Wir möchten an das Labor Technologen der Mayo Clinic Mycobacteriology Laboratory für ihre Hilfe danken während der Studie.

Jedes Labor muss eine Risikobewertung in Zusammenarbeit mit ihren Institutional Biological Safety Officer durchführen, um die entsprechende Sicherheitsstufe für die Vorbereitung des Inokulums und zum Pipettieren des Inokulums in die Platte zu bestimmen. In unserem Labor verwenden wir Sicherheitsstufe 3 Labor (BSL3) Praktiken, bis die Mikrotiterplatten geimpft sind, und mit einem Kunststoff-Kleber versiegeln. Diese Platten werden dann in einen Plastikbeutel, der Wärme-auch versiegelt. Incubation und Interpretation Lesen der Mikrotiterplatte wird in einem Labor der biologischen Sicherheitsstufe 2 (BSL2) durchgeführt. 1. Kennzeichnung von Materialien <ol><li> Beschriften Sie eine Blut-Agar-Platte, drei Middlebrook 7H10-Platten, Middlebrook 7H9-Bouillon, eine Kochsalzlösung zwischen Glasperlen Röhre und einer Mikrotiterplatte AST Platte mit den entsprechenden Kennungen (zB Name des Patienten, medizinische Datensatznummer) in der BSL2. </li><li> Beschriften Sie die Blut-Agar und 7H10 plated als &quot;Reinheit zu überprüfen&quot;. Periodische Koloniezahlen des Inokulums werden empfohlen, um sicherzustellen, dass eine geeignete Konzentration von Organismen in den Test verwendet wird. Colony zählt, wenn durchgeführt werden müssen, um zwei der 7H10-Platten mit &quot;1 / 1 Koloniezahl&quot; und &quot;1 / 50 Koloniezahl&quot; gekennzeichnet sind. </li></ol> 2. Technologist Vorbereitungen in den BSL3 gehen <ol><li> Geeignete persönliche Schutzausrüstung ist erforderlich, um in der BSL3 Arbeit und umfasst Solid-Front Kleid, Kopfbedeckung, Handschuhe, Überschuhe und ein Beatmungsgerät. Jedes Organ sollte ihre eigene Atemschutz-Plan in Zusammenarbeit festzulegen mit ihrer Institution Industrial Hygiene Officer. In unserem Labor haben wir mehrere Atemschutzgeräte zur Verfügung, darunter Gebläsefiltergeräte (PAPRs) und ausgestattet HEPA-Filter, N95 halbe Gesicht Atemschutzmasken. </li></ol> 3. Vorbereitung der biologischen Sicherheitswerkbank <ol><li> In der BSL3, bereiten die biologische Sicherheitswerkbank (BSC) durch Desinfektion der Oberfläche und platzieren Sie ein Papiertuch mit Desinfektionsmittel ca. 6 cm von der Entlüftung Panel getränkt. </li><li> Legen Sie einen Abfallbehälter auf der linken Seite, und kleine nephlometer und Vortexer auf der rechten Seite. </li><li> Impfösen, pipetors und Tipps sind neben dem Papiertuch gelegt. </li><li> Legen Sie ein Rack mit dem Organismus (in Brühe oder auf festem Medium) und dem McFarland 0,5 Standard auf dem Papiertuch. </li></ol> 4. Die Kalibrierung des Nephelometer <ol><li> Legen Sie eine Kochsalzlösung zwischen Glasperlen Röhre im Nephelometer und stellen Sie das Gerät auf Null mit der Salzlösung zwischen leer. </li><li> Setzen Sie den McFarland 0,5 Standard im Nephelometer und kalibrieren nach den Anweisungen des Herstellers. </li></ol> 5. Vorbereitung des Inokulums <ol><li> Arbeiten in der BSC, kratzen Kolonien von festen Medium mit einer sterilen Schleife in die entsprechend gekennzeichneten Kochsalzlösung zwischen Glasperlen Röhre, bis eine ≥ 0,5 McFarland Standard erreicht wird. </li><li> Sichtprüfung der Probe, und im Vergleich zu den McFarland Standard. </li><li> Vortex Probe für 30-60 Sekunden. </li><li> Lassen Sie das Inokulum für 15 Minuten absetzen (einen Timer). </li></ol> 6. Inokulation der Mikrotiterplatte <ol><li> Passen Sie das Inokulum mit Kochsalzlösung zwischen Brühe mit dem Nephelometer kalibriert, um die McFarland 0,5 in Stufen 4,1 und 4,2. Dies muss innerhalb von 30 Minuten (je Hersteller-Spezifikationen) abgeschlossen sein. </li><li> Verwenden Sie ein 200 ul Pipette und eine LONG Aerosol resistent Pipettenspitze zu 100 ul Inokulum aus dem TOP 1 / 3 rd der Saline Wulst zwischen Rohr zu entfernen. Beimpfen Middlebrook 7H9 Broth. Langsam Wirbel der beimpften 7H9-Bouillon für 20 Sekunden. </li><li> Entfernen Sie das AST Mikrotiterplatte von der Hersteller-Paket. NICHT verwenden, wenn das Trockenmittel ist blau oder wenn die Folienverpackung beschädigt ist. </li><li> Bereiten Sie eine 1:50-Verdünnung Rohr für die spätere Verwendung in der Vorbereitung der 1:50-Verdünnung durch Pipettieren 50 ul sterilem Wasser in einem sterilen Röhrchen. </li><li> Gießen Sie die Brühe 7H9 Inokulums in einen Trog. AVOID Aerosolerzeugung. </li><li> Legen Sie die AST-Mikrotiterplatte mit dem Etikett nach oben ein. </li><li> Verwenden Sie ein 12-Kanal-Pipette auf 100 ul des Inokulums zu jedem Well hinzu. </li><li> Verdünnungen für Koloniezahlen: <ol type="a"><li> Der 1 / 1 Verdünnung ist von der positiven Kontrolle und (H12) durch Ausstreichen 1 ul-Schleife auf dem 7H10 Platte mit der Aufschrift &quot;1 / 1&quot; vorbereitet. </li><li> Die 1 / 50 Verdünnung durch Animpfen einer 1 ul Schleife von der positiven Kontrolle und (H12) und wirbelnden es in das Rohr mit 50 ul Wasser Rohr hergestellt wie oben beschrieben vorbereitet. Streak 1 ul dieser Verdünnung auf die Platte mit der Aufschrift &quot;1 / 50&quot;. </li></ol></li><li> Inoculate die Reinheit Platten aus dem Trog durch Pipettieren 50 ul auf eine entsprechend gekennzeichnet Blutagar und 7H10 Platten-und Streifen für die Isolierung. </li><li> OrtKlebstoff Siegel auf der AST-Mikrotiterplatte. Drücken Sie fest auf jede Vertiefung eine ausreichende Abdichtung mit dem weißen Rücken der Dichtung zu gewährleisten. Vermeiden Sie Knicke. </li><li> Desinfizieren Sie die Mikrotiterplatte durch Abwischen mit einem Papiertuch mit einem tuberkuloziden Desinfektionsmittel und Ort Mikrotiterplatte in eine Plastiktüte und schließen mit einer Wärme-Siegel oder Tape eingelegt. <ol type="a"><li> Der Plastikbeutel dient als sekundäre Behälter, um sicherzustellen, dass alle Brühe enthalten ist, sollte es ein Leck oder spill der primären Platte sein. </li></ol></li></ol> 7. Desinfektion von Materialien und biologischen Sicherheitswerkbank <ol><li> Um zu vermeiden, produzieren Aerosole, legen Sie eine weitere Rinne auf der Oberseite des Troges geimpft, bevor Sie ihn sanft in die verwerfen Container. </li><li> Desinfizieren Sie alle Materialien, einschließlich nephlometer, Vortexer, Platten, Rohre, etc. durch Abwischen mit einem tuberkuloziden Desinfektionsmittel und warten den richtigen Zeitpunkt der Desinfektion gemäß den Anweisungen des Herstellers zu versichern, bevor Sie aus dem BSC. Zum Beispiel erfordert ProSpray, tuberkuloziden Desinfektionsmittel verwenden wir, 15 Minuten, um zu töten Mykobakterien. </li><li> Legen Sie die zu verwerfen Behälter an einem biohazard Tasche und Dichtung vor dem Autoklavieren. </li></ol> 8. Incubation <ol><li> Die Platten sollten mit den Medien inkubiert unten und darauf zu achten, damit kein Spritzwasser oder eine Flüssigkeit sein. </li><li> Inkubieren Sie die AST Mikrotiterplatte Platte, 7H10 und Blut-Agar-Platten in einem 35-37 ° C Inkubator mit 5-10% CO 2 mit 5-10% CO 2 in die BSL2 Labor. <ol class="lalpha"><li> In unserem Labor ist dies akzeptabel, da die Platte ist gut verschlossen und in einem verschlossenen Plastikbeutel. </li></ol></li><li> Nicht mehr als 2 Mikrotiterplatten AST Platten sollten in den Inkubator nach den Anweisungen des Herstellers gestapelt werden. </li></ol> 9. Repräsentative Ergebnisse Die Interpretation der Ergebnisse: Sealed AST Mikrotiterplatten lesen kann manuell über einen Spiegel als Hilfsmittel oder mit einem automatisierten Platten-Lesegerät wie dem Vizion (TREK Diagnostics) werden. Die Platten können so bald wie 7 Tage nach der Impfung untersucht werden. Untersuchen Sie das Wachstum Kontrollvertiefungen in Positionen H11 und H12, um festzustellen, ob sie positiv (dh, eine Anzahlung von Zellen am Boden des Brunnens) sind. Wenn das Wachstum Kontrollvertiefungen nicht positiv sind, inkubieren der Platte und in regelmäßigen Abständen erneut zu prüfen (zB, Tag 10, Tag 14), bis das Wachstum Kontrollvertiefungen positiv sind. <ol type="a"><li> Spiegel zu lesen: <ol type="i"><li> Ort versiegelt AST Mikrotiterplatte auf die Plattform; </li><li> Lesen Wachstum Kontrollvertiefungen nach 7 Tagen Inkubation, wenn dieser negativ ist, inkubieren AST Mikrotiterplatte; </li><li> Wenn das Wachstum steuert akzeptabel sind, dann lesen Sie das Medikament enthaltenden Brunnen. Für für jedes Medikament, notieren Sie die erste Verdünnung, dass kein Wachstum wurde durch den Vergleich der Drogen-Brunnen mit dem Wachstum zu kontrollieren. </li><li> Das Wachstum wird als Trübung oder als Ablagerung von Zellen am Boden eines Brunnens. </li></ol></li><li> Instrument Lesen Sie: Folgen Sie den Anweisungen des Herstellers, die folgenden Anweisungen sind ein Beispiel dafür, wie die Lesart mit dem Vizion Plattform durchgeführt werden: <ol type="i"><li> Log in. </li><li> Verwenden Sie &quot;MYCOTB&quot; AST Platte Software. </li><li> Ort versiegelt Platte mit dem Barcode mit Blick auf den Benutzer. Das Wachstum wird als Trübung oder als Ablagerung von Zellen am Boden eines Brunnens. </li><li> Lesen Sie das Wachstum kontrolliert, wenn dieser negativ ist, inkubieren AST Mikrotiterplatte, wenn positive lesen Sie die Platte durch Berühren des Bildschirms mit dem ersten und jedes Medikament, das nicht angezeigt wird Wachstum. </li></ol></li></ol> Lesen Reinheit Platten. Das Blut-Agar-Platte sollte kein Wachstum nach 48 Stunden zeigen und die 7H10 Reinheit Platte sollte konfluenten Wachstum eines Organismus Typ haben. Falls kontaminiert, muss das AST Mikrotiter-Test von einer Reinkultur wiederholt werden. Berechnen Koloniezahlen von der positiven Kontrolle auch in der folgenden Tabelle: Koloniezahl Key <table border="1"><tbody><tr><td> # Kolonien auf der Platte mit der Aufschrift &quot;1 / 1&quot; gezählt </td><td> # Kolonien auf der Platte mit der Aufschrift &quot;1 / 50&quot; gezählt </td><td> Inokulum Koloniezahl (KBE / ml) </td></tr><tr><td> &lt;50 </td><td> 0 </td><td> &lt;5 X 10 4 </td></tr><tr><td> 50-100 </td><td> 0-2 </td><td> 5 X 04 bis 1 Oktober X 10 5 </td></tr><tr><td> &gt; 100 </td><td> ≤ 10 </td><td> 1 X 05 bis 5 Oktober X 10 5 </td></tr><tr><td> &gt; 100 </td><td> &gt; 10 </td><td> &gt; 5 X 10 5 </td></tr></tbody></table> Es kann mit Para-Aminosalicylsäure werden nachgestellte in einigen Stämmen von Mycobacterium Tuberkulosesis. Dies können Sie an allen Brunnen, Pellets und mit dem ersten gut, dass die gleiche Größe Pellet wurde als die nächste Verdünnung als Endpunkt interpretiert werden. Widerstand ist selten mit dieser Droge. <img src="/files/ftp_upload/3094/3094fig1.jpg" alt="Abbildung 1"/> Abbildung 1. Repräsentative Ergebnisse mit dem MYCOTB Platte. <table border="1"><tbody><tr><td> Drug Abkürzung </td><td> Medikament </td><td> MIC μ / ml </td></tr><tr><td> OFL </td><td> Ofloxacin </td><td> 16 </td></tr><tr><td> MXF </td><td> Moxifloxacin </td><td> 8 </td></tr><tr><td> RIF </td><td> Rifampicin </td><td> &gt; 16 </td></tr><tr><td> AMI </td><td> Amikacin </td><td> 0,5 </td></tr><tr><td> STR </td><td> Streptomycin </td><td> 16 </td></tr><tr><td> RFB </td><td> Rifabutin </td><td> 8 </td></tr><tr><td> PAS </td><td> p-Aminosalicylsäure </td><td> ≤ 0,5 </td></tr><tr><td> ETH </td><td> Ethionamid </td><td> 5 </td></tr><tr><td> CYC </td><td> Cycloserin </td><td> 4 </td></tr><tr><td> INH </td><td> Isoniazid </td><td> 2 </td></tr><tr><td> KAN </td><td> Kanamycin </td><td> 1,2 </td></tr><tr><td> EMB </td><td> Ethambutol </td><td> 4,0 </td></tr></tbody></table>

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	<li>Wengenack, N., Hall, L., Labombardi, V., Parrish, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+New+Sensititre+(MYCOTB)+MIC+Plate+for+the+Susceptibility+Testing+of+Mycobacterium+tuberculosis+(Mtb)+to+First+and+Second+Line+Drugs.">Evaluation of the New Sensititre (MYCOTB) MIC Plate for the Susceptibility Testing of Mycobacterium tuberculosis (Mtb) to First and Second Line Drugs.</a> , (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HHS+Publication+No.+(CDC)+21-112:+Biosafety+in+Microbiological+and+Biomedical+Laboratories+(BMBL).">HHS Publication No. (CDC) 21-112: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL).</a> U.S. Department of Health and Human Services Centers for Disease and Preventions. , (2009).</li><li>Morcillo, N., Imperiale, B., Digiulio, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+MGIT+960+and+the+colorimetric-based+method+for+tuberculosis+drug+susceptibility+testing.">Evaluation of MGIT 960 and the colorimetric-based method for tuberculosis drug susceptibility testing.</a> Int J Tuberc Lung Dis. 14, 1169-1175 (2010).</li><li>Bemer, P., Bodmer, T., Munzinger, J., Perrin, M., Vincent, V., Drugeon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicenter+Evaluation+of+the+MB/BACT+System+for+Susceptibility+Testing+of+Mycobacterium+tuberculosis.">Multicenter Evaluation of the MB/BACT System for Susceptibility Testing of Mycobacterium tuberculosis.</a> J Clin Microbiol. 42, 1030-1034 (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SENSITITRE+MYCOTB+Susceptibility+Plate:+For+Mycobacterium+Susceptibility+Testing.">SENSITITRE MYCOTB Susceptibility Plate: For Mycobacterium Susceptibility Testing.</a> Product Insert. , (2010).</li><li>CLSI. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Susceptiblity Testing of Mycobacteria, Nocardia, and Other Aerobic Actinomycetes; Approved Standard. Document M24-A. , (2003).</li><li>Sullivan, N., Sotos, J., Anhalt, K., Allen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+results+from+a+new+TREK+Sensititre+Mycobacterium+tuberculosis+MIC+plate+(MYCOTB).">Preliminary results from a new TREK Sensititre Mycobacterium tuberculosis MIC plate (MYCOTB).</a> , (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VersaTREK+MYCO+SUSCEPTIBLITY+KIT.">VersaTREK MYCO SUSCEPTIBLITY KIT.</a> Product insert. , 7115-7160 (2008).</li><li>Parrish, N. M., Carroll, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+the+Clinical+Mycobacteriology+Laboratory+in+the+Diagnosis+and+Management+of+Tuberculosis+in+Low+Prevalance+Settings.">The Role of the Clinical Mycobacteriology Laboratory in the Diagnosis and Management of Tuberculosis in Low Prevalance Settings.</a> J Clin Microbiol. , (2010).</li><li>Kam, K. M., Sloutsky, A., Yip, C. W., Bulled, N., Zingol, M., Espinal, M., Kim, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+critical+concentrations+of+second-line+anti-tuberculosis+drugs+with+clinical+and+microbiological+relevance.">Determination of critical concentrations of second-line anti-tuberculosis drugs with clinical and microbiological relevance.</a> Int J Tubercl Lung Dis. 14, 282-288 (2010).</li><li>Woods, G. L., Warren, N. G., Inderlied, C. B., Murray, P. R., Barron, E. J., Jorgensen, J. H., Landry, M. L., Pfaller, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+Test+Methods:+Mycobacteria,+Nocardia,+and+Other+Actinomycetes.">Susceptibility Test Methods: Mycobacteria, Nocardia, and Other Actinomycetes.</a> Manual of Clinical Microbiology. , 1223-1247 (2007).</li><li>Bergmann, J. S., Woods, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+ESP+Culture+System+II+for+Testing+Susceptibilities+of+Mycobacterium+tuberculosis+Isolates+to+Four+Primary+Antituberculosis+Drugs.">Evaluation of the ESP Culture System II for Testing Susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis Isolates to Four Primary Antituberculosis Drugs.</a> J Clin Microbiol. 36, 2940-2943 (1998).</li></ol>

Ein Beispiel für eine AST Mikrotiterplatte, dass ein positives Wachstum steuert hat, ist in Abbildung 1 dargestellt, und der Endpunkt MIC (ug / ml) für jedes Medikament ist eingekreist. Eine Studie in unserem Labor durchgeführt angedeutet, dass die AST Mikrotiterplatte Methode entspricht dem Goldstandard Agar Anteil Methode für die Empfindlichkeitsprüfung von Mycobacterium tuberculosis ist. Schnellere Berichterstattung über die Ergebnisse mit Mikrotiter AST Mikrotiterplatte wurde erhalten, wenn die traditionellen Agar Anteil Methode mit der endgültigen Interpretation für AST Mikrotiterplatte und Agar Anteil Methode bei 14 und 21 Tagen hat gegenüber respectively.The AST Mikrotiterplatte den Vorteil des Testens ersten und zweiten Zeile Drogen gleichzeitig mit deren Hilfe verhindert übermäßige Verzögerungen bei resistenten Stämmen können. Die AST Mikrotiterplatte ist auch viel einfacher einzurichten und zu lesen als die APM und sowohl eine manuelle Spiegel und ein halbautomatisches System, wie die VIZION kann verwendet werden, um die Platten gelesen werden. Die Verfügbarkeit eines MIC-Wert für TB-Medikamente Resistenzen können wertvolle neue Informationen für Ärzte in Bezug auf die traditionelle kritische Konzentration Mehrwert zu bieten, vor allem für diejenigen Isolate mit &quot;borderline&quot; Anfälligkeit.

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Reagenzes </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th></tr><tr><td> AST Mikrotiterplatten und Klebedichtung </td><td> TREK Diagnostics, Cleveland Ohio </td><td> MYCOTB </td></tr><tr><td> McFarland 0,5 Standard- </td><td> TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio </td><td> E1041 </td></tr><tr><td> Middlebrook 7H10-Platten </td><td> Fischer </td><td></td></tr><tr><td> Blutagarplatten </td><td> Fischer </td><td></td></tr><tr><td> Sterile Schleifen 1 ul </td><td> Fischer </td><td></td></tr><tr><td> Sterile Schleifen 10 ul </td><td> Fischer </td><td></td></tr><tr><td> Sensititre Saline-Tween Glasperlen Brühe </td><td> TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio </td><td> 27143 </td></tr><tr><td> 7H9 OADC Broth </td><td> TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio </td><td> T3440 </td></tr><tr><td> Lange Pipettenspitzen </td><td> Fischer </td><td></td></tr><tr><td> Sterile Tröge </td><td> TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio </td><td></td></tr><tr><td> M. tuberculosis </td><td> ATCC </td><td> 27294 </td></tr><tr><td> Pipeters: 1000, 200, 20 &amp;mgr; l </td><td> Fischer </td><td></td></tr><tr><td> Tipps 1000, 20, 20 ul </td><td> Fischer </td><td></td></tr><tr><td> Multichannel Pipetten </td><td> Fischer </td><td></td></tr><tr><td> Incubator 5-10% CO 2 </td><td> Fischer </td><td></td></tr><tr><td> Plastiktüten, klein, CO 2 durchlässig </td><td> Poly Plastic, Delano, PA </td><td></td></tr><tr><td> TB Desinfektionsmittel (So wie ProSpray C-60) </td><td> Certol International, Commerce City, CO </td><td> PSC60/32 </td></tr><tr><td> Spiegel Box Reader </td><td> Fischer </td><td></td></tr></tbody></table>

antimicrobial susceptibility testing of mycobacterium tuberculosis complex for first and second line drugs by broth dilution in a microtiter plate format

Die schnelle Erkennung von Antibiotikaresistenzen wird in dem Bemühen, den Anstieg der resistenten Mycobacterium tuberculosis (Mtb) Kontrolle wichtig. Antimikrobielle Empfindlichkeitsprüfung (AST) von Mtb wird traditionell von den Agar-Methode der Anteil oder durch macrobroth Tests auf einem Instrument wie dem BACTEC (Becton Dickinson, Sparks, MD), VersaTREK (TREK Diagnostics, Cleveland, OH) oder BacT / durchgeführt ALERT (bioMérieux, Hazelwood, MO). Die Agar-Anteil Methode, obwohl als &quot;Gold&quot;-Standard von AST, ist arbeitsintensiv und erfordert die Berechnung des Widerstandes, indem Koloniezahlen auf Drogen-haltigen Agar zu drogenfreien Agar verglichen. Wenn es ≥ 1% Wachstum auf das Medikament enthaltenden Medium, um Drogen-freiem Medium verglichen wird, ist der Organismus als resistent gegen das Medikament. Die macrobroth Methoden erfordern Mess-und Prüftechnik Haltepunkt (&quot;critical&quot;) Wirkstoffkonzentrationen für die erste Zeile Medikamente (Isoniazid, Ethambutol, Rifampicin und Pyrazinamid). Die hier beschriebene Methode ist im Handel erhältlich in einer 96-well Mikrotiterplatten-Format [MYCOTB (TREK Diagnostics)] und enthält steigenden Konzentrationen von 12 Antibiotika zur Behandlung von Tuberkulose verwendet werden, einschließlich sowohl der ersten (Isoniazid, Rifampicin, Ethambutol) und zweite Zeile Medikamente (Amikacin, Cycloserin Ethionamid, Kanamycin, Moxifloxacin, Ofloxacin, para-Aminosalicylsäure, Rifabutin, und Streptomycin). Pyrazinamid ist ein erster Linie Droge, nicht in der Mikrotiterplatte durch seine Notwendigkeit sauren Prüfbedingungen enthalten. Vorteile der Mikro-System gehören sowohl einfache Einrichtung und schneller Umdrehung um Zeit (14 Tage) im Vergleich zu traditionellen Agar Anteil (21 Tage). Darüber hinaus kann die Platte aus Inokulum hergestellt unter Verwendung von entweder Brühe oder festen Medium eingestellt werden. Da die Mikrotiterplatten-Format ist neu und seit Mtb präsentiert einzigartige Herausforderungen an die Sicherheit im Labor, dieses Protokoll wird beschrieben, wie Sie sicher Setup, inkubieren und lesen Sie die Mikrotiterplatte.

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Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium Tuberculosis Complex for First and Second Line Drugs by Broth Dilution in a Microtiter Plate Format

Antimikrobielle Empfindlichkeitsprüfung von Mycobacterium tuberculosis ist anspruchsvoll, aber von entscheidender Bedeutung für die Patientenversorgung. Diese Mikrotiterplatten-Format bietet Tests von 12 antimykobakterielle Drogen und bietet minimale hemmende Konzentration (MIC)-Werte, die in eine geeignete Behandlung helfen werden.

Antimikrobielle Empfindlichkeitsprüfung von Mycobacterium tuberculosis-Komplexes für die First und Second Line Drugs von Bouillon Verdünnung in einem Mikrotiterplatten-Format

The rapid detection of antimicrobial resistance is important in the effort to control the increase in resistant Mycobacterium 
tuberculosis (Mtb). ...

antimicrobial-susceptibility-testing-mycobacterium-tuberculosis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

38.0K Aufrufe.  Mayo Clinic. Antimikrobielle Empfindlichkeitsprüfung von Mycobacterium tuberculosis ist anspruchsvoll, aber von entscheidender Bedeutung für die Patientenversorgung. Diese Mikrotiterplatten-Format bietet Tests von 12 antimykobakterielle Drogen und bietet minimale hemmende Konzentration (MIC)-Werte, die in eine geeignete Behandlung helfen werden.

Serie: Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium Tuberculosis Complex for First and Second Line Drugs by Broth Dilution in a Microtiter Plate Format

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third most common infection in US hospitals. Different manifestations of candidiasis are associated with biofilm formation, both on host tissues and/or medical devices (i.e. catheters). Biofilm formation carries negative clinical implications, as cells within the biofilms are protected from host immune responses and from the action of antifungals. We have developed a simple, fast and robust in vitro model for the formation of C. albicans biofilms using 96 well microtiter-plates, which can also be used for biofilm antifungal susceptibility testing. The readout of this assay is colorimetric, based on the reduction of XTT (a tetrazolium salt) by metabolically active fungal biofilm cells. A typical experiment takes approximately 24 h for biofilm formation, with an additional 24 h for antifungal susceptibility testing. Because of its simplicity and the use of commonly available laboratory materials and equipment, this technique democratizes biofilm research and represents an important step towards the standardization of antifungal susceptibility testing of fungal biofilms.

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

We describe a simple, rapid and robust method for the formation of Candida albicans biofilms using 96 well microtiter plates and its utility in antifungal susceptibility testing of cells within biofilms.

Ein 96-well Mikrotiterplatte-basierten Methode zur Überwachung der Formation und antimykotische Empfindlichkeitsprüfung von Candida albicans Biofilme

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Sample Preparation of Mycobacterium tuberculosis Extracts for Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

Mycobacterium tuberculosis is a major cause of mortality in human beings on a global scale. The emergence of both multi- (MDR) and extensively-(XDR) drug-resistant strains threatens to derail current disease control efforts. Thus, there is an urgent need to develop drugs and vaccines that are more effective than those currently available. The genome of M. tuberculosis has been known for more than 10 years, yet there are important gaps in our knowledge of gene function and essentiality. Many studies have since used gene expression analysis at both the transcriptomic and proteomic levels to determine the effects of drugs, oxidants, and growth conditions on the global patterns of gene expression. Ultimately, the final response of these changes is reflected in the metabolic composition of the bacterium including a few thousand small molecular weight chemicals. Comparing the metabolic profiles of wild type and mutant strains, either untreated or treated with a particular drug, can effectively allow target identification and may lead to the development of novel inhibitors with anti-tubercular activity. Likewise, the effects of two or more conditions on the metabolome can also be assessed. Nuclear magnetic resonance (NMR) is a powerful technology that is used to identify and quantify metabolic intermediates. In this protocol, procedures for the preparation of M. tuberculosis cell extracts for NMR metabolomic analysis are described. Cell cultures are grown under appropriate conditions and required Biosafety Level 3 containment,1 harvested, and subjected to mechanical lysis while maintaining cold temperatures to maximize preservation of metabolites. Cell lysates are recovered, filtered sterilized, and stored at ultra-low temperatures. Aliquots from these cell extracts are plated on Middlebrook 7H9 agar for colony-forming units to verify absence of viable cells. Upon two months of incubation at 37 &deg;C, if no viable colonies are observed, samples are removed from the containment facility for downstream processing. Extracts are lyophilized, resuspended in deuterated buffer and injected in the NMR instrument, capturing spectroscopic data that is then subjected to statistical analysis. The procedures described can be applied for both one-dimensional (1D) 1H NMR and two-dimensional (2D) 1H-13C NMR analyses. This methodology provides more reliable small molecular weight metabolite identification and more reliable and sensitive quantitative analyses of cell extract metabolic compositions than chromatographic methods. Variations of the procedure described following the cell lysis step can also be adapted for parallel proteomic analysis.

Sample Preparation of Mycobacterium tuberculosis Extracts for Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

The metabolomic profile of Mycobacterium tuberculosis is determined after growth in broth cultures. Conditions can be varied to test the effects of nutritional supplements, oxidants, and anti-tuberculosis agents on the metabolic profile of this microorganism. Procedure for extract preparation is applicable for both 1D 1H and 2D 1H-13C NMR analyses.

Probenvorbereitung von<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Extrakte für Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

Mycobacterium tuberculosis is a major cause of mortality in human beings on a global scale. The emergence of both multi- (MDR) and extensively-(XDR) ...

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including antibiotics. Although stress tolerance of M. tuberculosis is one of the likely contributors to the 6-month long chemotherapy of tuberculosis 1, the molecular mechanisms underlying this characteristic phenotype of the pathogen remain unclear. Many microbial species have evolved to survive in stressful environments by self-assembling in highly organized, surface attached, and matrix encapsulated structures called biofilms 2-4. Growth in communities appears to be a preferred survival strategy of microbes, and is achieved through genetic components that regulate surface attachment, intercellular communications, and synthesis of extracellular polymeric substances (EPS) 5,6. The tolerance to environmental stress is likely facilitated by EPS, and perhaps by the physiological adaptation of individual bacilli to heterogeneous microenvironments within the complex architecture of biofilms 7.
In a series of recent papers we established that M. tuberculosis and Mycobacterium smegmatis have a strong propensity to grow in organized multicellular structures, called biofilms, which can tolerate more than 50 times the minimal inhibitory concentrations of the anti-tuberculosis drugs isoniazid and rifampicin 8-10. M. tuberculosis, however, intriguingly requires specific conditions to form mature biofilms, in particular 9:1 ratio of headspace: media as well as limited exchange of air with the atmosphere 9. Requirements of specialized environmental conditions could possibly be linked to the fact that M. tuberculosis is an obligate human pathogen and thus has adapted to tissue environments. In this publication we demonstrate methods for culturing M. tuberculosis biofilms in a bottle and a 12-well plate format, which is convenient for bacteriological as well as genetic studies. We have described the protocol for an attenuated strain of M. tuberculosis, mc27000, with deletion in the two loci, panCD and RD1, that are critical for in vivo growth of the pathogen 9. This strain can be safely used in a BSL-2 containment for understanding the basic biology of the tuberculosis pathogen thus avoiding the requirement of an expensive BSL-3 facility. The method can be extended, with appropriate modification in media, to grow biofilm of other culturable mycobacterial species.
Overall, a uniform protocol of culturing mycobacterial biofilms will help the investigators interested in studying the basic resilient characteristics of mycobacteria. In addition, a clear and concise method of growing mycobacterial biofilms will also help the clinical and pharmaceutical investigators to test the efficacy of a potential drug.

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Mycobacterium tuberculosis forms drug tolerant biofilms when cultured in certain conditions. Here we describe methods for culturing M. tuberculosis biofilms and determining the frequency of drug tolerant persisters. These protocols will be useful for further studies into the mechanisms of drug tolerance in M. tuberculosis.

Wachstum von Mycobacterium tuberculosis Biofilme

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including ...

Demonstrating a Multi-drug Resistant Mycobacterium tuberculosis Amplification Microarray

Simplifying microarray workflow is a necessary first step for creating MDR-TB microarray-based diagnostics that can be routinely used in lower-resource environments. An amplification microarray combines asymmetric PCR amplification, target size selection, target labeling, and microarray hybridization within a single solution and into a single microfluidic chamber. A batch processing method is demonstrated with a 9-plex asymmetric master mix and low-density gel element microarray for genotyping multi-drug resistant Mycobacterium tuberculosis (MDR-TB). The protocol described here can be completed in 6 hr and provide correct genotyping with at least 1,000 cell equivalents of genomic DNA. Incorporating on-chip wash steps is feasible, which will result in an entirely closed amplicon method and system. The extent of multiplexing with an amplification microarray is ultimately constrained by the number of primer pairs that can be combined into a single master mix and still achieve desired sensitivity and specificity performance metrics, rather than the number of probes that are immobilized on the array. Likewise, the total analysis time can be shortened or lengthened depending on the specific intended use, research question, and desired limits of detection. Nevertheless, the general approach significantly streamlines microarray workflow for the end user by reducing the number of manually intensive and time-consuming processing steps, and provides a simplified biochemical and microfluidic path for translating microarray-based diagnostics into routine clinical practice.

Demonstrating a Multi-drug Resistant Mycobacterium tuberculosis Amplification Microarray

An amplification microarray combines asymmetric PCR amplification and microarray hybridization into a single chamber, which significantly streamlines microarray workflow for the end user. Simplifying microarray workflow is a necessary first step for creating microarray-based diagnostics that can be routinely used in lower-resource environments.

Der Nachweis eines multiresistenten<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Verstärkung Microarray

Simplifying microarray workflow is a necessary first step for creating MDR-TB microarray-based diagnostics that can be routinely used in lower-resource ...

Preparation of a Blood Culture Pellet for Rapid Bacterial Identification and Antibiotic Susceptibility Testing

Bloodstream infections and sepsis are a major cause of morbidity and mortality. The successful outcome of patients suffering from bacteremia depends on a rapid identification of the infectious agent to guide optimal antibiotic treatment. The analysis of Gram stains from positive blood culture can be rapidly conducted and already significantly impact the antibiotic regimen. However, the accurate identification of the infectious agent is still required to establish the optimal targeted treatment. We present here a simple and fast bacterial pellet preparation from a positive blood culture that can be used as a sample for several essential downstream applications such as identification by MALDI-TOF MS, antibiotic susceptibility testing (AST) by disc diffusion assay or automated AST systems and by automated PCR-based diagnostic testing. The performance of these different identification and AST systems applied directly on the blood culture bacterial pellets is very similar to the performance normally obtained from isolated colonies grown on agar plates. Compared to conventional approaches, the rapid acquisition of a bacterial pellet significantly reduces the time to report both identification and AST. Thus, following blood culture positivity, identification by MALDI-TOF can be reported within less than 1 hr whereas results of AST by automated AST systems or disc diffusion assays within 8 to 18 hr, respectively. Similarly, the results of a rapid PCR-based assay can be communicated to the clinicians less than 2 hr following the report of a bacteremia. Together, these results demonstrate that the rapid preparation of a blood culture bacterial pellet has a significant impact on the identification and AST turnaround time and thus on the successful outcome of patients suffering from bloodstream infections.

A rapid bacterial pellet preparation from a positive blood culture can be used as a sample for applications such as identification by MALDI-TOF, Gram staining, antibiotic susceptibility testing and PCR-based test. The results can be rapidly communicated to clinicians to improve the outcome of patients suffering from bloodstream infections.

Vorbereitung einer Blutkultur Pellet Rapid Identifizierung von Bakterien und Antibiotika Empfindlichkeitsprüfung

Bloodstream infections and sepsis are a major cause of morbidity and mortality. The successful outcome of patients suffering from bacteremia depends on a ...

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, which are expressed as minimum inhibitory concentrations (MICs) are used in research for antimicrobial development and monitoring of resistance development and in the clinical setting for antimicrobial therapy guidance. Dalbavancin is a semi-synthetic lipoglycopeptide antimicrobial agent that was approved in May 2014 by the Food and Drug Administration (FDA) for the treatment of acute bacterial skin and skin structure infections caused by Gram-positive organisms. The advantage of dalbavancin over current anti-staphylococcal therapies is its long half-life, which allows for once-weekly dosing. Dalbavancin has activity against Staphylococcus aureus (including both methicillin-susceptible S. aureus [MSSA] and methicillin-resistant S. aureus [MRSA]), coagulase-negative staphylococci, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus anginosus group, &#946;-hemolytic streptococci and vancomycin susceptible enterococci. Similar to other recent lipoglycopeptide agents, optimization of CLSI and ISO broth susceptibility test methods includes the use of dimethyl sulfoxide (DMSO) as a solvent when preparing stock solutions and polysorbate 80 (P80) to alleviate adherence of the agent to plastic. Prior to the clinical studies and during the initial development of dalbavancin, susceptibility studies were not performed with the use of P-80 and MIC results tended to be 2-4 fold higher and similarly higher MIC results were obtained with the agar dilution susceptibility method. Dalbavancin was first included in CLSI broth microdilution methodology tables in 2005 and amended in 2006 to clarify use of DMSO and P-80. The broth microdilution (BMD) procedure shown here is specific to dalbavancin and is in accordance with the CLSI and ISO methods, with step-by-step detail and focus on the critical steps added for clarity.

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

Here, we present a protocol for determination of dalbavancin susceptibility of clinically relevant Gram-positive bacteria using a broth microdilution reference methodology.

Eine Referenz Broth Mikrodilutionsverfahren für Dalbavancin<em&gt; In-vitro-</em&gt; Empfindlichkeitsprüfung von Bakterien, die wachsen aerob

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, ...

A 3D Human Lung Tissue Model for Functional Studies on Mycobacterium tuberculosis Infection

Tuberculosis (TB) still holds a major threat to the health of people worldwide, and there is a need for cost-efficient but reliable models to help us understand the disease mechanisms and advance the discoveries of new treatment options. In vitro cell cultures of monolayers or co-cultures lack the three-dimensional (3D) environment and tissue responses. Herein, we describe an innovative in vitro model of a human lung tissue, which holds promise to be an effective tool for studying the complex events that occur during infection with Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis). The 3D tissue model consists of tissue-specific epithelial cells and fibroblasts, which are cultured in a matrix of collagen on top of a porous membrane. Upon air exposure, the epithelial cells stratify and secrete mucus at the apical side. By introducing human primary macrophages infected with M. tuberculosis to the tissue model, we have shown that immune cells migrate into the infected-tissue and form early stages of TB granuloma. These structures recapitulate the distinct feature of human TB, the granuloma, which is fundamentally different or not commonly observed in widely used experimental animal models. This organotypic culture method enables the 3D visualization and robust quantitative analysis that provides pivotal information on spatial and temporal features of host cell-pathogen interactions. Taken together, the lung tissue model provides a physiologically relevant tissue micro-environment for studies on TB. Thus, the lung tissue model has potential implications for both basic mechanistic and applied studies. Importantly, the model allows addition or manipulation of individual cell types, which thereby widens its use for modelling a variety of infectious diseases that affect the lungs.

A 3D Human Lung Tissue Model for Functional Studies on Mycobacterium tuberculosis Infection

Human tuberculosis infection is a complex process, which is difficult to model in vitro. Here we describe a novel 3D human lung tissue model that recapitulates the dynamics that occur during infection, including the migration of immune cells and early granuloma formation in a physiological environment.

Ein 3D-humanem Lungengewebe Modell für funktionelle Studien auf<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Infektions

Tuberculosis (TB) still holds a major threat to the health of people worldwide, and there is a need for cost-efficient but reliable models to help us ...

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of tuberculosis (TB), is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. With the increased spread of multi drug-resistant TB (MDR-TB), there is a real urgency to develop new therapeutic strategies against M. tuberculosis infections. Traditionally, compounds are evaluated based on their antibacterial activity under in vitro growth conditions in broth; however, results are often misleading for intracellular pathogens like M. tuberculosis since in-broth phenotypic screening conditions are significantly different from the actual disease conditions within the human body. Screening for inhibitors that work inside macrophages has been traditionally difficult due to the complexity, variability in infection, and slow replication rate of M. tuberculosis. In this study, we report a new approach to rapidly assess the effectiveness of compounds on the viability of M. tuberculosis in a macrophage infection model. Using a combination of a cytotoxicity assay and an in-broth M. tuberculosis viability assay, we were able to create a screening system that generates a comprehensive analysis of compounds of interest. This system is capable of producing quantitative data at a low cost that is within reach of most labs and yet is highly scalable to fit large industrial settings.

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

We have developed a modular high-throughput screening system for discovering novel compounds against Mycobacterium tuberculosis, targeting intracellular and in-broth growing bacteria as well as cytotoxicity against the mammalian host cell.

System zur Wirksamkeit und Zytotoxizität Screening von Inhibitoren Targeting intrazellulärer<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em

Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of tuberculosis (TB), is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. With the increased spread ...

Analysis of 18FDG PET/CT Imaging as a Tool for Studying Mycobacterium tuberculosis Infection and Treatment in Non-human Primates

Mycobacterium tuberculosis remains the number one infectious agent in the world today. With the emergence of antibiotic resistant strains, new clinically relevant methods are needed that evaluate the disease process and screen for potential antibiotic and vaccine treatments. Positron Emission Tomography/Computed Tomography (PET/CT) has been established as a valuable tool for studying a number of afflictions such as cancer, Alzheimer&#39;s disease, and inflammation/infection. Outlined here are a number of strategies that have been employed to evaluate PET/CT images in cynomolgus macaques that are infected intrabronchially with low doses of M. tuberculosis. Through evaluation of lesion size on CT and uptake of 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) in lesions and lymph nodes in PET images, these described methods show that PET/CT imaging can predict future development of active versus latent disease and the propensity for reactivation from a latent state of infection. Additionally, by analyzing the overall level of lung inflammation, these methods determine antibiotic efficacy of drugs against M. tuberculosis in the most clinically relevant existing animal model. These image analysis methods are some of the most powerful tools in the arsenal against this disease as not only can they evaluate a number of characteristics of infection and drug treatment, but they are also directly translatable to a clinical setting for use in human studies.

Analysis of 18FDG PET/CT Imaging as a Tool for Studying Mycobacterium tuberculosis Infection and Treatment in Non-human Primates

Here, we present a protocol to describe the analysis of 18F-FDG PET/CT imaging in non-human primates that have been infected with M. tuberculosis to study disease process, drug treatment, and disease reactivation.

Analyse der 18FDG PET/CT Imaging als Werkzeug für Studium Mycobacterium-Tuberkulose -Infektion und Behandlung bei nicht-menschlichen Primaten

Mycobacterium tuberculosis remains the number one infectious agent in the world today. With the emergence of antibiotic resistant strains, new clinically ...

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by fluorescence or bioluminescence. We utilize BlaC, an enzyme expressed constitutively by all M. tuberculosis strains. REF allows rapid quantification of bacteria in lungs of infected mice. The same group of mice can be imaged at many time points, greatly reducing costs, enumerating bacteria more quickly, allowing novel observations in host-pathogen interactions, and increasing statistical power, since more animals per group are readily maintained. REF is extremely sensitive due to the catalytic nature of the BlaC enzymatic reporter and specific due to the custom flourescence resonance energy transfer (FRET) or fluorogenic substrates used. REF does not require recombinant strains, ensuring normal host-pathogen interactions. We describe the imaging of M. tuberculosis infection using a FRET substrate with maximal emission at 800 nm. The wavelength of the substrate allows sensitive deep tissue imaging in mammals. We will outline aerosol infection of mice with M. tuberculosis, anesthesia of mice, administration of the REF substrate, and optical imaging. This method has been successfully applied to evaluating host-pathogen interactions and efficacy of antibiotics targeting M. tuberculosis.

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

We describe the optical imaging of mice infected with Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) using reporter enzyme fluorescence (REF). This protocol facilitates the sensitive and specific detection of M. tuberculosis in pre-clinical animal models for pathogenesis, therapeutics and vaccine research.

Mycobacterium Tuberculosis in Mäusen mit Reporter Enzym Fluoreszenz Imaging

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by ...