Für die EPF-Rückgewinnung aus der Pilzbibliothek beginnen Sie damit, die Pilzisolate auf eine SDA-Platte mit viertel Stärke zu schmieren. Inkubieren Sie sie 10-14 Tage lang im Dunkeln bei 25 Grad Celsius vor der Konidienernte. Anschließend werden 2-3 ml 0,03 % Tween 80 auf eine kultivierte Platte pipettiert.
Verwenden Sie dann eine Impfschlaufe, um die Konidien abzukratzen. Als nächstes wird die Pilzsuspension in ein Zentrifugenröhrchen überführt. Wirbeln Sie die Suspension kräftig mit höchster Geschwindigkeit und pipettieren Sie dann eine Probe in ein Hämozytometer, um die Anzahl der Konidien zu zählen.
Verdünnen Sie die Konidien in der Suspension mit 0,03 % Tween 80, bis die gewünschte Konzentration erreicht ist. Um die Impfkammer vorzubereiten, schneiden Sie zunächst eine Blattscheibe mit einem Durchmesser von 9 Zentimetern mit der unteren Petrischale als Form oder mit einer Schere. Als nächstes bereitest du für jedes Gericht 1,5%iges Wasser-Agar in der Mikrowelle zu.
Gießen Sie 30 ml des abgekühlten Wasser-Agars in die Petrischale und lassen Sie es in einer Laminar-Flow-Haube erstarren. Wenn die Agaroberfläche halbfest ist, legen Sie die Blattscheibe mit der abaxialen Oberfläche nach oben auf und drücken Sie sie dann leicht an, um sie in den Agar einzubetten. Setze nun 20 erwachsene Tiere auf die Blattscheibe.
Öffnen Sie den Deckel der Impfkammer, um 0,3 ml Konidiensuspension direkt auf die Blattläuse und die Blattscheibe zu sprühen. Sobald die Suspension getrocknet ist, schließen Sie den Deckel, um das Ertrinken der Senfblattläuse zu verhindern. Anschließend wird die Impfkammer mit Paraffinfolie verschlossen, um eine hohe Luftfeuchtigkeit aufrechtzuerhalten.
Stellen Sie die Kammer in einen Inkubator, der auf eine Temperatur von 25 Grad Celsius mit einer hellen und dunklen Photoperiode von jeweils 12 Stunden eingestellt ist. Verwenden Sie ein Stereomikroskop, um die Mortalität alle 12 Stunden für 5 Tage zu zählen. Das Virulenz-Screening ergab eine konsistente Überlebensrate für Senfblattläuse, wobei die Kontrollgruppe eine Überlebensrate von 85 % aufwies.
Cordyceps cateninnulata zeigte die schnellste Fähigkeit zur Abtötung von Blattläusen, was zu einer Moral von 50 % und 90 % nach der Inokulation (DPI) führte. Die Beauveria-Stämme 141, 143 und 153 zeigten langsame Blattläuse-Tötungsfähigkeiten mit nur 5 % Mortalität bei 3 DPI. Abgesehen von Purpureocillium wiesen die meisten EPF-Isolate korrigierte Mortalitätsraten von mehr als 70 % innerhalb von 5 DPI auf.
Beauveria bassiana wies die höchste Mortalitätsrate von 100 % unter den EPF-Isolaten auf. Die EPF-Mykose wurde während des Virulenzscreenings an Kadavern von Senfblattläusen beobachtet, die mit Metarhizium-Arten, Beauveria-Arten, Purpureocillium lilacinum und Cordyceps cateniannulata infiziert waren.
