Finanzierung für dieses Projekt wurde von ARRA Mittel aus NINDS Gewährung NS045647 vorgesehen.

Ein. Materialien für Training und Testing erforderlich <ol><li> Prüfkammer. Jeder Container groß genug, um ein Tier und zwei Duft cups unterzubringen. Unser Labor genutzt modifiziert operante Kammern (Med Associates Inc.) mit Boden Bars entfernt, um Platz für Duft Tassen (Abbildung 1) zu machen. </li><li> Scent Tassen und Becherhalter. Cups ausreichend breit und tief zu graben und einen Mechanismus / Halter, um sie (Abbildung 2) stabilisieren können. </li><li> Scented Sand. Unsere Tests verwendete Protokoll Düfte zuvor gegründet, um nicht zeigen Antwort Bias bei Ratten (Kakao, Basilikum, Kümmel, Kaffee) 4. Jeder Duft Sand wurde bei einem Verhältnis von 1 g Duftstoff 110 g unscented, sauber Spielplatz &quot;sand box&quot; Sand vermischt und in luftdicht verschlossenen Behältnissen für bis zu 6 Monate gelagert werden. </li><li> Reinforcer. Wir verwendeten Obst-Schleife Cerealienstücke als Verstärker. Wir empfehlen auszusetzen Tiere zum Verstärker (via Platzierung in ihre Käfige) 3 bis 5 Tage vor training um neophobic Reaktionen zu überwinden. </li><li> Stoppuhr oder Timer. </li></ol> 2. Umgang mit Tieren vor dem Training <ol><li> Handhabung. Da die Tiere in platziert werden und aus den Kammern wiederholt über Schulung / Prüfung, empfehlen wir den Umgang mit Tieren drei bis fünf Tage vor dem Training, um sie mit Menschen in Kontakt vertraut zu machen. </li><li> Motivierend. Um Tiere zu motivieren, an dieser Aufgabe durchzuführen, ist ein gewisses Maß an Nahrungsentzug notwendig. Lebensmittel Einschränkung sollte initiiert mindestens drei Tage vor Training und Tests und Tiere können bei 90% der free-Fütterung Gewicht gehalten werden. Typischerweise Mengen von 15-20 g chow pro Tag sind ausreichend, aber Tiergewichte sollte jeden zweiten Tag, während Lebensmitteln einzuschränken. </li></ol> 3. Dig Ausbildung Ausbildung ein Tier im Sand graben können in durchschnittlich acht Sitzungen über einen Zeitraum von vier Tagen Zeit erreicht werden. Während dig training, sollte die Kammer bis indem zwei Duft Becher in den Mechanismus / Halter und platzieren Sie den Duft Tasse Setup in der Kammer eingestellt werden. Das allgemeine Verfahren wird unten mit dem Ziel der Formung des Tieres, von dem Konsum der Ansporner vollständig Graben im Sand um es abzurufen detailliert. <ol><li> Session 1 - Kammer Gewöhnung und Magazin Training. Vollständig ausfüllen Duft Tassen mit dem Verstärker (kein Sand). Platzieren des Tieres in die Vorrichtung 30 min erlaubt, das Tier frei zu verbrauchen den Verstärker. </li><li> Session 2 - sand Gewöhnung. Vollständig ausfüllen Duft Tassen mit dem Verstärker und gießen Sie eine kleine Menge von unscented Sand in jede Tasse, Füllung nicht mehr als die Hälfte der Tasse. Platzieren des Tieres in die Vorrichtung 30 min erlaubt, das Tier frei zu verbrauchen den Verstärker. </li><li> Session 3 - Oberfläche graben. Füllen Sie die Duft Tassen mit einem noch Mischung aus Verstärker und unscented sand, so dass mehrere Verstärker ausgesetzt. Platzieren das Tier in der Vorrichtung zum30 min erlaubt, das Tier frei verbrauchen die Verstärker. In dem Prozess des Verzehrs der freiliegenden Verstärkungsmittel, sollte das Tier zusätzliche Aussteifungen unterhalb der Oberfläche des Sandes aufzudecken. Das Tier sollte von der Verwendung ihrer Mund über seine Vorderpfoten jeden Verstärker aus dem Sand zu entfernen verschieben. </li><li> Session 4 - graben. Füllt die Duft Tassen mit einem Gemisch aus 1 Teil bis 3 Teilen Ansporner unscented Sand, 1-2 Verlassen Verstärker ausgesetzt. Platzieren des Tieres in die Kammer für 30 min erlaubt, das Tier frei zu verbrauchen den Verstärker. Das Tier sollte beginnen, mit seinen Vorderpfoten zu graben, um zusätzliche Verstärker aufzudecken und entfernen Sie sie aus dem Sand. Tiere, die nicht anfangen, die Verstärker nach 10 min Zeit aufzudecken sollten unterstützt werden (sollte der Forscher ein Verstärker zu einem Zeitpunkt, zu entdecken, bis das Tier lernt) werden. </li><li> Session 5 - full Graben. Füllen Sie die Duft Becher mit einer Mischung aus 1 Teil Verstärker auf 3 Teile unscented Sand, so dass keine Verstärker ausgesetzt. Place das Tier in die Apparatur für 30 min erlaubt, das Tier frei zu verbrauchen den Verstärker. Die Tiere sollten unterstützt je nach Bedarf. Einige Tiere müssen mehrere Instanzen dieser Sitzung, um zu zeigen, graben Verhalten. </li><li> Session 6 - trial Struktur Gewöhnung. Platz drei Verstärker in der tiefen, mittleren und flachen Positionen in den Sand in jedem Duft Tasse. Legen Sie das Tier in der Kammer, bis alle drei aus jeder Tasse abgerufen werden, die Unterstützung nach Bedarf. Sobald alle abgerufen wurden, legen Sie das Tier in einer Haltevorrichtung für 15-30 sec und setzen Sie die Duft Becher wie in diesem Schritt beschrieben. Dann legen Sie das Tier in die Kammer zurück und wiederholen Sie den Vorgang, bis das Tier insgesamt vier Studien abgeschlossen hat. Das Tier sollte sich gewöhnt, in der Haltevorrichtung gelegt und graben beginnen sofort, wenn in die Kammer gelegt. Das Tier sollte auch zeigen, voller Graben Verhalten und Abrufen der Verstärker an der Unterseite des Duftes Tasse. </li><li>Session 7 - single Verstärker. Legen Sie eine einzelne Verstärker bei der Hälfte der Tiefe des Sandes in jede Tasse. Legen Sie das Tier in der Kammer und lassen Sie es beide Verstärker abzurufen, und dann legen Sie sie in die Haltevorrichtung für 30 sec. Wiederholen Sie diesen Vorgang für insgesamt vier Studien. Das Tier sollte anfangen, schneller zu graben und erfordern nur minimale Unterstützung der Forscher. </li><li> Session 8 - Mock Diskriminierungstests. Füllen Becher als in der Sitzung 7 beschrieben. Geben Sie das Tier 30 Sek., um beide Verstärker abzurufen. Legen Sie das Tier in der Haltevorrichtung, wenn beide abgerufen wurden oder 30 sec abgelaufen ist. Wiederholen Sie dies für die Anzahl der Studien, die in der Testphase verwendet werden. Die Tiere sollten lernen, schnell zu graben, wenn in die Kammer zurück gelegt. </li><li> Weitere Sitzungen. Je nach anfänglichen Diskriminierungstests kann der Experimentator wollen zusätzliche Sitzungen durchzuführen, um das Tier mit den gegebenen Duft vertraut. Rats wird dazu neigen, zunächst weisen Neophobie und bevorzugen dievertrauten Düfte zuvor mit Verstärkung 10 zugeordnet. </li></ol> 4. Diskriminierung Testing <ol><li> Der Forscher sollten Sie einen Duft Paarung, darunter die Duft wird mit dem Verstärker geködert werden (korrekte Diskriminierung) und welche nicht. Weitere Entscheidungen, wie die Anzahl der Diskriminierungen und Umkehrungen, maximale Anzahl von Tagen und Tests, und ob vor der Verletzung Pretest wird sich weitgehend auf experimentelle Frage (siehe zusätzliche Hinweise unten) basieren. </li><li> Ratten können getestet werden und Daten von Hand durch den Forscher aufgezeichnet. Der Forscher sollte für jeden Versuch aufzuzeichnen: richtig oder falsch Wahl, die Latenzzeit bis zum Graben zu initiieren, und Studien, in denen eine Ratte Zeiten auf. <ol class="lalpha"><li> Die Zahl der Studien verabreicht sollte im Ermessen des Forschers sein (siehe zusätzliche Hinweise unten). </li><li> Die Länge des Verfahrens sollte im Ermessen des Forschers sein (siehe zusätzliche Hinweise unten). </li><li> Die researcher sollte zufälliger Prozess-Struktur (links-rechts Lage der Duft Tassen), mit dem Vorbehalt, dass nicht mehr als drei Versuche in einer Reihe auf einer bestimmten Seite sind. Dies wird dazu beitragen Seite Bias. </li></ol></li><li> Um jede Studie zu initiieren, legen Sie das Tier in die Kammer mit Blick auf die Rückseite, gleich weit entfernt von jeder Tasse. Platzieren eines Tieres näher an eine Tasse erhöhen die Chance der Entwicklung einer Vorspannung. </li><li> Wenn das Tier richtig diskriminiert, lassen Sie es abrufen und verbrauchen die Verstärker und entfernen Sie sie dann an der Haltevorrichtung für 30 sec. Wenn es mal aus oder wählt falsch, entfernen Sie es sofort, bevor es &quot;korrigiert&quot; selbst, und legen Sie sie in die Haltevorrichtung für 30 sec. </li><li> Wiederholen Sie diesen Vorgang für die gewählte Anzahl von Versuchen. </li><li> Sobald ein Tier erreicht eine vorgegebene Kriterium (dh&gt; 80% Genauigkeit pro Tag an drei aufeinanderfolgenden Tagen), kann das Tier zu bewegen auf die nächste Diskriminierung / Umkehr und wiederholen Sie den Vorgang. </li></ol&gt; 5. Zusätzliche Hinweise <ol><li> Testen in unserem Labor festgestellt, dass Ausbildung und Prüfung der Arbeit am besten mit einer Hälfte einer Frucht loop Cerealienprodukt bis zur Sättigung zu vermeiden. </li><li> Während des Trainings können manche Tiere brauchen mehr Hilfe als andere. Wir empfehlen zu tun, was notwendig ist, um zu graben Verhalten. Allerdings, sobald der Test beginnt, haben wir nie versuchen, zu intervenieren und zu verbessern einer Ratte Graben Verhalten. </li><li> Variieren der Gesamtzahl der Versuche kann ausreichen für verschiedenen Labors. Testing in unserem Labor haben 6, 8 verwendet, und 12 Versuche pro Sitzung 1 Sitzung pro Tag und haben eine Vorliebe für die 8 Versuchsaufbau gefunden. </li><li> Variation der Länge der Studie kann in einigen Versuchsaufbauten erforderlich (z. B. Tiere unter einem Stress-Paradigma kann erhöht Studie Zeiten oder insgesamt weniger Studien müssen). </li><li> Eine voreingestellte Kriterium zu verwenden, um zu bestimmen, wenn ein Tier eine Diskriminierung beherrscht werden. Testen in unserem Labor haben eine Accurac erforderlichy größer als 80% (5/6 Versuche, 7/8 Studien oder 10/12 Studien) pro Tag an 3 aufeinanderfolgenden Tagen. Jedoch könnte eine höhere Kriterium (85%) eingesetzt werden. </li><li> Voreingestellten Schwellenwerte / Maxima sollte für die maximale Anzahl von Tagen auf einem gegebenen Duft verbracht werden. Dies wird im Wesentlichen durch Fragestellung diktiert werden. Zum Beispiel sind unsere Laborstudien TBI und ab durch die progressive Natur der TBI, Ratten, die nicht Kriteriums getroffen haben auf einem Roman von Diskriminierung / Auflösung nach 12 Testtagen verschoben. </li><li> Die Entscheidung, ob Pretest oder nur Nachtest ist eine Frage, die weitgehend durch experimentelle Richtung bestimmt. Vortests erlaubt es, einen Speicher Beurteilung auf dem Tier nach der Verletzung, die relevant sein können abhängig von der Art der Schädigung führen. Allerdings ermöglicht Beitrag Tests ein, um Unterschiede in Erfassungsrate auf die Diskriminierung zwischen den Gruppen zu untersuchen. Unser Labor hat und wird auch weiterhin beide verwenden. </li></ol>

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	<li>Birrell, J. M., Brown, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+frontal+cortex+mediates+perceptual+attentional+set+shifting+in+the+rat.">Medial frontal cortex mediates perceptual attentional set shifting in the rat.</a> J. Neurosci. 20, 4320-4324 (2000).</li><li>Bunsey, M., Eichenbaum, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conservation+of+hippocampal+memory+function+in+rats+and+humans.">Conservation of hippocampal memory function in rats and humans.</a> Nature. 379, 255-257 (1996).</li><li>Eichenbaum, H., Fagan, A., Cohen, N. 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Neurosci. 23, 6475-6479 (2003).</li></ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

In diesem Video haben wir gezeigt, wie die Dig Aufgabe durchgeführt wird, kann mit relativ preiswerten Materialien und mit einiger Erfahrung werden, kann die Prüfung ziemlich schnell durchgeführt werden (~ 10 min / Tier). Dies ermöglicht die Aufgabe problemlos in bestehende Test-Batterien für TBI, Schlaganfall und anderen Hirnschädigungen integriert werden. The Dig Aufgabe ist auch robust, dass es verschiedene Aspekte der Kognition, darunter Auswertungen von früheren Lernens, Auflösungen und neue Akquisitionen (zB Shifter) zu beurteilen. Am wichtigsten ist, hat die Dig Aufgabe erwiesen sich als wirksam bei der Beurteilung frontal Funktion nach Hirnschäden. Darüber hinaus hat eine ähnliche dig Paradigma verwendet worden, um Wertübertragung in Ratten nach hippocampalen Schaden 4 studieren, und somit könnte leicht untersucht nach TBI werden. Die Hauptvorteile von Aufgaben wie diesem sind die Fähigkeit, andere Formen der Erkenntnis als das, was üblicherweise in den meisten Hirnverletzung Bolzen getestet beurteilenies. Zur Zeit besteht ein Mangel an einfachen, schnell erworbenen Aufgaben für die Beurteilung der frontal-vermittelte Erkenntnis nach Hirnschäden. Im Bereich der experimentellen TBI, gibt es eine starke Abhängigkeit von Labyrinthen als alleinige Beurteilung des Erkennens 9. Diskriminierung und Wahlverhalten sind wichtige Aspekte der frontal-vermittelte Erkenntnis, die ausgewertet folgenden Hirnschäden werden müssen. Diese haben unter vielen verschiedenen Paradigmen (verzögert Matching-to-sample, differentielle Verstärkung der niedrigen reagiert, Aufwand-basierten Entscheidungsfindung, usw.) auf dem Gebiet der experimentellen Analyse des Verhaltens untersucht, sind aber in Studien von Hirnverletzungen fehlt 14-16. Die Entwicklung neuartiger Therapeutika zur Behandlung von Hirnschäden erfordert Validierung über mehrere Modalitäten der sensorischen, motorischen und kognitiven Funktionen. Aufgaben wie könnte dies unerlässlich geworden voll Beurteilung der kognitiven Funktion unter therapeutischer Behandlung. Während die Dig Aufgabe rezeigt einen Schritt in die richtige Richtung zur Beurteilung Gehirnfunktion nach Verletzung, gibt es noch Einschränkungen darauf. Es ist beabsichtigt, dass sie einfach zu konstruieren, zu verwalten und zu analysieren, aber dies bedeutet, dass es obere Grenzen gesetzt, was es messen kann. Derzeit sind zwei Möglichkeiten alles, was unter den gegebenen Paradigmas beurteilt werden kann. Darüber hinaus ist die Dig Aufgabe nicht empfindlich genug, um andere Aspekte der frontalen Dysfunktion, wie Impulsivität, dass mit einem Tier Entscheidungsfähigkeit beeinträchtigen können behandeln. Während die Dig Aufgabe gezeigt worden ist, erfolgreich zu sein für uns bei der Beurteilung Hirnschäden bei jungen Tieren, es gibt noch einige Dinge, die mit der Aufgabe getan werden, um weiter zu verfeinern und zu verbessern kann. Dazu gehören die Beurteilung speziellen Patientengruppen (Alter, Geschlecht, Stamm) und vergleicht sie direkt an die operante Paradigmen aus angepasst ist, Durchführen einer direkten Vergleich dieser Aufgabe mit anderen Aufgaben, die frontal Dysfunktion beurteilen nach der Verletzung, und die Erforschung additional Wege zur Analyse und zum Vergleich der Daten von der Aufgabe generiert. Diese Aufgabe wird entworfen, um einige der Probleme in unserem Bereich durch Testen frontal Funktion in mehrfacher Hinsicht nach Schädigungen des Gehirns anzusprechen. Allerdings kann eine Aufgabe nicht messen alle kognitiven Prozesse, die von einer Hirnverletzung betroffen sind. So befürworten wir, dass die Menschen zu entwickeln und auf Aufgaben wie die in diesem Protokoll beschriebenen besser einschätzen können Funktionsbeeinträchtigungen nach Hirnverletzungen weiter verbessern. Dabei können wir die Wirksamkeit von Medikamenten und Therapie-Entwicklung für Hirn-Verletzungen durch die Beurteilung über mehrere Maßnahmen zu erhöhen.

Brain damage aus Schädel-Hirn-Trauma (SHT) und Schlaganfall ist eine der führenden Ursachen für Tod und Behinderung in den Vereinigten Staaten. Zusammen sind diese Erkrankungen führen zu einem insgesamt fast 2,5 Millionen Fälle mit fast 500.000 mit Todesfolge oder Beeinträchtigung 6-7. Trotz dieser hohen Tribut auf die Gesellschaft haben nur sehr wenige Therapien entwickelt worden, um entweder TBI oder Schlaganfall zu behandeln. Bis zu einem gewissen Grad kann der Mangel an verfügbaren Behandlungsoptionen zu einer unzureichenden Verhaltens Einschätzungen von neuartigen Medikamenten und Therapien 8 zugeschrieben werden. Insbesondere gibt es einen Mangel an Aufgaben genau und feinfühlig die Wirkungen der Behandlungen auf die verschiedenen kognitiven Defiziten im Anschluss Hirnverletzung in der präklinischen Literatur. Derzeit wird der Großteil der kognitiven Einschätzungen dar, die durchgeführt werden, evaluieren räumlichen Gedächtnisses mit einem Labyrinth Aufgabe wie der Morris Water Maze 9. Es gibt mehrere Gründe für diesen Mangel an Tests, einschließlich der Zeit es braucht, umvollständig zu charakterisieren und zu bewerten kognitive Defizite, die schwere Vertrauen auf teure Ausrüstung und Know-how, um operante Aufgaben zu nutzen, und die Geschwindigkeit, mit der diese Auswertungen durchgeführt werden können. Zu diesem Zweck haben wir eine grundlegende Duft Diskriminierung Aufgabe, die Dig Aufgabe angepasst, zur Erkenntnis folgenden Hirnverletzung zu beurteilen. The Dig Aufgabe ist entworfen, um eine billige, schnelle und effektive Werkzeug zur Beurteilung kognitiver Dysfunktion folgenden Hirnverletzung von einem TBI oder Schlaganfall. The Dig Aufgabe beruht auf den grundlegenden operante Prinzipien des Lernens und der Entscheidungsfindung. Da ist es nur ein zwei-entscheidung Paradigma, stellt diese Aufgabe eine der einfachsten Unterscheidungen, die gemacht werden können. In dem Protokoll unten die Details für den Aufbau der Aufgabe sowie die Trainings-Methodik beschrieben werden. Wir haben festgestellt, dass diese Aufgabe am stärksten ist bei der Beurteilung frontal vermittelten kognitiven Defizite gegenüber einseitigen parietalen Defiziten, jedoch hat es noch unter einem Modell getestet werdenHippocampus Schaden 5. Idealerweise würden diese Aufgabe zur Bewertung der Wirksamkeit einer Behandlung oder Therapie auf Rückgewinnung von frontalen Defizite nach einer Verletzung geeignet sein. Jedoch ist es möglich, daß mit Modifikationen dieser Aufgabe könnte auch verwendet werden, um komplexere Entscheidungs-Verhalten wie Impulsivität und generalisierte Matching erkunden.

<table border="1"><tr><td> Material Name </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> EQUIPMENT </td></tr><tr><td> Operante Kammer </td><td> Med Associates </td><td> ENV-008CT </td><td> Betrag: 1 Standard operante Kammer, keine externen Geräte. </td></tr><tr><td> Plexiglas </td><td> Lokale Hardware Store </td><td> N / A </td><td> Menge: 1 Blatt in die richtige Größe geschnitten, um in die Kammer passen. </td></tr><tr><td> PVC-Rohr End Caps </td><td> Lokale Hardware Store </td><td> N / A </td><td> Betrag: 2 / Duft Tasse Setup. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> REAGENZIEN</td></tr><tr><td> Sand </td><td> Lokale Hardware Store </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Verschiedene Gewürze </td><td> Lokale Lebensmittelgeschäft </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Reinforcer </td><td> Lokale Lebensmittelgeschäft </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> * Ausstattung ist für den Bau pro Kammer aufgeführt. </td></tr></table>

the dig task: a simple scent discrimination reveals deficits following frontal brain damage

Kognitive Beeinträchtigungen ist die häufigste Ursache für Behinderungen bei Menschen nach Schädigungen des Gehirns, doch die Verhaltensweisen Aufgaben zur Kognition in Tiermodellen der Hirnschädigung zu beurteilen fehlt. In Anlehnung an die operante Literatur unserem Labor verwendet eine grundlegende Duft Diskriminierung Paradigma 1-4 um Defizite in der frontal verletzt Ratten zu beurteilen. Bisher haben wir kurz die Dig Aufgabe beschrieben und gezeigt, dass Ratten, die mit frontalen Hirnschädigungen schwere Defizite in mehreren Tests innerhalb der Task 5 zeigen. Hier präsentieren wir Ihnen eine detaillierte Protokoll für diese Aufgabe. Ratten werden in eine Kammer eingebracht und zwischen zwei duftenden Sanden, von denen einer einen Verstärker enthält diskriminieren. Der Versuch endet nach der Ratte entweder richtig diskriminiert (definiert als das Graben in der richtigen Duft Sand), falsch diskriminiert oder 30 sec abgelaufen ist. Ratten, die richtig diskriminieren dürfen sich zu erholen und verbrauchen die Verstärker. Rats, dass discriminate fälschlicherweise werden sofort aus der Kammer entfernt. Dies kann durch eine Vielzahl von Auflösungen und neue Düfte fortzusetzen. Die primäre Analyse ist die Genauigkeit für jeden Duft-Paarung (kumulative Anteil richtige für jeden Duft). Die allgemeinen Erkenntnisse aus dem Dig Aufgabe legen nahe, dass es eine einfache experimentelle Präparat, Defizite bei Ratten mit bilateralen frontalen kortikale Schädigung im Vergleich zu Ratten mit einseitigen parietalen eintreten kann beurteilen. The Dig Aufgabe kann auch einfach in eine bestehende kognitive Testbatterie integriert werden. Die Verwendung von mehr Aufgaben wie diesem kann eine genauere Prüfung von frontalen Funktion folgenden Verletzungen, die therapeutischen Möglichkeiten bei der Behandlung führen können führen. Alle tierischen Einsatz wurde in Übereinstimmung mit den Protokollen von der Institutional Animal Care und Formate gebilligten durchgeführt.

Es gibt zwei wesentliche Variablen, die im Dig Aufgabe aufgezeichnet werden kann: Richtig / Falsch und Latenz. Allerdings können nicht-Antworten ebenfalls aufgezeichnet und analysiert werden, da sie möglicherweise wichtig, wenn man Motivation. Diese können verwendet werden, um Maßnahmen für die Analyse, wie Genauigkeit (# richtig / insgesamt Studien), als Reaktion Bias 11 und Latenz erzeugen. Diese Maßnahmen können verwendet werden, um verschiedene Arten von Lernen, je nach Ausführung des Experiments (siehe zusätzliche Anmerkungen oben) zu beurteilen. Pretesting von Tieren ermöglicht ein Forscher, um Speicher für einen gelernten Diskriminierung zu bewerten. Auflösungen von gelehrten Diskriminierungen ermöglichen ein Forscher, um zu sehen, wie gut ein Tier auf eine sich verändernde Kontingenz anzupassen. Lernen von neuen Diskriminierungen ermöglicht es den Forschern zu vergleichen Lernen über verschiedene Duft-Paarungen sowie die Auswertung Kapazitäten für neue Lernen. Je nach Design der Studie (siehe zusätzliche Anmerkungen oben), können diese Maßnahmen werdenanalysiert in einem wiederholten Messungen Design oder kann in einer einzigen Variablen zusammengeklappt werden. Zuvor brach wir genau in eine Maßnahme der kumulative Anteil richtige, um jeden Duft Diskriminierung separat 5 analysieren. Diese durch Summieren der Anzahl der richtigen Unterscheidungen und Dividieren durch die Anzahl der Versuche für jede Diskriminierung aufgetreten. Eine Reihe von Einweg-between-subjects Analyse der Varianzen (ANOVA), dann wurden verwendet, um Unterschiede zwischen den Gruppen für jeden Post-Verletzungen Duft Diskriminierung zu untersuchen. Jedoch kann mehr Macht für die Analyse durch den Einsatz fortschrittlicher statistischer Techniken wie gemischte Effekte Modellierung erzielt werden. Eine andere Alternative ist, um das Signal-Detection-Theorie für die Datenanalyse nutzen. Dies ist ein beliebter Ansatz in der menschlichen Entscheidungsfindung Literatur und erlaubt dem Forscher, die meisten Daten aus einem bestimmten Thema in einer einzigen Grafik zu untersuchen und schnell die Genauigkeit, Bias, und Defizite 12. Wahl des analytischen Ansatz la werdenrgely durch experimentelle Frage getrieben, ob man über Arten des Lernens vergleichen will, bewerten eine einzige Art des Lernens oder wendet eine Entscheidungsfindung Zugang zu den Daten. Nach bilateralen frontalen Hirn-Trauma, hat unser Labor herausgefunden, dass Ratten großen Defiziten leiden unter praktisch allen Arten des Lernens bei dieser Aufgabe. Frontal verletzte Tiere zeigten ein Defizit im Speicher für eine zuvor gelernten Diskriminierung sowie Schwierigkeiten beim Lernen die Umkehrung dieser Duft Paarung (Abbildung 3). Frontal Tieren hatte auch Schwierigkeiten Erlernen neuer Diskriminierungen (Abbildung 3). In Übereinstimmung mit früheren Untersuchungen 13, gab es auch eine große Zunahme der Variabilität in den frontal verletzte Tiere (Abbildung 3). Im Gegensatz dazu haben einseitige parietalen Verletzungen in unserem Labor keine Defizite in allen Unterscheidungen in dieser Aufgabe dargestellt. Einseitige Ratten zeigten keine Defizite in mirmory für eine zuvor gelernt Diskriminierung und erwarb auch die Umkehrung der Diskriminierung sehr schnell (Abbildung 4). Sie lernten neue Duft-Paarungen sehr schnell sowie (Abbildung 4). Darüber hinaus war die Variabilität innerhalb der einseitig-verletzt Fraktion sehr niedrig, wobei die meisten Ratten Durchführen optimal auf die Aufgabe. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/50033/50033fig1.jpg" /> Abbildung 1. Tests in unserem Labor wurde in einer Reihe von Standard-operante Kammern (Med Associates Inc.), die für die Verwendung in dieser Aufgabe, indem vier aufeinanderfolgenden Boden-Bars zu öffnen Platz für zwei Duft Becher angepasst wurden durchgeführt. <img alt="Abbildung 2" src="/files/ftp_upload/50033/50033fig2.jpg" /> Abbildung 2. Testen in unserem Labor genutzt PVC-Rohr-Endkappen (6 cm hoch und 5,5 cm im Durchmesser) wie der Duft cHöhen und ein Stück Plexiglas (10 x 22 cm) mit zwei kreisförmigen Löcher gebohrt (5,5 cm Durchmesser) als Duft Becherhalter. <img alt="Abbildung 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50033/50033fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50033/50033fig3.jpg" /> Abbildung 3. Diese Grafik zeigt das typische Verhalten von Schein (blau) vs frontal verletzt (rot) Ratten über mehrere unterschiedliche Phasen des Testens in zwei verschiedenen Formaten. In Panel A, werden die Daten als Balkendiagramm mit weißen Punkten repräsentieren Datenpunkte für einzelne Ratten in jeder Gruppe vertreten. In Tafel B, werden die gleichen Daten in einem Liniendiagramm grafisch dargestellt. Es gab keinen Unterschied auf der vor der Verletzung Diskriminierung Akquisition. Jedoch nach Verletzungen und am selben Diskriminierung durchführen Sham-Ratten bei 93% kumulativer Prozent korrekt während verletzten Ratten bei 65% kumulativer Prozent durchzuführen richtig. Wenn eine Umkehr der Diskriminierung verabreicht wurde, injured Ratten unterschreiten Chance Leistung. Ebenso auf einer neuartigen Duft Diskriminierung frontal verletzt Ratten hatten Schwierigkeiten das Erlernen der neuartigen Paarung und blieb unterhalb Chance Leistung. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50033/50033fig3large.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier, um größere Zahl anzuzeigen</a> . <img alt="Abbildung 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50033/50033fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50033/50033fig4.jpg" /> Abbildung 4. Diese Grafik zeigt das typische Verhalten von Schein (blau) vs einseitige parietal-verletzten Ratten (grün) über mehrere unterschiedliche Phasen des Testens in zwei verschiedenen Formaten. In Panel A, werden die Daten als Balkendiagramm mit weißen Punkten repräsentieren Datenpunkte für einzelne Ratten in jeder Gruppe vertreten. In Tafel B, werden die gleichen Daten in einem Liniendiagramm grafisch dargestellt. Es besteht kein Unterschied zwischen den Gruppen auf eine der Diskriminierung. Einseitig-inverletzten Ratten durchgeführt oder, in einigen Fällen etwas höher als sham Ebenen nach einer Verletzung. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50033/50033fig4large.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Abbildung zu sehen</a> .

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The Dig Task: A Simple Scent Discrimination Reveals Deficits Following Frontal Brain Damage

In diesem Protokoll wird eine neuartige Anwendung der Duft der Diskriminierung beschrieben. The Dig Aufgabe ist eine relativ kostengünstige Aufgabe, die verwendet werden, um frontal vermittelte Erkenntnis nach Schädigungen des Gehirns beurteilt werden kann.

The Dig Aufgabe: A Simple Scent Discrimination enthüllt Defizite Nach Frontal Brain Damage

Cognitive impairment is the most frequent cause of disability in humans following brain damage, yet the behavioral tasks used to assess cognition in ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.5K Aufrufe.  Southern Illinois University at Carbondale. In diesem Protokoll wird eine neuartige Anwendung der Duft der Diskriminierung beschrieben. The Dig Aufgabe ist eine relativ kostengünstige Aufgabe, die verwendet werden, um frontal vermittelte Erkenntnis nach Schädigungen des Gehirns beurteilt werden kann.

Serie: The Dig Task: A Simple Scent Discrimination Reveals Deficits Following Frontal Brain Damage

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended upon this work to develop a simple quantitative measure of forepaw dexterity that is sensitive to lateralized impairments and age-dependent changes. Rodents learn skillful forepaw and digit movements to manage thin pasta pieces, which they eagerly consume. We have previously described methods for quantifying vermicelli handling in rats and showed that the measures are very sensitive to forelimb impairments resulting from unilateral ischemic lesions, middle cerebral artery occlusions and unilateral striatal dopamine depletion [Allred, R.P., Adkins, D.L., Woodlee, M.T., Husbands, L.C., Maldonado M.A., Kane, J.R., Schallert, T. &amp; Jones, T.A. The Vermicelli Handling Test: a simple quantitative measure of dexterous forepaw function in rats. J. Neurosci. Methods 170, 229-244 (2008)]. Here we present a more detailed protocol for this test in rats and compare it with a newly developed version for mice, the Capellini Handling Test. Rats and mice are videotaped while handling short lengths of uncooked vermicelli or capellini pasta, respectively, with a camera positioned to optimize the view of paw movements. Slow motion video playback allows for the identification of forepaw adjustments, defined as any distinct removal and replacement of the paw, or of any number of digits, on the pasta piece after eating commences. Forepaw adjustments per piece are averaged over trials per each testing session. Repeated testing permits sensitive quantitative analysis of changes in forepaw dexterity over time. Protocols for pre-testing habituation and handling practice, as well as procedures for characterizing atypical handling patterns, are described. Because rats and mice perform the pasta handling tests slightly differently, species-specific differences in administration and scoring of these tests are highlighted. All animal use was in accordance with protocols approved by the University of Texas at Austin Animal Care and Use Committee.

The Vermicelli and Capellini Handling Tests of forepaw dexterity take advantage of the natural inclination of rodents to manipulate food items using skillful forepaw and digit movements. Animals are videotaped while handling short strands of uncooked dry pasta. Slow motion video playback allows for the quantification of forepaw adjustments.

Die Vermicelli und Capellini Handhabung Tests: Einfache quantitative Maßnahmen der geschickten Vorderpfote Funktion bei Ratten und Mäusen

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Forschung

Neurowissenschaften

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after injury (Teng et al., 2006). It is recognized that transcriptional programs essential for neurite and axonal outgrowth are 
reactivated upon injury in the PNS (Makwana et al., 2005). However the tools available to analyze neuronal gene regulation in vivo are limited and 
often challenging.
The dorsal root ganglia (DRG) offer an excellent injury model system because both the CNS and PNS are innervated by a 
bifurcated axon originating from the same soma. The ganglia represent a discrete collection of cell bodies where all transcriptional events occur, 
and thus provide a clearly defined region of transcriptional activity that can be easily and reproducibly removed from the animal. Injury of nerve 
fibers in the PNS (e.g. sciatic nerve), where axonal regeneration does occur, should reveal a set of transcriptional programs that are distinct from 
those responding to a similar injury in the CNS, where regeneration does not take place (e.g. spinal cord). Sites for transcription factor binding, 
histone and DNA modification resulting from injury to either PNS or CNS can be characterized using chromatin immunoprecipitation (ChIP). 
Here, we describe a ChIP protocol using fixed mouse DRG tissue following axonal injury. This powerful combination provides a means for characterizing the pro-regeneration chromatin environment necessary for promoting axonal regeneration.

We present a method for chromatin immunoprecipitation from dorsal root ganglia tissue following axonal injury. The approach can be used to identify specific transcription factor binding sites and epigenetic modification of histone and DNA important for the regeneration of injured axons in both the peripheral and central nervous system.

Chromatin Immunopräzipitation aus Spinalganglien Tissue folgende axonale Schädigung

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

Morris Water Maze Test for Learning and Memory Deficits in Alzheimer&#39;s Disease Model Mice

The Morris Water Maze (MWM) was first established by neuroscientist Richard G. Morris in 1981 in order to test hippocampal-dependent learning, including acquisition of spatial memoryand long-term spatial memory 1. The MWM is a relatively simple procedure typically consisting of six day trials, the main advantage being the differentiation between the spatial (hidden-platform) and non-spatial (visible platform) conditions 2-4. In addition, the MWM testing environment reduces odor trail interference 5. This has led the task to be used extensively in the study of the neurobiology and neuropharmacology of spatial learning and memory. The MWM plays an important role in the validation of rodent models for neurocognitive disorders such as Alzheimer&#x2019;s Disease 6, 7. In this protocol we discussed the typical procedure of MWM for testing learning and memory and data analysis commonly used in Alzheimer&#x2019;s disease transgenic model mice.

Morris Water Maze Test for Learning and Memory Deficits in Alzheimer&#039;s Disease Model Mice

The Morris Water Maze is a behavioral task to test hippocampal-dependent learning and memory. It has been widely used in the study of neurobiology, neuropharmacology and neurocognitive disorders in rodent models.

Morris Water Maze-Test für Lern-und Gedächtnisstörungen bei Alzheimer-Modell Mäuse

The Morris Water Maze (MWM) was first established by neuroscientist Richard G. Morris in 1981 in order to test hippocampal-dependent learning, including ...

Investigations on Alterations of Hippocampal Circuit Function Following Mild Traumatic Brain Injury

Traumatic Brain Injury (TBI) afflicts more than 1.7 million people in the United States each year and even mild TBI can lead to persistent neurological impairments 1. Two pervasive and disabling symptoms experienced by TBI survivors, memory deficits and a reduction in seizure threshold, are thought to be mediated by TBI-induced hippocampal dysfunction 2,3. In order to demonstrate how altered hippocampal circuit function adversely affects behavior after TBI in mice, we employ lateral fluid percussion injury, a commonly used animal model of TBI that recreates many features of human TBI including neuronal cell loss, gliosis, and ionic perturbation 4-6.
	Here we demonstrate a combinatorial method for investigating TBI-induced hippocampal dysfunction. Our approach incorporates multiple ex vivo physiological techniques together with animal behavior and biochemical analysis, in order to analyze post-TBI changes in the hippocampus. We begin with the experimental injury paradigm along with behavioral analysis to assess cognitive disability following TBI. Next, we feature three distinct ex vivo recording techniques: extracellular field potential recording, visualized whole-cell patch-clamping, and voltage sensitive dye recording. Finally, we demonstrate a method for regionally dissecting subregions of the hippocampus that can be useful for detailed analysis of neurochemical and metabolic alterations post-TBI.
	These methods have been used to examine the alterations in hippocampal circuitry following TBI and to probe the opposing changes in network circuit function that occur in the dentate gyrus and CA1 subregions of the hippocampus (see Figure 1). The ability to analyze the post-TBI changes in each subregion is essential to understanding the underlying mechanisms contributing to TBI-induced behavioral and cognitive deficits. 
	The multi-faceted system outlined here allows investigators to push past characterization of phenomenology induced by a disease state (in this case TBI) and determine the mechanisms responsible for the observed pathology associated with TBI.

A multi-faceted approach to investigating functional changes to hippocampal circuitry is explained. Electrophysiological techniques are described along with the injury protocol, behavioral testing and regional dissection method. The combination of these techniques can be applied in similar fashion for other brain regions and scientific questions.

Untersuchungen über Veränderungen der hippokampalen Schaltung Funktion Nach Mild Traumatic Brain Injury

Traumatic Brain Injury (TBI) afflicts more than 1.7 million people in the United States each year and even mild TBI can lead to persistent neurological ...

A Simple Alternative to Stereotactic Injection for Brain Specific Knockdown of miRNA

MicroRNAs (miRNAs) are key regulators of gene expression. In the brain, vital processes like neurodevelopment and neuronal functions depend on the correct expression of microRNAs. Perturbation of microRNAs in the brain can be used to model neurodegenerative diseases by modulating neuronal cell death. Currently, stereotactic injection is used to deliver miRNA knockdown agents to specific location in the brain. Here, we discuss strategies to design antagomirs against miRNA with locked nucleotide modifications (LNA). Subsequently describe a method for brain specific delivery of antagomirs, uniformly across different regions of the brain. This method is simple and widely applicable since it overcomes the surgery, associated injury and limitation of local delivery in stereotactic injections. We prepared a complex of neurotropic, cell-penetrating peptide Rabies Virus Glycoprotein (RVG) with antagomir against miRNA-29 and injected through tail vein, to specifically deliver in the brain. The antagomir design incorporated features that allow specific targeting of the miRNA and formation of non-covalent complexes with the peptide. The knock-down of the miRNA in neuronal cells, resulted in apoptotic cell death and associated behavioural defects. Thus, the method can be used for acute models of neuro-degeneration through the perturbation of miRNAs.

MicroRNAs play crucial roles in the brain and are potential targets for modeling neuro-degeneration. However, perturbing miRNA levels is challenging due to the short length of miRNA and inaccessibility of the brain tissue. This video presents a method for antagomir design and brain specific delivery using a neuropeptide in mice.

Eine einfache Alternative zur stereotaktische Injektion für Hirnspezifische Knockdown von miRNA

MicroRNAs (miRNAs) are key regulators of gene expression.  In the brain, vital processes like neurodevelopment and neuronal functions depend on the ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Ein einfacher Weg zu messen Veränderungen in Reward-seeking Verhalten verwenden<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

High Resolution Quantitative Synaptic Proteome Profiling of Mouse Brain Regions After Auditory Discrimination Learning

The molecular synaptic mechanisms underlying auditory learning and memory remain largely unknown. Here, the workflow of a proteomic study on auditory discrimination learning in mice is described. In this learning paradigm, mice are trained in a shuttle box Go/NoGo-task to discriminate between rising and falling frequency-modulated tones in order to avoid a mild electric foot-shock. The protocol involves the enrichment of synaptosomes from four brain areas, namely the auditory cortex, frontal cortex, hippocampus, and striatum, at different stages of training. Synaptic protein expression patterns obtained from trained mice are compared to na&#239;ve controls using a proteomic approach. To achieve sufficient analytical depth, samples are fractionated in three different ways prior to mass spectrometry, namely 1D SDS-PAGE/in-gel digestion, in-solution digestion and phospho-peptide enrichment. 
High-resolution proteomic analysis on a mass spectrometer and label-free quantification are used to examine synaptic protein profiles in phospho-peptide-depleted and phospho-peptide-enriched fractions of synaptosomal protein samples. A commercial software package is utilized to reveal proteins and phospho-peptides with significantly regulated relative synaptic abundance levels (trained/na&#239;ve controls). Common and differential regulation modes for the synaptic proteome in the investigated brain regions of mice after training were observed. Subsequently, meta-analyses utilizing several databases are employed to identify underlying cellular functions and biological pathways.

The identification of molecules and pathways controlling synaptic plasticity and memory is still a major challenge in neuroscience. Here, a workflow is described addressing the relative quantification of synaptic proteins supposedly involved in the molecular reorganization of synapses during learning and memory consolidation in an auditory learning paradigm.

Hohe Auflösung Quantitative Synaptische Proteome Profilieren von Maus Hirnregionen Nach Auditory Diskriminierung Lernen

The molecular synaptic mechanisms underlying auditory learning and memory remain largely unknown. Here, the workflow of a proteomic study on auditory ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful analysis of synaptic transmission modulation when performing field potential or intracellular recordings. This manuscript describes methodological aspects that might be helpful in improving experimental conditions for the maintenance of acute brain slices and for recording field excitatory postsynaptic potentials in a commercially available submersion chamber with an outflow-carbogenation unit. The outflow-carbogenation helps to stabilize the oxygen level in experiments that rely on the recycling of a small buffer reservoir to enhance the cost-efficiency of drug experiments. In addition, the manuscript presents representative experiments that examine the effects of different carbogenation modes and stimulation paradigms on the activity-dependent synaptic plasticity of synaptic transmission.

This protocol describes the stabilization of the oxygen level in a small volume of recycled buffer and methodological aspects of recording activity-dependent synaptic plasticity in submerged acute hippocampal slices.

Aufnahme synaptische Plastizität in akuten Hippocampal Scheiben gepflegt in einem kleinvolumigen Recycling - Perfusions- und untertauchen-Typ-Kammer-System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Measurement &amp; Analysis of the Temporal Discrimination Threshold Applied to Cervical Dystonia

The temporal discrimination threshold (TDT) is the shortest time interval at which an observer can discriminate two sequential stimuli as being asynchronous (typically 30-50 ms). It has been shown to be abnormal (prolonged) in neurological disorders, including cervical dystonia, a phenotype of adult onset idiopathic isolated focal dystonia. The TDT is a quantitative measure of the ability to perceive rapid changes in the environment and is considered indicative of the behavior of the visual neurons in the superior colliculus, a key node in covert attentional orienting. This article sets out methods for measuring the TDT (including two hardware options and two modes of stimuli presentation). We also explore two approaches of data analysis and TDT calculation. The application of the assessment of temporal discrimination to the understanding of the pathogenesis of cervical dystonia and adult onset idiopathic isolated focal dystonia is also discussed.

Methods for the measurement and analysis of the temporal discrimination threshold are presented, and its application to the study of the pathogenesis of cervical dystonia are discussed.

Messung und Analyse der zeitlichen Diskriminierung Schwelle angewendet, zervikale Dystonie

The temporal discrimination threshold (TDT) is the shortest time interval at which an observer can discriminate two sequential stimuli as being ...

A Simple and Reproducible Method to Prepare Membrane Samples from Freshly Isolated Rat Brain Microvessels

The blood-brain barrier (BBB) is a dynamic barrier tissue that responds to various pathophysiological and pharmacological stimuli. Such changes resulting from these stimuli can greatly modulate drug delivery to the brain and, by extension, cause considerable challenges in the treatment of central nervous system (CNS) diseases. Many BBB changes that affect pharmacotherapy, involve proteins that are localized and expressed at the level of endothelial cells. Indeed, such knowledge on BBB physiology in health and disease has sparked considerable interest in the study of these membrane proteins. From a basic science research standpoint, this implies a requirement for a simple but robust and reproducible method for isolation of microvessels from brain tissue harvested from experimental animals. In order to prepare membrane samples from freshly isolated microvessels, it is essential that sample preparations be enriched in endothelial cells but limited in the presence of other cell types of the neurovascular unit (i.e., astrocytes, microglia, neurons, pericytes). An added benefit is the ability to prepare samples from individual animals in order to capture the true variability of protein expression in an experimental population. In this manuscript, details regarding a method that is utilized for isolation of rat brain microvessels and preparation of membrane samples are provided. Microvessel enrichment, from samples derived, is achieved by using four centrifugation steps where dextran is included in the sample buffer. This protocol can easily be adapted by other laboratories for their own specific applications. Samples generated from this protocol have been shown to yield robust experimental data from protein analysis experiments that can greatly aid the understanding of BBB responses to physiological, pathophysiological, and pharmacological stimuli.

Here, a method for isolation of rat brain microvessels and for the preparation of membrane samples is described. This protocol has the clear advantage of producing enriched microvessel samples with acceptable protein yield from individual animals. Samples can then be used for robust protein analyses at the brain microvascular endothelium.

Eine einfache und reproduzierbare Methode, Membran-Proben von frisch isolierte Ratte Gehirn Mikrogefäßen vorzubereiten

The blood-brain barrier (BBB) is a dynamic barrier tissue that responds to various pathophysiological and pharmacological stimuli. Such changes resulting ...