Um mit der Methode des hängenden Tropfens zu beginnen, pipettieren Sie 20 Mikroliter einer vorbereiteten Hautzellsuspension auf den Deckel einer Petrischale. Bedecke nun den Deckel mit der unteren Hälfte der Petrischale und drehe sie vorsichtig um, um die hängenden Tropfen zu erzeugen. Geben Sie steriles Wasser in die Petrischale, um die Verdunstung des ausgewachsenen Mediums durch Tröpfchen zu verhindern.
Inkubieren Sie die Tröpfchen 48 bis 72 Stunden lang bei 37 Grad Celsius. Füllen Sie als Nächstes die Vertiefungen einer neuen Platte mit dem vollen Wachstumsmedium. Übertragen Sie die Zellkügelchen mit steril geschnittenen Pipettenspitzen in die Vertiefungen der Multi-Well-Platte.
Inkubieren Sie die übertragenen Kugeln einen Tag lang in der Multiwell-Platte bei 37 Grad Celsius, bevor Sie experimentieren. Für die Methode zur Begrenzung der Zelladhäsion geben Sie zunächst 100 Mikroliter 1%ige Tensidlösung in PBS in jede Vertiefung einer U-Bodenplatte. Inkubieren Sie anschließend die Platte mit der Lösung 24 Stunden lang bei 37 Grad Celsius.
Bereiten Sie nun die Zellsuspension in der gewünschten Zelldichte vor. Pipettieren Sie die Tensidlösung aus den Vertiefungen aus und säen Sie dann 50 Mikroliter der Zellsuspension in jede Vertiefung. Zum Schluss inkubieren Sie die Platte 24 Stunden lang bei 37 Grad Celsius, um Zellaggregate zu erreichen.
Kugeln, die aus 10.000 Zellen bestanden, waren leichter zu manipulieren, da sie in den Vertiefungen sichtbar waren. Die größeren Kugeln zeigten eine verminderte Stabilität. Unterschiedliche Zelltypen bildeten Kugeln in unterschiedlichen Farben.
Die perfekt abgerundeten Kugeln neigten dazu, bei der Übertragung im Hanging Drop-Verfahren ihre Form zu verlieren. Eine genaue Handhabung war erforderlich, um die Verformung zu reduzieren, was zu intakten Zellaggregaten führte. Ungenauigkeit und Unerfahrenheit führten zu Kugelschäden.
