Beginnen Sie damit, eine anästhesierte Maus auf der rechten Seite auf einem beheizten chirurgischen Ständer zu positionieren, um ihren linken Bauch freizulegen. Verankern Sie das vordere Ende und die Hintergliedmaßen der Maus mit Papierklebeband, um die Sichtbarkeit der Milz zu gewährleisten. Desinfizieren Sie anschließend die Haut an der Operationsstelle, indem Sie großzügig ein Antiseptikum auftragen.
Vergewissern Sie sich, dass die Maus vollständig betäubt ist, indem Sie den Zeh einklemmen. Heben Sie mit einer Pinzette die Haut des linken Oberbauchs an und machen Sie mit einer Castroviejo-Schere einen 10 Millimeter langen kreisförmigen Schnitt in die Haut- und Muskelschicht. Lokalisiere die Bauchspeicheldrüse, die an der Milz befestigt ist, um die Richtung zu bestimmen, in der der Kreuzstich platziert werden soll.
Verwenden Sie eine 5/0-Seidennaht, um die erste Masche in der Muskelschicht an der identifizierten Stelle zu platzieren. Befestigen Sie das Ende mit drei bis fünf Knoten. Fahren Sie mit dem Nähen direkt über den Schnitt fort.
Schneiden Sie dann ab und lassen Sie einen Schwanz von etwa fünf Zentimetern stehen. Wiederholen Sie das Nähen, diesmal senkrecht zum Originalstich. Als nächstes hebst du die Bauchspeicheldrüse vorsichtig an und positionierst sie über dem Kreuzstich.
Platzieren Sie einen Handtaschen-Schnurstich etwa einen Millimeter vom Loch entfernt und verschränken Sie die Haut- und Muskelschicht. Positionieren Sie den Fensterrahmen so, dass sich die kreisförmigen Einschnittkanten innerhalb der Nut des Fensters befinden. Befestigen Sie nun das implantierte Fenster, indem Sie die 5/0-Seide fest festbinden.
Geben Sie 100 Mikroliter flüssigen Cyanacrylat-Klebstoff in eine 10-Millimeter-Spritze. Wenden Sie einen sanften Druckluftstrahl etwa 10 Sekunden lang auf das Gewebe an, um es zu trocknen. Fassen Sie den Fensterrahmen mit einer Pinzette an der Außenkante fest und heben Sie ihn vorsichtig an, um sicherzustellen, dass die Bauchspeicheldrüse von der Basis des Fensterrahmens getrennt ist.
Tragen Sie eine dünne Schicht flüssigen Cyanacrylat-Klebstoffs entlang der Aussparung des Fensters auf und vermeiden Sie dabei das Bauchspeicheldrüsengewebe. Verwenden Sie dann Vakuum-Pickups, um das fünf Millimeter große Deckglas anzuheben. Positionieren Sie das Deckglas vorsichtig in der Mitte des optischen Fensterrahmens und halten Sie ca. 25 Sekunden lang leichten Druck aufrecht, damit der Klebstoff aushärten kann.
Lösen Sie das Deckglas mit einer Pinzette von den Vakuum-Tonabnehmern. Ziehen Sie als Nächstes die Kreuzstichnähte fest, um die Bauchspeicheldrüse am Deckglas zu befestigen, und schneiden Sie die Nahtenden ab. Zum Schluss entfernst du das Klebeband von der Maus.
Schalten Sie den Isofluran-Vaporizer aus und stellen Sie die Maus in einen sauberen Käfig. Eine erhöhte laterale und axiale Stabilität des Pankreasgewebes wurde nach der Eingewöhnungsphase beobachtet. Die Bildgebung mit dem SWIP zeigte eine geringere Drift im Vergleich zu den Abdominal- und Pankreas-Bildgebungsfenstern.
Eine serielle Bildgebung der murinen Bauchspeicheldrüse wurde nach der Behandlung mit Cerulein durchgeführt. Die Lobule-Verlagerung wurde nach zwei aufeinanderfolgenden Tagen beobachtet. Das SWIP kann auch für die Langzeitbildgebung verwendet werden, um die Visualisierung und Quantifizierung der Vakuolenmotilität zu ermöglichen.
Zum Beispiel erhöhte sich die durchschnittliche Geschwindigkeit der Vakuolen in der murinen Bauchspeicheldrüse nach der Behandlung mit Cerulein um etwa 10 % im Vergleich zu PBS. Die Behandlung mit Cerulein erhöhte auch die durchschnittliche Drehfrequenz der subzellulären Strukturen um 10 %. Es gab jedoch keinen signifikanten Unterschied in der Nettogeschwindigkeit, der Richtungsabhängigkeit oder dem kumulativen Abstand zwischen den Behandlungen. SWIP ermöglicht die Visualisierung und Erfassung der Tumorzellmigration.
Die kollektive Clusterzellmigration von Tumorzellen wurde über kurze Zeiträume beobachtet. Die Migration einzelner Zellen von Tumorzellen und Makrophagen wurde ebenfalls beobachtet.
