Übertragen Sie zunächst mit einem Pinsel entchlorte Drosophila-Embryonen auf einen langen Streifen Traubenagar. Verwenden Sie eine Präpariernadel, um etwa 60 Embryonen entlang des Randes des Streifens zu säumen, wobei die Hinterteile nach außen zeigen. Platzieren Sie nun ein 18 Millimeter langes doppelseitiges Klebeband in Längsrichtung entlang der Kante eines Deckglases.
Drücken Sie nach dem Entfernen der Unterlage den Deckglas vorsichtig auf die ausgerichteten Embryonen und geben Sie den Deckglas mit den Embryonen in eine Schachtel mit einem Trockenmittel. Fügen Sie Halo-Kohlenstofföl darüber hinzu. Um die Embryonen zu mikroinjizieren, laden Sie zunächst zwei Mikroliter DNA mit einer ausgestreckten Pipette in eine Nadel.
Legen Sie die ausgerichteten Embryonen mit Halo-Kohlenöl unter ein inverses Mikroskop. Verwenden Sie als Nächstes einen Mikromanipulator, um die Nadel in die hinteren Enden eines Embryos einzuführen. Injizieren Sie mit dem Fußschalter vorsichtig die DNA in den Embryo.
Entfernen Sie die Nadel nach Abschluss der Mikroinjektion des ersten Embryos und bewegen Sie sie dann zum hinteren Ende des nächsten Embryos. Übertragen Sie die injizierten Embryonen zur Inkubation in eine Agarplatte. Wenn die Eier geschlüpft sind, bereiten Sie ein Fläschchen mit Futter vor.
Geben Sie ein paar Tropfen destilliertes Wasser in das Fläschchen. Sammeln Sie mit einem Stereomikroskop und einem Pinsel die geschlüpften Larven und übertragen Sie sie dann in das Fläschchen. Inkubieren Sie das Fläschchen 10 Tage lang bei 25 Grad Celsius bei 50 % bis 60 % Luftfeuchtigkeit.
Übergetrocknete Embryonen erscheinen deformiert und können nicht für Mikroinjektionen verwendet werden. Bei untergetrockneten Embryonen trat beim Punktieren eine große Menge Zytoplasma aus, wodurch die Überlebensraten verringert wurden. Entsprechend getrocknete Embryonen leckten, wenn überhaupt, bei der Injektion nur ein geringes Volumen.
Die Drosophila-Linie, die die phiC31-Integrase exprimiert, die für die Mikroinjektion des Embryos verwendet wird, hatte weiße Augen. Die gealterten Fliegen dieses Genotyps haben rosa Augen, die auf akkumuliertes rot fluoreszierendes Protein zurückzuführen sind, das spezifisch im Auge exprimiert wird. Transgene Fliegen, die an der attP2-Andockstelle ein Transgen mit orangefarbenen Augen trugen, wurden erfolgreich hergestellt.
