Bereiten Sie zunächst die anästhesierte Ratte für die Elektrophysiologie vor und positionieren Sie sie. Wenden Sie monophasische kathartische Rechteckimpulse an, um den Nervus phrenicus für die Aufzeichnung von CMAP-Reaktionen zu stimulieren. Erhöhen Sie die Reizintensität schrittweise, bis die Amplitude der Reaktion nicht mehr zunimmt.
Erhöhen Sie dann die Reizintensität auf etwa 120 % des Niveaus, das für eine maximale Reaktion erforderlich ist, um eine supermaximale Stimulation zu gewährleisten und eine zusätzliche Reaktion aufzuzeichnen. Messen und dokumentieren Sie die Spitze-zu-Spitze-Amplituden des CMAP in Millivolt. Verabreichen Sie eine submaximale Stimulation mit einer Dauer von 0,1 Millisekunden bei einer Frequenz von 1 Hertz.
Erhöhen Sie die Intensität schrittweise in Schritten von 0,03 Milliampere, um inkrementelle Reaktionen hervorzurufen, bis eine minimale Alles- oder Nichts-Reaktion erreicht ist. Erfassen Sie dann die erste Reaktion mit einer Reizintensität zwischen 2 und 10 Milliampere. Nachdem Sie die erste inkrementelle Reaktion gespeichert haben, erfassen Sie zusätzliche Inkremente mit progressiv höheren Stimulusintensitäten in Schritten von 0,03 Milliampere.
Stellen Sie sicher, dass der anfängliche negative Peak der inkrementellen Reaktionen zeitlich mit dem negativen Peak der maximalen CMAP-Antwort übereinstimmt. Angesichts der Beteiligung des Zwerchfells an der Atmung überprüfen Sie, ob jede inkrementelle Reaktion stabil und nicht fraktioniert ist, um die Konsistenz über drei doppelte Reaktionen hinweg zu bestätigen. Beobachten Sie inkrementelle Reaktionen in Echtzeit und überlagern Sie sie zur visuellen Unterscheidung mit früheren Aufnahmen.
Vergewissern Sie sich dann, dass die Inkrementamplitude mindestens 25 Mikrovolt beträgt. Nachdem Sie 10 inkrementelle Reaktionen aufgezeichnet haben, stellen Sie sicher, dass die Amplitude jedes Inkrements 1/3 der Gesamtamplitude der endgültigen Antwort nicht überschreitet. Um die durchschnittliche Amplitude des SMUP zu schätzen, mitteln Sie die Werte in 10 Schritten.
Teilen Sie als Nächstes die maximale CMAP-Amplitude durch die durchschnittliche SMUP-Amplitude, um die MUNE zu bestimmen. Sieben Tage nach intrapleuraler CTB-SAP-Injektion sank die MUNE bei erwachsenen Ratten auf 60 funktionelle motorische Einheiten im Vergleich zu 74 bei Kontrollratten. Die CMAP-Amplitude blieb relativ stabil, was auf das Keimen von Kollateralen als möglichen Kompensationsmechanismus hindeutet.
Diaphragma CMAP, SMUP und MUNE wurden über 28 Tage nach der Injektion gemessen. CMAP zeigte keine nennenswerte Veränderung. Der durchschnittliche Anstieg der SMUP bei CTB-SAP-Ratten betrug etwa 50 bis 60 %. Die Veränderungen waren im Laufe der Zeit signifikant und wurden auf CTB-SAP zurückgeführt.
MUNE war bei CTB-SAP-Ratten um etwa 40% reduziert, was auf signifikante Auswirkungen der Zeit bei der CTB-SAP-Behandlung hinweist.
