Zu Beginn legen Sie den vorbereiteten Rückenmarksschnitt in die Aufnahmekammer. Platzieren Sie dann die Anode des Mikromanipulationssystems in der Nähe der dorsalen Mittellinie in der Kathode in der Nähe der dorsalen Wurzeleintrittszone, um den Rückenmarkstimulator richtig zu positionieren. Wechseln Sie nun zu einem 60-fachen Objektiv, um ein gesundes Neuron mit einer glatten und hellen Oberfläche ohne sichtbare Kerne zu identifizieren.
Verringern Sie die Infrarotintensität leicht, schalten Sie die Fluoreszenzlichtquelle ein und stellen Sie den Lichtfilter auf die Breitband-Ultraviolett-Anregungsoption ein. Wählen Sie nun ein geeignetes Fluor-Gold-positives Motoneuron aus und senken Sie die Elektrode allmählich ab, bis sie sich in der Nähe des Neurons befindet. Wenn die Pipette ihre Oberfläche berührt, suchen Sie nach einer kleinen Vertiefung der Membran auf Höhe der Spitze und lassen Sie den zuvor angelegten Überdruck ab.
Legen Sie dann mit einer Spritze Unterdruck auf die Pipette an und warten Sie, bis der Widerstandswert auf der Softwareschnittstelle auf Gigaohm ansteigt. Klemmen Sie das Membranpotential auf minus 70 Millivolt. Drücken Sie die Taste für die schnelle Kapazitätskompensation auf der Softwareschnittstelle des Verstärkers, üben Sie dann einen kurzen Unterdruck aus, um die Zellmembran zu zerreißen, und drücken Sie die Taste für die langsame Kapazitätskompensation auf der Softwareschnittstelle des Verstärkers.
Wenden Sie die Rückenmarkstimulation ein bis zwei Sekunden lang an und halten Sie die Amplitude zwischen einem und 10 Milliampere. Bestimmen Sie die motorische Schwelle, indem Sie die Stimulationsamplitude schrittweise erhöhen, bis das erste Aktionspotential beobachtet wird. Unterscheidung von verzögerten und sofort feuernden Motoneuronen durch eine fünfsekündige depolarisierende Strominjektion um die Rheobase im Stromklemmmodus.
Nachdem Sie die Rückenmarkstimulation ausgeschaltet haben, fahren Sie mit der Aufzeichnung der Membranpotentiale fort, um die spontanen Aktionspotentiale einzufangen. Wenn die Amplitude der Rückenmarkstimulation erhöht wurde, wurde das Membranpotential erhöht und die Aktionspotentiale wurden alle 10 bis 20 Impulse ausgelöst. Nachdem die Rückenmarkstimulation ausgeschaltet wurde, feuerte das Neuron für kurze Zeit eine Reihe spontaner Aktionspotentiale ab.
Dann kehrte das Ruhemembranpotential auf minus 65 Millivolt zurück.
