess effects on a range of outcome measures of oxidative metabolism.

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Non-coherent Xenon light was passed through narrow-band interference and neutral density filters to deliver light of varying wavelength and intensity to cultured cells. This protocol was used to assess the effects of red/near-infrared light therapy on production of reactive species in vitro: no effects were observed using the tested parameters.

Verfahren zur Beurteilung der Auswirkungen einer Reihe von Wellenlängen und Intensitäten von Rot / Nah-Infrarot-Licht-Therapie auf oxidativen Stress<em&gt; In-vitro-</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

A Protocol for Using Gene Set Enrichment Analysis to Identify the Appropriate Animal Model for Translational Research

Recent studies that compared transcriptomic datasets of human diseases with datasets from mouse models using traditional gene-to-gene comparison techniques resulted in contradictory conclusions regarding the relevance of animal models for translational research. A major reason for the discrepancies between different gene expression analyses is the arbitrary filtering of differentially expressed genes. Furthermore, the comparison of single genes between different species and platforms often is limited by technical variance, leading to misinterpretation of the con/discordance between data from human and animal models. Thus, standardized approaches for systematic data analysis are needed. To overcome subjective gene filtering and ineffective gene-to-gene comparisons, we recently demonstrated that gene set enrichment analysis (GSEA) has the potential to avoid these problems. Therefore, we developed a standardized protocol for the use of GSEA to distinguish between appropriate and inappropriate animal models for translational research. This protocol is not suitable to predict how to design new model systems a-priori, as it requires existing experimental omics data. However, the protocol describes how to interpret existing data in a standardized manner in order to select the most suitable animal model, thus avoiding unnecessary animal experiments and misleading translational studies.

We provide a standardized protocol for the use of gene set enrichment analysis of transcriptomic data to identify an ideal mouse model for translational research. 
This protocol can be used with DNA microarray and RNA sequencing data and can further be extended to other omics data if data are available.

Ein Protokoll für die Verwendung von Gen Set Anreicherung Analyse zur Ermittlung von geeigneten Tiermodell für die translationale Forschung

Recent studies that compared transcriptomic datasets of human diseases with datasets from mouse models using traditional gene-to-gene comparison ...

Fish Sperm Assessment Using Software and Cooling Devices

For gamete quality evaluation, there are innovative, rapid, and quantitative techniques that can provide useful data for aquaculture. Computerized systems for sperm analysis were developed to measure several parameters and one of the most commonly measured is the sperm motility.
Initially, this computer technology was designed for mammalian species, although it can also be used for fish sperm analysis. Fish have specific features that can affect sperm assessment such as a short motility time after activation and, in some cases, adaptation to lower temperatures. Thus, it is necessary to modify both software and hardware components to make motility analysis more efficient for fish sperm analysis. For mammalian sperm, the heating plate is used to maintain optimal temperatures of spermatozoa. However, for some fish species, it is advantageous to use a lower temperature to prolong the duration of motility, since the sperm remain active for less than 2 min. Therefore, cooling devices are necessary to refrigerate samples at constant temperature over the time of analysis, including on the optical microscope. This protocol describes the analysis of fish sperm motility using software for sperm analysis and new cooling devices to optimize the results.

The present protocol describes a procedure of fish sperm assessment using computer-assisted sperm analysis and cooling devices. The software gives a rapid, accurate and quantitative analysis of fish sperm quality based on spermatozoa motility, which can be a useful tool in aquaculture to improve reproduction success.

Fisch Sperma Bewertung mit Software und Kühlgeräte

For gamete quality evaluation, there are innovative, rapid, and quantitative techniques that can provide useful data for aquaculture. Computerized systems ...

An Air-liquid Interface Bronchial Epithelial Model for Realistic, Repeated Inhalation Exposure to Airborne Particles for Toxicity Testing

For toxicity testing of airborne particles, air-liquid interface (ALI) exposure systems have been developed for in vitro tests in order to mimic realistic exposure conditions. This puts specific demands on the cell culture models. Many cell types are negatively affected by exposure to air (e.g., drying out) and only remain viable for a few days. This limits the exposure conditions that can be used in these models: usually relatively high concentrations are applied as a cloud (i.e., droplets containing particles, which settle down rapidly) within a short period of time. Such experimental conditions do not reflect realistic long-term exposure to low concentrations of particles. To overcome these limitations the use of a human bronchial epithelial cell line, Calu-3 was investigated. These cells can be cultured at ALI conditions for several weeks while retaining a healthy morphology and a stable monolayer with tight junctions. In addition, this bronchial model is suitable for testing the effects of repeated exposures to low, realistic concentrations of airborne particles using an ALI exposure system. This system uses a continuous airflow in contrast to other ALI exposure systems that use a single nebulization producing a cloud. Therefore, the continuous flow system is suitable for repeated and prolonged exposure to airborne particles while continuously monitoring the particle characteristics, exposure concentration, and delivered dose. Taken together, this bronchial model, in combination with the continuous flow exposure system, is able to mimic realistic, repeated inhalation exposure conditions that can be used for toxicity testing.

Described is the cell culture and exposure method of an in vitro bronchial model for realistic, repeated inhalation exposure to particles for toxicity testing.

Ein Luft-Flüssig-Interface-Bronchial-Epithelmodell für realistische, wiederholte Inhalationsexposition gegenüber Luftpartikeln für Toxizitätstests

For toxicity testing of airborne particles, air-liquid interface (ALI) exposure systems have been developed for in vitro tests in order to mimic realistic ...

In Vitro Analysis of E3 Ubiquitin Ligase Function

The covalent attachment of ubiquitin (Ub) to internal lysine residue(s) of a substrate protein, a process termed ubiquitylation, represents one of the most important post-translational modifications in eukaryotic organisms. Ubiquitylation is mediated by a sequential cascade of three enzyme classes including ubiquitin-activating enzymes (E1 enzymes), ubiquitin-conjugating enzymes (E2 enzymes), and ubiquitin ligases (E3 enzymes), and sometimes, ubiquitin-chain elongation factors (E4 enzymes). Here, in vitro protocols for ubiquitylation assays are provided, which allow the assessment of E3 ubiquitin ligase activity, the cooperation between E2-E3 pairs, and substrate selection. Cooperating E2-E3 pairs can be screened by monitoring the generation of free poly-ubiquitin chains and/or auto-ubiquitylation of the E3 ligase. Substrate ubiquitylation is defined by selective binding of the E3 ligase and can be detected by western blotting of the in vitro reaction. Furthermore, an E2~Ub discharge assay is described, which is a useful tool for the direct assessment of functional E2-E3 cooperation. Here, the E3-dependent transfer of ubiquitin is followed from the corresponding E2 enzyme onto free lysine amino acids (mimicking substrate ubiquitylation) or internal lysines of the E3 ligase itself (auto-ubiquitylation). In conclusion, three different in vitro protocols are provided that are fast and easy to perform to address E3 ligase catalytic functionality.

In Vitro Analysis of E3 Ubiquitin Ligase Function

The present study provides detailed in vitro ubiquitylation assay protocols for the analysis of E3 ubiquitin ligase catalytic activity. Recombinant proteins were expressed using prokaryotic systems such as Escherichia coli culture.

In vitro Analyse der E3-Ubiquitin-Ligase-Funktion

The covalent attachment of ubiquitin (Ub) to internal lysine residue(s) of a substrate protein, a process termed ubiquitylation, represents one of the ...