Dieses Forschungsprojekt wurde von Verleihungsnummer R21AA017735 (YS) aus der National Institutes für Alkoholmissbrauch und Alkoholismus unterstützt. Der Inhalt ist allein in der Verantwortung des Autors und nicht notwendigerweise die offizielle Meinung des National Institute on Alkoholmissbrauch und Alkoholismus oder der National Institutes of Health. Der Autor möchte auch Charisse Montgomery für die Bearbeitung des Manuskripts danken.

1. Tiere und Zucht Trophic Peptide Behandlung <ol><li> Breed C57BL/mice indem die weiblichen Mäusen (~ 6 Wochen alten, Durchschnittsgewicht 20 g) in männliche Käfige für 2 Stunden. </li><li> Überprüfen Sie für ein Spermium Stecker und / oder vaginalen Abstrich sofort danach. </li><li> Wenn positiv, bezeichnen diesen Zeitpunkt wie embryonale Tag 0 (E0). </li><li> Auf E7, Gewicht-match trächtige Weibchen zu Kontroll-und Behandlungsgruppen (3 Gruppen) zugeordnet sind, wie beschrieben vor kurzem 4: 1) Alkohol (Ethanol) flüssige Diät-Gruppe (ALC), 2) Paar gefütterte Kontrollgruppe (PF), 3) Peptide Behandlungsgruppe, die intraperitoneale (ip) Injektion von ADNF-9 Peptid neben Alkohol-Exposition flüssige Diät (ALC/ADNF-9) erhalten soll. Die Einzelheiten der Herstellung von ALC und PF Diäten und das Verfahren der ip-Injektionen können bei unseren letzten Arbeiten 4 gefunden werden. </li><li> Messen Sie täglich Alkohol flüssige Nahrung, die den freien Zugang als die einzige Quelle von Nährstoffen versorgt werden kann. PF flüssige Diät Joch individuell to ein ALC Damm kann täglich als auch gemessen werden. </li><li> Das Volumen der Flüssigkeit Ernährung während der vorangegangenen 24 Stunden verbraucht werden aus aufgezeichnet werden 30-ml-Röhrchen mit Schraubverschluss und frisch zubereitete Ernährung sollte täglich von E7 bis E13 zur Verfügung gestellt werden. </li></ol> 2. Dissektion der Föten und Mikrodissektion der Fetal Brains <ol><li> Opfern schwangeren Mäusen auf E13 von tief euthanizing die Mäuse mit einem CO 2-Verfahren durch einen Genickbruch folgte. </li><li> Reinigen Sie die Bauch-Website des Einschnitts mit 70% Ethanol. </li><li> Machen Sie einen Bauchschnitt mit einer sterilen Schere und Pinzette. </li><li> Wenn der Bauch offen ist, sezieren die Gebärmutter, indem sie mit einer Pinzette und mit den anderen um die Zange Mesometrium weg von der Gebärmutter reißen. Vergewissern Sie sich, um dieses Verfahren langsam zu tun, um zu vermeiden Durchstechen der Embryonen. </li><li> Entfernen Sie die Embryonen aus der Gebärmutter und überführen sie in eine Zellkulturschale (60 mm x 15 mm) mit Hanks &#39;Balanced Salt Lösung<html> (HBSS) in eiskaltem Wasser. </li><li> Dissect fetale Gehirn aus den ganzen Embryonen unter Stereomikroskop für die Mikrodissektion. </li><li> Mit ultra-feinen Pinzette für die Mikrodissektion, ziehen Sie die Haut der Embryonen am oberen Teil des Kopfes, um den Schädel freizulegen. </li><li> Sobald der Schädel freigelegt und übersichtlich visualisiert unter dem Stereomikroskop Mikrodissektion, dann ziehen Sie die Schädel ab dem hinteren Teil des Gehirns auf das Rückenmark und Hirnstamm Bereichen. </li><li> Achten Sie darauf, beim Abziehen der Schädel Stück für Stück von hinten nach vorne Teile des Kopfes. </li><li> Sobald fetale Gehirn visuell ausgesetzt sind, mit dem Extrahieren sie gehen. </li><li> Präparieren Sie die fötalen Gehirnen von der Basis des Primordium Riechkolben auf der Basis des metencephalon. </li><li> Postfix alle fetalen Gehirne in 4% Paraformaldehyd für 2-3 Tage seziert. Sie können auch einfrieren anderen fetalen Gehirne von jedem dam, wenn Sie testen sie für Western-Blot-oder enzymatische Assays. </li></ol>nt &quot;&gt; Hinweis: Die Vorgehensweisen zum Tier Anwendungen wurden von der Institutional Animal Care genehmigt und Verwenden Ausschuss der University of Toledo, die in Übereinstimmung mit den Richtlinien der Institutional Animal Care sind und Verwenden Ausschuss an den National Institutes of Health und der Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren. 3. Einbetten Fetal Brains in Gelatine für Schnitte <ol><li> Bereiten Sie 10% von Gelatine Klasse A. </li><li> Füllen Sie eine Peel-away Einbettform halbem Weg und warten, bis die Gelatine erstarrt. </li><li> Ort-Steuerung und pränatal behandelt fetale Gehirn side-by-side auf der erstarrten Gelatine. Dies ist die konsequente Bedingungen Immunnachweis des Zelltods zwischen den beiden Kontroll-und experimentellen Gruppen zu halten. </li><li> In flüssigen Gelatine auf der Oberseite des fetalen Gehirns, um eine vollständige Form zu machen (stellen Sie sicher, die Gelatine ist nicht zu heiß). </li><li> Kühlen Sie die vorbereitete Gelatineform die fetale Gehirn hält für 15 min. </li><li> Peel offdie Einbettung Formenbau, Kunststoff-und übertragen dann die vorgefertigten Gelatine enthält fetale Gehirn in 4% Paraformaldehyd für zwei Tage. </li><li> Platz und Abschnitt befestigt fetale Gehirn in Gelatine mit Vibratom Schneiden Maschine (Leica VT 1000S) bei 50 um Dicke für koronale Schnitte. Diese Dicke ist in unseren Studien getestet, weil es besser anatomische Merkmale bietet. Darüber hinaus Dicken von 25 um und höher kann auch mit dieser Technik mit der fetalen Gehirne in 10% Gelatine eingebettet getestet werden. Beachten Sie, dass koronalen Abschnitte geschnitten wurden mit Vibratom an der Basalganglien Eminenz Ebene auf dem Vorderhirn </li><li> Sammeln der fötalen Gehirn Abschnitte in Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS). </li><li> Montieren Sie die fetalen Gehirns Abschnitte in Superfrost Plus-Objektträger in Wasser. </li><li> Trocknen Sie die Teile montiert für 15 min. </li><li> Legen Sie die Folien (montiert mit den fetalen Gehirns Abschnitte) in PBS für nächsten Tag Prüfung der TUNEL Reaktion. </li></ol> 4. TUNEL Reaktion für DeSchutz von Zelltod oder Apoptose (TUNEL: TdT-vermittelte dUTP Nick End Labeling; TdT: Desoxyribonukleotidyltransferase). Dieser Test zielt darauf ab, den Zelltod zu bestimmen. <ol><li> Gönnen fetalen Gehirns Abschnitte in Superfrost Plus-Objektträger mit Proteinase K (20 ug / ml) für 5 min bei 37 ° C (300 ul Proteinase K gemischt in 20 ml PBS) montiert. Slides sind in 5-Plend offenen maile montiert). </li><li> Spülen fetalen Gehirns Abschnitte (montiert in Dias) mit PBS dreimal für 5 min unter Orbital Shaker. </li><li> Inkubation der Schnitte mit 3% H 2 O 2 in Methanol für 10 min bei Raumtemperatur (3 ml 30% H 2 O 2 in 27 ml 100% Methanol) (Folien sollten nicht in einem Shaker sein). </li><li> Spülen Abschnitte mit PBS dreimal 5 min in Schüttler. </li><li> Inkubieren Abschnitte in Permeabilisierung Lösung (0,1% Triton-100 in 0,1% Natriumcitrat) für 2 min auf Eis (4 ° C) (100 ul TritonX + 0,1 g Natriumcitrat + 99,9 ml destilliertemd Wasser). </li><li> Spülen Abschnitte in PBS zweimal für 5 min in Schüttler. </li><li> Dry Gegend um Abschnitte in den Folien. </li><li> Zeichnen Barriere auf Superfrost Plus-Objektträger mit PAP Pen. Dies zielt darauf ab, jede Austreten von Lösung, die verwendet werden, um die Abschnitte für den Nachweis von TUNEL-positiven Zellen zu behandeln verhindern. </li><li> Inkubieren der Abschnitte mit TUNEL Reaktionsmischung (50 ul von Flasche 1 und 450 ul aus der Flasche 2) für 1 Stunde bei 37 ° C, wird die Steuerung durch Inkubation in Lösung aus der Flasche 2 verwendet werden. </li><li> Abspülen mit PBS dreimal 5 min unter Orbit Shaker. </li><li> Dry Umgebung Gewebe. </li><li> Inkubieren Abschnitte mit Wandler-POD 30 min bei 37 ° C. </li><li> Spülen Sie die Abschnitte dreimal 5 min mit Tris HCl (pH 7,5, 0,05 M). </li><li> Inkubieren Sie die Schnitte für 7 min in 0,05% 3&#39;-3&#39;-Diaminobenzidin (DAB) und 0,003% H 2 O 2 (25 ml Tris HCl, pH 7,5, 0,05 M + 25 ul 3% H 2 0 2 + 500 ul DAB) Unter Oribtal Schüttler bei 4 ° C (in Eis) und in dunklen (stellen Sie sicher, dieses Verfahren in neue 5-Plend offenen Mailer tun). </li><li> Spülen Sie die Schnitte mit PBS dreimal 5 min unter Orbital Shaker. </li><li> Halten Sie die Folien Abschnitte in PBS für nicht mehr als 24 Stunden in PBS, dann verarbeiten sie für Nissl-Färbung, wie im nächsten Abschnitt Protokoll. </li></ol> Hinweis: DAB ist krebserregend. Verwenden Sie Handschuhe und reinigen Sie alle Gerichte mit dem Bleichmittel einmal fertig mit all den Experimenten verwendet. 5. Nissl Färbung für Herstellung von Fetal Gehirn Bereiche zur mikroskopischen Beobachtung <ol><li> Nissl Färbung Verfahren sollte in einer biologischen Schutzhaube vorgenommen werden. </li><li> Spülen Sie die Gleitabschnitte mit entionisiertem Wasser für 2 min. </li><li> Inkubieren der Abschnitte in 70% Ethanol für 2 min. </li><li> Inkubieren der Abschnitte in 95%-igem Ethanol für 6 min. </li><li> Inkubieren der Abschnitte in 70% Ethanol für 2 min. </li><li> Spülen Sie die Abschnitte in deionisiertem water für 2 min. </li><li> Inkubieren die Abschnitte in Kresylviolett für 3 min Stain. </li><li> Spülen Sie die Abschnitte in entionisiertem Wasser für 2 min. </li><li> Inkubieren der Abschnitte in 70% Ethanol für 2 min. </li><li> Inkubieren Sie die Schnitte in 95% Ethanol + 3 ml Eisessig 3 min. </li><li> Inkubieren der Abschnitte in 95% Ethanol für 2 min. </li><li> Inkubieren der Abschnitte in 100% Ethanol für 2 min dreimal. </li><li> Inkubieren der Abschnitte in Xylol für 10 min dreimal. </li><li> Slides hält die fetalen Gehirns Abschnitten montiert mit Permount und Deckglas Glasplättchen werden. </li><li> Lassen Sie das gerahmte Dias über Nacht vor der mikroskopischen Beobachtung und Analysen. </li><li> Mikroskopische Beobachtung und Aufnahmen können unter Leica aufrechten Mikroskop durchgeführt werden. </li></ol>

<ol>
	<li>Sari, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+neuroprotective+protein-derived+peptide,+NAP,+preventing+alcohol-induced+apoptosis+in+fetal+brain+of+C57BL/6+mouse.">Activity-dependent neuroprotective protein-derived peptide, NAP, preventing alcohol-induced apoptosis in fetal brain of C57BL/6 mouse.</a> Neuroscience. 158 (4), 1426-1435 (2009).</li><li>Sari, Y., Chiba, T., Yamada, M., Rebec, G. V., Aiso, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+peptide,+colivelin,+prevents+alcohol-induced+apoptosis+in+fetal+brain+of+C57BL/6+mice:+signaling+pathway+investigations.">A novel peptide, colivelin, prevents alcohol-induced apoptosis in fetal brain of C57BL/6 mice: signaling pathway investigations.</a> Neuroscience. 164 (4), 1653-1664 (2009).</li><li>Sari, Y., Hammad, L. A., Saleh, M. M., Rebec, G. V., Mechref, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alteration+of+selective+neurotransmitters+in+fetal+brains+of+prenatally+alcohol-treated+C57BL/6+mice:+quantitative+analysis+using+liquid+chromatography/tandem+mass+spectrometry.">Alteration of selective neurotransmitters in fetal brains of prenatally alcohol-treated C57BL/6 mice: quantitative analysis using liquid chromatography/tandem mass spectrometry.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 28 (3), 263-269 (2010).</li><li>Sari, Y., Weedman, J. M., Ge, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+neurotrophic+factor-derived+peptide+prevents+alcohol-induced+apoptosis,+in+part,+through+Bcl2+and+c-Jun+N-terminal+kinase+signaling+pathways+in+fetal+brain+of+C57BL/6+mouse.">Activity-dependent neurotrophic factor-derived peptide prevents alcohol-induced apoptosis, in part, through Bcl2 and c-Jun N-terminal kinase signaling pathways in fetal brain of C57BL/6 mouse.</a> Neuroscience. 202, 465-473 (2012).</li><li>Sari, Y., Zhang, M., Mechref, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+proteins+in+fetal+brains+of+alcohol-treated+prenatally+C57BL/6+mice:+a+proteomic+investigation.">Differential expression of proteins in fetal brains of alcohol-treated prenatally C57BL/6 mice: a proteomic investigation.</a> Electrophoresis. 31, 1-14 (2010).</li><li>Bassan, M., Zamostiano, R., Davidson, A., Pinhasov, A., Giladi, E., Perl, O., Bassan, H., Blat, C., Gibney, G., Glazner, G., Brenneman, D. E., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+sequence+of+a+novel+protein+containing+a+femtomolar-activity-dependent+neuroprotective+peptide.">Complete sequence of a novel protein containing a femtomolar-activity-dependent neuroprotective peptide.</a> J. Neurochem. 72 (3), 1283-1293 (1999).</li><li>Brenneman, D. E., Hauser, J., Neale, E., Rubinraut, S., Fridkin, M., Davidson, A., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+neurotrophic+factor:+structure-activity+relationships+of+femtomolar-acting+peptides.">Activity-dependent neurotrophic factor: structure-activity relationships of femtomolar-acting peptides.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 285 (2), 619-627 (1998).</li><li>Spong, C. Y., Abebe, D. T., Gozes, I., Brenneman, D. E., Hill, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+fetal+demise+and+growth+restriction+in+a+mouse+model+of+fetal+alcohol+syndrome.">Prevention of fetal demise and growth restriction in a mouse model of fetal alcohol syndrome.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 297 (2), 774-779 (2001).</li><li>Sari, Y., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+deficits+associated+with+fetal+alcohol+exposure+may+be+protected,+in+part,+by+peptides+derived+from+activity-dependent+neurotrophic+factor+and+activity-dependent+neuroprotective+protein.">Brain deficits associated with fetal alcohol exposure may be protected, in part, by peptides derived from activity-dependent neurotrophic factor and activity-dependent neuroprotective protein.</a> Brain Res. Brain Res. Rev. 52 (1), 107-118 (2006).</li><li>Brenneman, D. E., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+femtomolar-acting+neuroprotective+peptide.">A femtomolar-acting neuroprotective peptide.</a> J. Clin. Invest. 97 (10), 2299-2307 (1996).</li><li>Zamostiano, R., Pinhasov, A., Gelber, E., Steingart, R. A., Seroussi, E., Giladi, E., Bassan, M., Wollman, Y., Eyre, H. J., Mulley, J. C., Brenneman, D. E., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+characterization+of+the+human+activity-dependent+neuroprotective+protein.">Cloning and characterization of the human activity-dependent neuroprotective protein.</a> J. Biol. Chem. 276 (1), 708-714 (2001).</li><li>Offen, D., Sherki, Y., Melamed, E., Fridkin, M., Brenneman, D. E., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasoactive+intestinal+peptide+(VIP)+prevents+neurotoxicity+in+neuronal+cultures:+relevance+to+neuroprotection+in+Parkinson's+disease.">Vasoactive intestinal peptide (VIP) prevents neurotoxicity in neuronal cultures: relevance to neuroprotection in Parkinson's disease.</a> Brain Res. 854 (1-2), 257-262 (2000).</li><li>Steingart, R. A., Solomon, B., Brenneman, D. E., Fridkin, M., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VIP+and+peptides+related+to+activity-dependent+neurotrophic+factor+protect+PC12+cells+against+oxidative+stress.">VIP and peptides related to activity-dependent neurotrophic factor protect PC12 cells against oxidative stress.</a> J. Mol. Neurosci. 15 (3), 137-145 (2000).</li></ol>

Keine Angaben gemacht werden.

Die Methodik und die Technologie in dieser Studie dargestellt sind, zeigen die Auswirkungen der pränatalen Exposition gegenüber Alkohol im fetalen Gehirn und die Rolle der trophischen Peptide bei der Prävention dieser Effekte. Diese können Informationen darüber, wie zu anderen Drogen oder andere giftige Chemikalien in der fötalen Gehirn während der verschiedenen Stadien der Schwangerschaft zu untersuchen. In Bezug auf die Zucht Paradigma, in einigen Fällen ist die Erfassung der Sperm...

Das Ziel der experimentellen hier beschriebenen Methoden ist es, die neuroprotektive Wirkung von trophischen Peptide in einer fetalen Alkohol-Exposition Modell mit mehreren Techniken, die Zucht zu beurteilen, Fütterung, microdissecting und Erfassen Zelltod. Arbeiten aus unserem Labor hat eine flüssige Diät mit Alkohol als ein Modell der moderate Alkoholkonsum, die ähnlich einem menschlichen trinken Paradigma in der Bezeichnung der Menge an Alkohol, vielleicht gemischt beteiligt verbraucht 1-5. Wir und andere haben drei Peptidderivate, die neuroprotektive gegen die schädlichen Wirkungen von fetalen Alkohol Exposition identifiziert. Studien, die Alkohol-Exposition während der embryonalen Stadien anhand von Tiermodellen kann zur Identifizierung von potentiellen Mechanismen der Neuroprotektion führen und damit für die Entwicklung von Interventionsstrategien Verfahren. Dies kann umfassende Informationen über die neuroprotektive Effekte und Abschwächung der schädlichen Auswirkungen von Alkohol während der Schwangerschaft. Mögliche Prävention der Auswirkungen einer pränatalen Exposition Alkohol kann es sich um die Behandlung von schwangeren Mäusen mit Peptiden, die gezeigt haben, um bei der Neuroprotektion in vitro und in vivo 6,7 1,2,4,8,9 einbezogen werden. Unter dieser Peptide wird SALLRSIPA, wie ADNF-9 oder SAL bekannt, von Aktivitäts-abhängigen neurotrophen Faktor (ADNF) 7,10 abgeleitet. Ein weiteres Peptid mit der Sequenz NAPVSIPQ Peptid bezeichnet NAP von leistungsabhängige neuroprotektive Protein (ADNP) 6,11 abgeleitet ist, zeigte eine starke schützende Wirkung gegen oxidativen Stress mit Alkoholberührung 12,13 verbunden. Darüber hinaus haben wir vor kurzem eine neue synthetisierte Peptid, colivelin, die eine wichtige neuroprotektive Rolle in der fetalen Alkohol-Exposition Modell 2 zu spielen scheint identifiziert. Colivelin wird von ADNF-9 und AGA-(C8R) HNG17 (PAGASRLLLLTGEIDLP) zusammen. Die Bedeutung der Verwendung dieser Peptide ist, dass sie die Fähigkeit haben,überqueren die Blut-Hirn-Schranke, um die Auswirkungen von Alkohol-induzierten Apoptose und Gehirn Wachstum Defizite zu verhindern. Die experimentellen Methoden C57BL / 6 Mäusen für die Prüfung der neuroprotektive Effekte gegen Alkohol-induzierte Apoptose. Wir haben einen 2-Stunden-Fenster statt über Nacht Zucht angenommen, um genau zu schätzen, die embryonalen Tag 0 (E0), wie es durch den Nachweis eines Spermiums Stecker und Vaginalabstrich 1-5 enthüllt werden kann. Wir haben eine flüssige Diät mit Magensonden eingesetzt, da dies als kostenlosen Zugang statt Lieferung von Alkohol durch eine Magensonde Route, die Stress schwangeren Mäusen induzieren kann. Auf der anderen Seite kann eine Herausforderung sein Mikrodissektion aufgrund der Weichheit des fötalen Hirngewebe, die auftreten, wenn Sezieren fetale Gehirn in frühen embryonalen Stadien werden könnte. Hier zeigen wir, visualisiert Techniken, um mit all den Herausforderungen, denen Mikrodissektion umzugehen. Da die fötalen Gehirn Schneiden kann auch schwierig sein, haben wir angenommeneine Technik, die die Einbettung der fetalen Gehirn in Gelatine mit Peel-away Einbettschälchen beinhaltet. Wir haben in Schneiden der fetalen Gehirn in frei schwebende Abschnitte bei 50 um Dicke erfolgreich. Dies ermöglicht es uns, alle Änderungen von Inhalten Protein im fötalen Gehirn Abschnitte untersuchen, einschließlich der Identifizierung von Zelltod.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of the reagent/equipment</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Superfrost Plus Slides</td>
 <td>VWR</td>
 <td>48311-703</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PAP PEN</td>
 <td>Research Products Int. Corp.</td>
 <td>195506</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5-Plend Open Mailer </td>
 <td>Heathrow Scientific, LLC</td>
 <td>HS 15983G</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Peel away embedding molds</td>
 <td>Electron Microscopy Sciences</td>
 <td>70182</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>In situ cell death detection kit, POD</td>
 <td>Roche Diagnostics, Inc</td>
 <td>11684817910</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hanks' Balanced Salt Solution</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>14170-120 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Gelatin Type A</td>
 <td>FisherScientific</td>
 <td>G8-500</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Stereomicroscope</td>
 <td>W. NUHSBAUM, Inc </td>
 <td>Leica M60, KL 200 LED</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro-Vibratome</td>
 <td>Leica, Inc </td>
 <td>Leica VT 1000S</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Moria Ultra Fine Forceps </td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>11370-40</td>
 <td>2 pairs</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Graduate 30 ml feeding tubes</td>
 <td>Dyets, Inc </td>
 <td>900012 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vitamin Mix </td>
 <td>Bio-Serv. Inc. </td>
 <td>F8031 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mineral Mix</td>
 <td>Bio-Serv. Inc. </td>
 <td>F8598 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Maltose Dextrin</td>
 <td>Bio-Serv. Inc. </td>
 <td>3650 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethyl alcohol 190 Proof, 5 gallons</td>
 <td>111000190-SS05 </td>
 <td>Pharmco-AAPER</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Upright microscope</td>
 <td>W. NUHSBAUM, Inc</td>
 <td>LEICA DM 4000 </td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

experimental methods for testing the effects of neurotrophic peptide, adnf-9, against alcohol-induced apoptosis during pregnancy in c57bl/6 mice

Experimentelle Designs für die Untersuchung der Auswirkungen einer pränatalen Exposition Alkohol während der frühen embryonalen Stadien der fetalen Hirnentwicklung sind anspruchsvoll. Dies ist vor allem auf die Schwierigkeit der Mikrodissektion des fetalen Gehirns und ihre Schnitte zur Bestimmung von apoptotischen Zellen durch pränatale Alkohol verursacht. Die hier beschriebenen Experimente stellen visualisiert Techniken Zucht von Mäusen zur Identifizierung von Zelltod in fötalen Hirngewebe. In dieser Studie wurden C57BL / 6 Mäuse als Tiermodell für die Untersuchung fetalen Alkohol-Exposition und die Rolle der trophischen Peptid gegen Alkohol-induzierte Apoptose. Die Zucht besteht aus einem 2-Stunden-Matten Fenster, um die genaue Stadium der embryonalen Alter zu bestimmen. Eine etablierte fetalen Alkohol-Exposition Modell wurde in dieser Studie verwendet worden, um die Auswirkungen einer pränatalen Exposition Alkohol in fetalen Gehirn zu bestimmen. Dies beinhaltet den freien Zugang zu Alkohol-oder Paar-fed flüssige Ernährung als die einzige Quelle von Nährstoffen für die schwangeren Mäusen. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Die Techniken, die Dissektion der Föten und Mikrodissektion der fetalen Gehirne sind sorgfältig beschrieben, da letztere eine Herausforderung sein kann. Microdissection erfordert ein Stereomikroskop und ultra-feinen Pinzette. Schritt-für-Schritt-Verfahren zum Präparieren der fetalen Gehirne sind visuell zur Verfügung gestellt. Die fötalen Gehirn von der Basis des primordium Riechkolben der Basis des metencephalon seziert. Zur Untersuchung der Apoptose werden fetale Gehirn zuerst in Gelatine eingebettet mit einer Peel-away-Form, um ihre Schnitte mit einem Vibratom Gerät zu erleichtern. Fetal Gehirn eingebettet und in Paraformaldehyd fixiert sind leicht geschnitten und die frei schwebende Abschnitte in SuperFrost sowie Folien zur Bestimmung der Apoptose oder Zelltod zu montieren. TUNEL (TdT-vermittelte dUTP Nick End Labeling; TdT: Desoxyribonukleotidyltransferase)-Assay wurde verwendet, um den Zelltod oder Apoptose Zellen zu identifizieren. Es ist bemerkenswert, dass apoptosis und zellvermittelte Zytotoxizität von DNA-Fragmentierung ist. Somit sind die visualisiert TUNEL-positiven Zellen anzeigt, Zelltod oder apoptotischen Zellen. Die experimentellen Entwürfe hier Informationen über die Verwendung von einem etablierten flüssige Diät für die Untersuchung der Wirkung von Alkohol und die Rolle von neurotrophen Peptide während der Schwangerschaft in der fetalen Gehirns. Dies beinhaltet Zucht und Fütterung schwangeren Mäusen, microdissecting fetale Gehirn und Bestimmen Apoptose. Zusammen könnten diese visuellen und textlichen Techniken eine Quelle für die Untersuchung von pränatalen Exposition von schädlichen Substanzen in der fötalen Gehirn sein.

Die experimentellen hier beschriebenen Methoden zeigen, dass ein 2-Stunden-Fenster Zucht unerlässlich, um eine genaue Schätzung ist Schwangerschaftsdiabetes Bühne. Wir haben die Zerlegung der Embryonen im Alter von E13 gezeigt. Wir zeigten auch Mikrodissektion des fetalen Gehirns bei E13. Das Verfahren umfasst mehrere Schritte (ac), wie in Abbildung 1 beschrieben. Fetal Gehirne sind von der Basis des Primordium Riechkolben auf der Basis des metencephalon (Abbildung 1) seziert. Fetal ...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice

Die experimentellen Entwürfe hier vorgeschlagenen konzentrieren sich auf die Untersuchung der Auswirkungen von Alkohol-Exposition in der Apoptose und der Anwendung von neurotrophen Peptid während der Schwangerschaft in der fetalen Gehirns. Eine detaillierte Beschreibung aus der Zucht der Sammlung des fetalen Gehirns beschrieben. Techniken zur Bestimmung der Apoptose auch im Detail beschrieben.

Experimentelle Methoden zur Prüfung der Auswirkungen von Neurotrophic Peptide, ADNF-9, gegen den Alkohol-induzierte Apoptose während der Schwangerschaft in C57BL / 6 Mäuse

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This ...

experimental-methods-for-testing-effects-neurotrophic-peptide-adnf-9

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.6K Aufrufe.  University of Toledo. Die experimentellen Entwürfe hier vorgeschlagenen konzentrieren sich auf die Untersuchung der Auswirkungen von Alkohol-Exposition in der Apoptose und der Anwendung von neurotrophen Peptid während der Schwangerschaft in der fetalen Gehirns. Eine detaillierte Beschreibung aus der Zucht der Sammlung des fetalen Gehirns beschrieben. Techniken zur Bestimmung der Apoptose auch im Detail beschrieben.

Serie: Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice

Methods for Experimental Manipulations after Optic Nerve Transection in the Mammalian CNS

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. The optic nerve can be accessed within the orbit of the eye and completely transected (axotomized), cutting the axons of the entire RGC population. Optic nerve transection is a reproducible model of apoptotic neuronal cell death in the adult CNS 1-4. This model is particularly attractive because the vitreous chamber of the eye acts as a capsule for drug delivery to the retina, permitting experimental manipulations via intraocular injections. The diffusion of chemicals through the vitreous fluid ensures that they act upon the entire RGC population. Viral vectors, plasmids or short interfering RNAs (siRNAs) can also be delivered to the vitreous chamber in order to infect or transfect retinal cells 5-12. The high tropism of Adeno-Associated Virus (AAV) vectors is beneficial to target RGCs, with an infection rate approaching 90% of cells near the injection site 6, 7, 13-15. Moreover, RGCs can be selectively transfected by applying siRNAs, plasmids, or viral vectors to the cut end of the optic nerve 16-19 or injecting vectors into their target the superior colliculus 10. This allows researchers to study apoptotic mechanisms in the injured neuronal population without confounding effects on other bystander neurons or surrounding glia. RGC apoptosis has a characteristic time-course whereby cell death is delayed 3-4 days postaxotomy, after which the cells rapidly degenerate. This provides a window for experimental manipulations directed against pathways involved in apoptosis. Manipulations that directly target RGCs from the transected optic nerve stump are performed at the time of axotomy, immediately after cutting the nerve. In contrast, when substances are delivered via an intraocular route, they can be injected prior to surgery or within the first 3 days after surgery, preceding the initiation of apoptosis in axotomized RGCs. In the present article, we demonstrate several methods for experimental manipulations after optic nerve transection.

Optic Nerve transection is a widely used model of adult CNS injury. This model is ideal for performing a number of experimental manipulations that target the retina globally or directly target the injured neuronal population of retinal ganglion cells.

Methoden für die experimentelle Manipulationen nach Optic Nerve Durchtrennung im Säuger-ZNS

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. The optic nerve can be ...

Forschung

Neurowissenschaften

Organotypic Cerebellar Cultures: Apoptotic Challenges and Detection

Organotypic cultures of neuronal tissue were first introduced by Hogue in 1947 1,2 and have constituted a major breakthrough in the field of neuroscience. Since then, the technique was developed further and currently there are many different ways to prepare organotypic cultures. The method presented here was adapted from the one described by Stoppini et al. for the preparation of the slices and from Gogolla et al. for the staining procedure 3,4.
A unique feature of this technique is that it allows you to study different parts of the brain such as hippocampus or cerebellum in their original structure, providing a big advantage over dissociated cultures in which all the cellular organization and neuronal networks are disrupted. In the case of the cerebellum it is even more advantageous because it allows the study of Purkinje cells, extremely difficult to obtain as dissociated primary culture. This method can be used to study certain developmental features of the cerebellum in vitro, as well as for electrophysiological and pharmacological experiments in both wild type and mutant mice.
The method described here was designed to study the effect of apoptotic stimuli such as Fas ligand in the developing cerebellum, using TUNEL staining to measure apoptotic cell death. If TUNEL staining is combined with cell type specific markers, such as Calbindin for Purkinje cells, it is possible to evaluate cell death in a cell population specific manner. The Calbindin staining also serves the purpose of evaluating the quality of the cerebellar cultures.

This method describes the generation of organotypic cerebellar cultures and the effect of certain apoptotic stimuli on the viability of different cerebellar cell types.

Organotypische Cerebellar Cultures: Apoptotic Challenges and Detection

Organotypic cultures of neuronal tissue were first introduced by Hogue in 1947 1,2 and have constituted a major breakthrough in the field of neuroscience. ...

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

In utero electroporation is a widely used technique for fast and efficient spatiotemporal manipulation of various genes in the rodent central nervous system. Overexpression of desired genes is just as possible as shRNA mediated loss-of-function studies. Therefore it offers a wide range of applications. The feasibility to target particular cells in a distinct area further increases the range of potential applications of this very useful method. For efficiently targeting specific regions knowledge about the subtleties, such as the embryonic stage, the voltage to apply and most importantly the position of the electrodes, is indispensable.
Here, we provide a detailed protocol that allows for specific and efficient in utero electroporation of several regions of the C57BL/6 mouse central nervous system. In particular it is shown how to transfect regions the develop into the retrosplenial cortex, the motor cortex, the somatosensory cortex, the piriform cortex, the cornu ammonis 1-3, the dentate gyrus, the striatum, the lateral septal nucleus, the thalamus and the hypothalamus. For this information about the appropriate embryonic stage, the appropriate voltage for the corresponding embryonic stage is provided. Most importantly an angle-map, which indicates the appropriate position of the positive pole, is depicted. This standardized protocol helps to facilitate efficient in utero electroporation, which might also lead to a reduced number of animals.

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

This protocol describes in detail how to specifically transfect different regions in the C57BL/6 central nervous system via in utero electroporation. Included in this protocol are detailed instructions for transfections of regions that develop into the cortex, hippocampus, thalamus, hypothalamus, lateral septal nucleus and striatum.

Cortex, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus, Lateral Septal Nucleus- und Striatum spezifische<em&gt; In Utero</em&gt; Electroporation in der C57BL / 6-Maus,

In utero electroporation is a widely used technique for fast and efficient spatiotemporal manipulation of various genes in the rodent central nervous ...

Experimental Models to Study the Neuroprotection of Acidic Postconditioning Against Cerebral Ischemia

Stroke is one of the leading causes of mortality and disability worldwide, with limited therapeutic approaches. As an endogenous strategy for neuroprotection, postconditioning treatments have proven to be promising therapies against cerebral ischemia. However, complicated procedures and potential safety issues limit their clinical application. To overcome these disadvantages, we have developed acidic postconditioning (APC) as a therapy for experimental focal cerebral ischemia. APC refers to the mild acidosis treatment by inhaling CO2 during reperfusion following ischemia. Here we present two models to execute APC in vitro and in vivo, respectively. The oxygen-glucose deprivation (OGD) treatment of mice and the corticostriatal occlusion and middle cerebral artery occlusion (MCAO) of mice were employed to mimic cerebral ischemia. APC can be simply achieved by transferring brain slices to acidic buffer bubbled with 20% CO2, or by mice inhaling 20% CO2. APC showed significant protective effects against cerebral ischemia, as reflected by tissue viability and brain infarct volume.

Acidic postconditioning protects against cerebral ischemia. Here we present two models to execute APC. They are achieved respectively by transferring corticostriatal slices to acidic buffer after oxygen-glucose deprivation in vitro and by inhaling 20% CO2 after middle cerebral artery occlusion in vivo.

Experimentelle Modelle zur Untersuchung der Neuroprotektion der sauren Nachkonditionierung gegen zerebrale Ischämie

Stroke is one of the leading causes of mortality and disability worldwide, with limited therapeutic approaches. As an endogenous strategy for ...

Sagittal Plane Kinematic Gait Analysis in C57BL/6 Mice Subjected to MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Kinematic gait analysis in the sagittal plane has frequently been used to characterize motor deficits in multiple sclerosis (MS). We describe the application of these techniques to identify gait deficits in a mouse model of MS, known as experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). Paralysis and motor deficits in mice subjected to EAE are typically assessed using a clinical scoring scale. However, this scale yields only ordinal data that provides little information about the precise nature of the motor deficits. EAE disease severity has also been assessed by rotarod performance, which provides a measure of general motor coordination. By contrast, kinematic gait analysis of the hind limb in the sagittal plane generates highly precise information about how movement is impaired. To perform this procedure, reflective markers are placed on a hind limb to detect joint movement while a mouse is walking on a treadmill. Motion analysis software is used to measure movement of the markers during walking. Kinematic gait parameters are then derived from the resultant data. We show how these gait parameters can be used to quantify impaired movements of the hip, knee, and ankle joints in EAE. These techniques may be used to better understand disease mechanisms and identify potential treatments for MS and other neurodegenerative disorders that impair mobility.

Kinematic gait analysis in the sagittal plane yields highly precise information about how movement is executed. We describe the application of these techniques to identify gait deficits for mice subjected to autoimmune-mediated demyelination. These methods may also be used to characterize gait deficits for other mouse models featuring impaired locomotion.

Sagittalebene kinematische Ganganalyse bei C57BL/6 Mäusen unterworfen MOG35-55 induzierte experimentelle Autoimmune Enzephalomyelitis

Kinematic gait analysis in the sagittal plane has frequently been used to characterize motor deficits in multiple sclerosis (MS). We describe the ...

A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by immunizing mice with neurogenic peptides to direct an inflammatory attack toward components of the peripheral nervous system (PNS). Recent advances have enabled the induction of EAN in the relatively resistant C57BL/6 mouse line using myelin protein zero (P0)106-125 or P0180-199 peptides delivered in adjuvant combined with the injection of pertussis toxin. The ability to induce EAN in the C57BL/6 strain allows for the use of the numerous genetic tools that exist on this mouse background, and thus allows the sophisticated study of disease pathogenesis and interrogation of the mechanistic action of novel therapeutics in combination with transgenic approaches. In this study, we demonstrate a simple approach to successfully induce EAN using the P0180-199 peptide in C57BL/6 mice. We also outline a protocol for the assessment of functional deficits that occur in this model, accompanied by an array of neuropathological features. Thus, this model is a powerful experimental model to study the pathogenesis of human peripheral demyelinating neuropathies, and to determine the efficacy of potential therapies that aim to promote myelin repair and protect against nerve damage in autoimmune neuritis.

This report outlines a simple approach to successfully induce experimental autoimmune neuritis (EAN) using the myelin protein zero (P0)180-199 peptide in combination with Freund&#39;s complete adjuvant and pertussis toxin. We present a sophisticated paradigm capable of accurately assessing the extent of functional deficits and neuropathology that occur in this EAN.

Ein einfacher Ansatz, experimentelle Autoimmune Neuritis bei C57BL/6 Mäusen für funktionale und neuropathologische Bewertungen zu induzieren

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by ...

Cochlear Implant Surgery and Electrically-evoked Auditory Brainstem Response Recordings in C57BL/6 Mice

Cochlear implants (CIs) are neuroprosthetic devices that can provide a sense of hearing to deaf people. However, a CI cannot restore all aspects of hearing. Improvement of the implant technology is needed if CI users are to perceive music and perform in more natural environments, such as hearing out a voice with competing talkers, reflections, and other sounds. Such improvement requires experimental animals to better understand the mechanisms of electric stimulation in the cochlea and its responses in the whole auditory system. The mouse is an increasingly attractive model due to the many genetic models available. However, the limited use of this species as a CI model is mainly due to the difficulty of implanting small electrode arrays. More details about the surgical procedure are therefore of great interest to expand the use of mice in CI research.
In this report, we describe in detail the protocol for acute deafening and cochlear implantation of an electrode array in the C57BL/6 mouse strain. We demonstrate the functional efficacy of this procedure with electrically-evoked auditory brainstem response (eABR) and show examples of facial nerve stimulation. Finally, we also discuss the importance of including a deafening procedure when using a normally hearing animal. This mouse model provides a powerful opportunity to study genetic and neurobiological mechanisms that would be of relevance for CI users.

Animal models of cochlear implants can advance knowledge of the technological bases of treating permanent sensorineural hearing loss with electrical stimulation. This study presents a surgical protocol for acute deafening and cochlear implantation of an electrode array in mice as well as the functional assessment with auditory brainstem response.

Cochlea-Implantat-Chirurgie und elektrisch evozierten Auditory Brainstem Response Aufnahmen bei C57BL/6 Mäusen

Cochlear implants (CIs) are neuroprosthetic devices that can provide a sense of hearing to deaf people. However, a CI cannot restore all aspects of ...

Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the CSF protein composition delivers crucial information in basic neuroscience research as well as neurological diseases. One caveat is that proteins measured in CSF may derive from both intrathecal synthesis and transudation from serum, and protein analysis of CSF can only determine the sum of these two components. To discriminate between protein transudation from the blood and intrathecally produced proteins in animal models as well as in humans, CSF protein profiling measurements using conventional protein analysis tools must include the calculation of the albumin CSF/serum quotient (Qalbumin), a marker of the integrity of the blood-brain interface (BBI), and the protein index (Qprotein/Qalbumin), an estimate of intrathecal protein synthesis. This protocol illustrates the entire procedure, from CSF and blood collection to quotients and indices calculations, for the quantitative measurement of intrathecal protein synthesis and BBI impairment in mouse models of neurological disorders.

Elevated spinal fluid protein levels can either be the result of diffusion of plasma protein across an altered blood-brain barrier or intrathecal synthesis. An optimized testing protocol is presented in this article that helps to discriminate both cases and provides quantitative measurements of intrathecally synthesized proteins.

Quantitative Messung von intrathecally Synthetisierten Proteinen bei Mäusen

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the ...

Murine Corneal Nerve Abrasion for the Induction of Neurotrophic Keratitis

To begin corneal abrasion, place an anesthetized mouse on a table. Apply a drop of artificial tear on the eye undergoing the surgery. Apply a drop of ocular gel on the contralateral eye.Next, position the mouse on its side on a heated plate. Gently use a cotton swab to absorb the artificial tear, and brush aside the mouse's eyelashes without making contact with the eye. Turn on the ocular burr, and carefully open the mouse's eyelid with two fingers.Simultaneously shield the vibrancy to prevent them from entangling in the burr. Locate the pupil or the eye center and gently apply the ocular burr to the eye's surface in circular motions until the epithelium is removed. Alternatively, perform about 20 circular movements on the cornea.Now apply a drop of fluorescent staining solution on the abraided eye. After 20 seconds, dab the eye with a tissue to absorb the solution. Then rinse it with a drop of artificial tear.Finally, absorb the artificial tear with a tissue, and illuminate the eye using a blue cobalt lamp. Prior to the surgery, the basal epithelium was intact and the nerve fibers in the sub basal plexus formed a vortex. The burr tip removed the outer corneal layer, leaving the stroma and endothelium intact with a visible gap at the basal epithelium and sub basal plexus.Regeneration of the epithelium occurred over a week post-surgery. However, the vortex remained absent from the corneal center.

Muriner Hornhautnervenabrieb zur Induktion der neurotrophen Keratitis

Soziales Stressparadigma bei Jugendlichen bei C57BL/6-Mäusen für die Verhaltensforschung

Social Defeat Stress Model for Adolescent C57BL&#47;6 Male and Female Mice

Social adversity in adolescence is prevalent and can negatively impact mental health trajectories. Modeling social stress in adolescent male and female rodents is needed to understand its effects on ongoing brain development and behavioral outcomes. The chronic social defeat stress paradigm (CSDS) has been widely used to model social stress in adult C57BL/6 male mice by leveraging on the aggressive behavior displayed by an adult male rodent to an intruder invading its territory. An advantage of this paradigm is that it allows to categorize defeated mice into resilient and susceptible groups based on their individual differences in social behavior 24 h after the last defeat session. Implementing this model in adolescent C57BL/6 mice has been challenging because adult or adolescent mice do not typically attack early adolescent male or female mice and because adolescence is a short period of life, encompassing discreet temporal windows of vulnerability. This limitation was overcome by adapting an accelerated version of the CSDS to be used for adolescent male and female mice. This 4-day stress paradigm with 2 physical attack sessions per day uses a C57BL/6 male adult to prime the CD-1 mouse for aggressiveness such that it readily attacks the male or female adolescent mouse. This model was termed accelerated social defeat stress (AcSD) for adolescent mice. Adolescent exposure to AcSD induces social avoidance 24 h later in both males and females, but only in a subset of defeated mice. This vulnerability occurs despite the number of attacks being consistent across sessions between resilient and susceptible groups. The AcSD model is short enough to allow exposure during discrete periods within adolescence, allows the segregation of mice according to the presence or absence of social avoidance behavior, and is the first model available to study social defeat stress in adolescent C57BL/6 female mice.

Autor im Rampenlicht: Verständnis der Auswirkungen sozialer Widrigkeiten bei Jugendlichen auf die Neuroentwicklung bei Mäusen

We developed an accelerated social defeat stress model for adolescent C57BL/6 mice, which works in both males and females and allows exposure during discrete adolescent periods. Exposure to this model induces social avoidance, but only in a subset of defeated male and female mice.

Soziales Defeat Stress-Modell für jugendliche C57BL/6 männliche und weibliche Mäuse

Social adversity in adolescence is prevalent and can negatively impact mental health trajectories. Modeling social stress in adolescent male and female ...