O.A.-W. is supported by an NIH K08 Clinical Investigator Award (1K08CA160647-01), a U.S. Department of Defense Postdoctoral Fellow Award in Bone Marrow Failure Research (W81XWH-12-1-0041), the Josie Roberston Investigator Program, and a Damon Runyon Clinical Investigator Award with Support from the Evan&#8217;s Foundation.

Alle in diesem Protokoll beschriebenen Tier Verfahren wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Labortieren durchgeführt und wurden von der Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUCs) am Memorial Sloan-Kettering Cancer Center genehmigt. 1. Aspiration von Knochenmark (BM) Zellen aus dem Femur <ol><li> Anesthetize die Maus, die Oberschenkelknochenmarkpunktion mit Isofluran (1-4%) mit einer Genauigkeit Verdampfer verabreicht unterziehen wird. Narkosetiefe sollte alle 5-10 min durch die Beobachtung, dass es keine Veränderung der Atemfrequenz mit chirurgischen Manipulation und / oder Ohr, Zehen und Schwanz Prise verbunden überwacht werden während des gesamten Verfahrens. Anästhesie mit Isofluran induziert und auch während des gesamten Verfahrens mit Isofluran aufrechterhalten. Ein Bezugs vorprozessualer Dosis von Buprenorphin in einer Dosis von 0,05-0,1 mg / kg subkutan alle 6-12 Stunden können verwendet werden, um Schmerzen, die mit dem Verfahren als adj zugeordnet verhindernUNCT zu der Carprofen. </li><li> Anwenden Augensalbe für die Augen der Maus nach der Induktion der Anästhesie von Hornhaut Trocknen zu verhindern. </li><li> Das Fell wird vorsichtig von einem Hautbereich etwa 150% größer als die Fläche des beabsichtigten Aspiration Seite abgeschnitten. Lose Fell mit einem feuchten Gaze entfernt. Bitte halten Sie die Maus auf einem umlauf warmem Wasser Pad oder andere sichere thermostatisch gesteuerte Oberfläche zu Unterkühlung während des Verfahrens zu verhindern. </li><li> Desinfizieren Sie die gesamte Bein mit der Oberschenkelknochen, die Streben mit drei Sätzen von Wechsel Peelings (abwechselnd entweder mit einem PVP-Jod (Betadine) oder Chlorhexidin (Nolvasan) Peeling und 70% igem Alkohol oder 70% Ethanol getränkten Gaze Schwämme) unterzogen werden. </li><li> Befeuchten Sie ein 0,5 ml Tuberkulin-Spritze (Volumen: 0,5 cm ³; Weite: 27,5 G) mit steriler phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS), bevor Absaugen des BM. Füllen Sie die Spritze mit 200-500 ul PBS und sofort vertreiben die PBS. Wiederholen Sie diesen Vorgang 2-3 times. </li><li> Halten Sie das Schienbein gebogen vom Oberschenkelknochen durch Drücken der Tibia entweder mit dem Ringfinger oder dem fünften Finger. Zu bestätigen, dass eine geeignete Anästhesieebene erreicht ist. Die Spritze wird mit dem Daumen und dem Zeigefinger gehalten wird. Dies ermöglicht die Kondylen ausgesetzt sein und erleichtert das Einführen der Nadel. </li><li> Nach Benetzung der Spritze und stechen Sie die Nadel durch die Patellasehne, sodass die Nadel sicher zwischen den beiden Kondylen des Oberschenkelknochens eingelegt. Durch Halten der Diaphyse der Nähe der Epiphyse des Femurs mit dem Daumen und dem Zeigefinger wird die Nadel in den Schaft des Oberschenkelknochens leicht eingeführt. </li><li> Schwenken der Nadel nach außen und oben, so daß sie parallel mit der Achse des Femurs ist. Diese Maßnahme erleichtert Abruf von Knochenmark Inhalte aus dem Femurschaft. </li><li> Drehen Sie die Nadel im Uhrzeigersinn und gegen den Uhrzeigersinn und schieben Sie sie langsam in die Oberschenkelmarkhöhle. Überprüfen Sie die korrekte Positionierung der Nadel durch leichtes Bewegen des syRinge seitlich. </li><li> Ziehen Sie die Nadel Kolben zurück, wodurch Unterdruck, während Sie die Nadel hin und her in der BM Höhle. Hinweis: Das Volumen des angesaugten BM ungefähr 5 &amp;mgr; l entspricht, die typischerweise 0,4-0,8 x 10 &amp;sup6; mononukleare Zellen sein. Erfolgreiche Aspiration wird visuell durch das Auftreten von Blut in der Spitze der Nadel in der Basis der Spritze bestätigt werden. Wenn kein Blut in der Spritze gesehen ist es wahrscheinlich, daß ein kleiner Knochen oder Gewebefragment in der Nadel stecken. Dies kann von der Nadel durch Bewegen des Kolbens nach oben und unten in PBS (dies ist ein Grund, warum der Spritze sollte mit PBS vor dem Absaugen des BM vorgefüllt werden) entfernt werden. Wenn das Gewebe nicht aus der Spritze verdrängt werden, verwenden Sie eine neue Nadel und Spritze (wieder nass die Spritze mit 200-500 ul PBS). </li><li> Sobald BM erfolgreich von der Oberschenkelknochen angesaugt, entfernen Sie die Nadel und Spritze aus dem Oberschenkelknochen und Maus. </li><li> Bewegen saugten BM zu einem Mikrozentrifugenröhrchen prmit 500 ul PBS efilled. Für die meisten Anwendungen, die BM-Zellen sollten dann auf Eis bis zur weiteren Verarbeitung, wenn möglich gehalten werden. </li><li> Nach Abschluss des Verfahrens, verwalten Analgetikum mit Carprofen 5 mg / kg subkutan. Entfernen Sie dann mit der Maus aus der Narkose und legen Sie auf einem Heizkissen, bis vollständig erholt. HINWEIS: Es sollte keine Komplikationen oder Stress erlebt nach der Aspiration Verfahren, wenn es richtig gemacht ist. </li><li> Vor der Rückkehr Mäuse mit dem Gehäuse-Bereich, sicherzustellen, dass sie in der Lage, ambulate und Nahrung und Wasser zu erreichen sind. Beachten Sie die Mäuse auf Anzeichen von Stress oder Infektionen nach dem Eingriff in der nächsten 24 Stunden. Symptome sind: konstant Blutungen, Anämie, Lethargie. Wenn eines dieser Zeichen sind nach dem Eingriff zu sehen ist, sollte das Tier (e) eingeschläfert werden. Hinweis: BM Aspiration / Probenahme kann wiederholt werden, aber der Vorgang wiederholen sollte auf der gegenüberliegenden Oberschenkelknochen wiederholt Trauma der gleichen Bein verhindern, durchgeführt werden. Es gibt wenig Informationen über die frequency dass BM Aspiration durchgeführt werden. Oberschenkelknochenmarkpunktion ist in der Regel nicht häufiger als alle 2 Wochen wiederholt. </li></ol> 2. Beurteilung der Zellgehalt in Aspirated BM Cells <ol><li> Pellet-Zellen aus BM Aspiration und in ein Mikrozentrifugenröhrchen durch Zentrifugation bei 300 g für 5 min abgerufen bei 4 ° C oder RT. </li><li> Saugt den Überstand und das Pellet in 500 &amp;mgr; l von roten Blutkörperchen ACK-Lysepuffer (&quot;Ammoniumchlorid-Kalium&quot; Lysepuffer). </li><li> Die Zellen in rot Zelllysepuffer Inkubation für 10 min und dann 1 ml PBS und Spin-Down der Mischung wieder bei 300 g für 5 min bei 4 ° C oder RT. Hinweis: Die roten Blutkörperchen lysiert Pellet besteht nun aus BM mononukleären Zellen. Diese können für FACS-Färbung, Zellzählung, Transplantation, Zytospin Analyse und / oder einer anderen Nutzung (wie BM-Zellen von Mäusen geerntet geopfert würde verwendet werden) resuspendiert werden. </li></ol>

<ol>
	<li>Sundberg, R., Hodgson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspiration+of+bone+marrow+in+laboratory+animals.">Aspiration of bone marrow in laboratory animals.</a> Blood. 4, 557-561 (1949).</li><li>Schmitz, M., Bourquin, J. -. P., Bornhauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+technique+for+intrafemoral+injection+and+bone+marrow+sampling+in+mouse+transplant+models.">Alternative technique for intrafemoral injection and bone marrow sampling in mouse transplant models.</a> Leukemia &amp; lymphoma. 52, 1806-1808 (2011).</li><li>Warner, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+evidence+for+cooperating+genetic+events+in+the+leukemic+transformation+of+normal+human+hematopoietic+cells.">Direct evidence for cooperating genetic events in the leukemic transformation of normal human hematopoietic cells.</a> Leukemia. 19, 1794-1805 (2005).</li><li>Chiu, P. P., Jiang, H., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukemia-initiating+cells+in+human+T-lymphoblastic+leukemia+exhibit+glucocorticoid+resistance.">Leukemia-initiating cells in human T-lymphoblastic leukemia exhibit glucocorticoid resistance.</a> Blood. 116, 5268-5279 (2010).</li><li>Guan, Y., Gerhard, B., Hogge, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection,+isolation,+and+stimulation+of+quiescent+primitive+leukemic+progenitor+cells+from+patients+with+acute+myeloid+leukemia+(AML).">Detection, isolation, and stimulation of quiescent primitive leukemic progenitor cells from patients with acute myeloid leukemia (AML).</a> Blood. 101, 3142-3149 (2003).</li><li>Nolta, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gold+standard+improves:+a+better+assay+for+HSCs.">The gold standard improves: a better assay for HSCs.</a> Blood. 106, 1141-1142 (2005).</li><li>Kiel, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLAM+family+receptors+distinguish+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+and+reveal+endothelial+niches+for+stem+cells.">SLAM family receptors distinguish hematopoietic stem and progenitor cells and reveal endothelial niches for stem cells.</a> Cell. 121, 1109-1121 (2005).</li><li>Purton, L., Scadden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limiting+factors+in+murine+hematopoietic+stem+cell+assays.">Limiting factors in murine hematopoietic stem cell assays.</a> Cell stem cell. 1, 263-270 (2007).</li><li>Dykstra, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+propagation+of+distinct+hematopoietic+differentiation+programs+in+vivo.">Long-term propagation of distinct hematopoietic differentiation programs in vivo.</a> Cell stem cell. 1, 218-229 (2007).</li><li>Jordan, C., Lemischka, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+and+systemic+analysis+of+long-term+hematopoiesis+in+the+mouse.">Clonal and systemic analysis of long-term hematopoiesis in the mouse.</a> Genes &amp; development. 4, 220-232 (1990).</li><li>Challen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dnmt3a+is+essential+for+hematopoietic+stem+cell+differentiation.">Dnmt3a is essential for hematopoietic stem cell differentiation.</a> Nature genetics. 44, 23-31 (2012).</li><li>Hess, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+based+on+CD133+and+high+aldehyde+dehydrogenase+activity+isolates+long-term+reconstituting+human+hematopoietic+stem+cells.">Selection based on CD133 and high aldehyde dehydrogenase activity isolates long-term reconstituting human hematopoietic stem cells.</a> Blood. 107, 2162-2169 (2006).</li><li>Mazurier, F., Doedens, M., Gan, O. I., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+myeloerythroid+repopulation+after+intrafemoral+transplantation+of+NOD-SCID+mice+reveals+a+new+class+of+human+stem+cells.">Rapid myeloerythroid repopulation after intrafemoral transplantation of NOD-SCID mice reveals a new class of human stem cells.</a> Nat Med. 9, 959-963 (2003).</li></ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Serien BM Anspruch ist ein Routineverfahren entscheidend für die klinische Untersuchung von hämatologischen Erkrankungen beim Menschen. Die Fähigkeit, einen analogen seriellen Abtastung BM in Mäusen für die Charakterisierung der zellulären Zusammensetzung und Bestandteile BM gesamten langwierigen Experimente ebenfalls sehr wertvoll. Dieses Verfahren ist nützlich für die Charakterisierung von HSPC, ohne Einbußen bei der Maus, sondern auch zum Nachweis der Anwesenheit von zusätzlichen Zelltypen im Knochenmark in...

All blood cells are derived from hematopoietic stem cells (HSCs). Procedures which allow access to the bone marrow (BM), the site of the vast majority of HSC&#8217;s in mice and men, without requiring sacrifice of animals, provide a resource to monitor the source of hematopoiesis serially. The overall goal of the procedure described here is to provide a detailed protocol for the sampling of BM cells from the femur of live mice which provides material representative of the cells which would be retrieved by conventional harvest of BM cells through sacrifice of the mice. The advantage of this procedure over conventional harvest of BM cells is that this procedure does not require the sacrifice of mice and therefore allows for longitudinal study of the bone marrow compartment of mice over time. 
Although this murine bone marrow aspiration procedure has been used in a number of studies and described previously (see Sundberg et al. for a historical review1), formal step-by-step procedures illustrating this technique have not been previously published. This protocol enables routine serial sampling of the BM for purposes such as assessing engraftment in the BM of cells exogenously introduced into the mouse (as would be done in xenograft studies for instance2,3), analysis of chimerism in the BM for comparison with that of the peripheral blood (where results are not necessarily congruent), monitoring the abundance of specific cell types normally enriched in the marrow such as hematopoietic stem and progenitor cells, and retrieval of BM cells for ex vivo culture and/or transplantation. In addition, evaluation of marrow contents may be very useful in murine models of hematological disease as aspiration is helpful in assessing hematological disease burden at time points when disease may not be evident in the peripheral blood3-5. Moreover, this technique may be used to evaluate response of hematologic disease in the marrow to drugs administered in therapeutic studies. Thus, the procedure described here is ideal for investigators wishing to obtain access to bone marrow hematopoietic cells from mice for cytological analysis, flow cytometric analysis, in vitro culturing, and/or in vivo transplantation studies without requiring sacrifice or harm to the mice. 
The protocol for sampling of BM described here is quite similar to the technique used for intra-femoral injection of material directly into the marrow cavity3,6. The key difference being that this protocol details the procedure for removal of cells from the marrow as opposed to instilling material directly into the marrow cavity space as is done with intrafemoral injection.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="963">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">PBS</td>
			<td style="width:171px;">PAA</td>
			<td style="width:117px;">H15-002</td>
			<td style="width:407px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td style="width:171px;">PAA</td>
			<td style="width:117px;">K41-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">ACK lysis buffer</td>
			<td style="width:171px;">Homemade</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td>in 1 L. Adjust pH 7.2 ~ 7.4 and filter sterile with 0.22 &#956;m vacuum filter.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">8.3 g Ammonium Chloride</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:117px;">A661-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">1 g Potassium Bicarbonate</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:117px;">P184-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">200 &#956;l 0.5M EDTA pH 8</td>
			<td style="width:171px;">Gibco</td>
			<td style="width:117px;">15575-038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:171px;">PAA</td>
			<td style="width:117px;">E15-842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">0.5ml Tuberculin cyringe 27G 1/2</td>
			<td style="width:171px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:117px;">305620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">Sterile cell strainer 70 &#956;m</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:117px;">22363548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:269px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:171px;">Attane</td>
			<td style="width:117px;">NDC:66794-014-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">Blunt-End Needle</td>
			<td style="width:171px;">Stemcell Technologies</td>
			<td>28110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">PrecisionGlide needle 23G</td>
			<td style="width:171px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:117px;">305193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">3ml syringe Luer-Lok Tip</td>
			<td style="width:171px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:117px;">309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:269px;">Non-Tissue Culture Treated Plate, 6 Well</td>
			<td style="width:171px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:117px;">351146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">12 x 75 mm 5 ml tubes&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:117px;">352054</td>
			<td>FACS staining</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:269px;">12 x 75 mm 5 ml tubes with cell-strainer cap</td>
			<td style="width:171px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:117px;">352235</td>
			<td>FACS staining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">NK1.1 APC-Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>108723</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">CD11b APC-Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">CD45R (B220) APC-Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103223</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">CD3 APC-Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td style="width:117px;">100222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">Ly-6G and Ly-6C (Gr-1) APC-Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td style="width:117px;">108423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">Ter119 APC-Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>116223</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">CD19 APC-Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>302217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">CD4 APC-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>317417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">CD117 (c-KIT) PE</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>105808</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">Ly-6A/E (Sca-1) PE-Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td style="width:117px;">122513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">CD34 APC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td style="width:117px;">128612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">CD16/32 e450</td>
			<td style="width:171px;">eBioscience</td>
			<td style="width:117px;">48-0161-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:269px;">DAPI (4&#8242;,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride)</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>32670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:269px;">MethoCult GF M3434</td>
			<td style="width:171px;">STEMCELLTECHNOLOGIES</td>
			<td style="width:117px;">3434</td>
			<td>For methocellulose culture</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:269px;">Carprofen</td>
			<td style="width:171px;">Crescent Chemical Company</td>
			<td>C11045850</td>
			<td>1 dose (5mg/kg)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">Flow Cytometer, LSRFortessa</td>
			<td style="width:171px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:117px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:269px;">Puralube Vet Ointment (Sterile Petrolatum Ophthalmic Ointment)</td>
			<td style="width:171px;">Dechra-US</td>
			<td style="width:117px;">17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

femoral bone marrow aspiration in live mice

Serial sampling of the cellular composition of bone marrow (BM) is a routine procedure critical to clinical hematology. This protocol describes a detailed step-by-step technical procedure for an analogous procedure in live mice which allows for serial characterization of cells present in the BM. This procedure facilitates studies aimed to detect the presence of exogenously administered cells within the BM of mice as would be done in xenograft studies for instance. Moreover, this procedure allows for the retrieval and characterization of cells enriched in the BM such as hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) without sacrifice of mice. Given that the cellular composition of peripheral blood is not necessarily reflective of proportions and types of stem and progenitor cells present in the marrow, procedures which provide access to this compartment without requiring termination of the mice are very helpful. The use of femoral bone marrow aspiration is illustrated here for cytological analysis of marrow cells, flow cytometric characterization of the hematopoietic stem/progenitor compartment, and culture of sorted HSPCs obtained by femoral BM aspiration compared with conventional marrow harvest.

Oberschenkel BM Aspiration von einer Live-C57/B6 Maus wurde genutzt, um BM mononuklearen Zellen, gefolgt von herkömmlichen BM Ernte der gleichen Maus nach der Opfer zu erhalten. BM mononukleären Zellen durch die beiden Verfahren erhalten wurden dann mit (1) zytologische Analyse der BM-Zellen untersucht, (2) Bestimmen der relativen Häufigkeit von hämatopoetischen Stammzellen / Vorläuferzellen (HSPCs) und (3) ex-vivo-Kultur von sortierten HSPCs. Im letzteren Experiment linien negativen Sca1 + c-Kit wurden + ...

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Femoral Bone Marrow Aspiration in Live Mice

This protocol describes a procedure for serial sampling of femoral bone marrow (BM) without requiring the sacrifice of mice. This procedure facilitates longitudinal studies of the BM composition of mice over time and provides serial access to cells within the BM for ex vivo and transplantation studies.

Oberschenkelknochenmark-Aspiration im Live-Mäuse

Serial sampling of the cellular composition of bone marrow (BM) is a routine procedure critical to clinical hematology. This protocol describes a detailed ...

femoral-bone-marrow-aspiration-in-live-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

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