We thank the Western University of Health Sciences for the Intramural Grant.

Das Protokoll weiter unten beschrieben wird, unter Anleitung und Genehmigung der Western University Animal Care und Verwenden Ausschuss ausgeführt. Alle Versuche werden unter Einhaltung aller einschlägigen Richtlinien, Vorschriften und Aufsichtsbehörden durchgeführt. 1. Zellkultur <ol><li> Herstellung von Komplettmedium <ol><li> Mit einer Klasse-II-biologischen Sicherheitsschrank, bereiten komplettes Medium durch aseptisches Zugabe von fötalem Rinderserum (FBS) und Penicillin-Streptomycin (P / S) in einen 500-ml-Flasche RPMI-Medium. Vorsichtig mischen durch Schwenken. Die Endkonzentration jedes Ergänzungsmittel ist 10% FBS und 1% P / S (v / v). Beispielsweise ergänzen 500 ml Medium mit 56 ml FBS und 6 ml P / S. </li><li> Platzieren Komplettmedium in einem Wasserbad bei 37 ° C. </li></ol></li><li> Auftauen und Propagierung von Zellen <ol><li> Abrufen PANC-1-GFP-Zellen aus flüssigem Stickstoff. Tauen Sie das Fläschchen durch vorsichtiges Schütteln in einem Wasserbad bei 37 ° C. Hinweis:Auftauen sollte schnell sein (ca. 2 - 3 min). </li><li> Aufkleber-T-75-Flaschen verwendet werden mit (a) Zell-Linie Name, (b) Passage-Nummer, (c) das Datum und (d) Forscher Initialen. </li><li> Wischen Sie das Fläschchen mit 70% Ethanol und Transfer Fläschchen zu einem Bio-Sicherheitsschrank. </li><li> Um die Zellen zu propagieren, fügen 9,0 ml vollständigem Medium in ein 15 ml konischen Röhrchen. Unter Verwendung einer 1,0 ml Pipette vorsichtig die Zellsuspension und suspendieren es in 9 ml Vollmedium. </li><li> Zentrifuge bei 125 × g für 8 min bei RT. Übertragen Sie die konische Fläschchen auf einem Bio-Sicherheitsschrank und den Überstand aspirieren, ohne das Pellet zu stören. </li><li> Hängen Sie das Pellet in 10 ml frischem Komplettmedium durch sanft die Suspension bis Pipettieren und ab. </li><li> Zähle die Zellen mit einem Hämozytometer und Platte sie in T-75 - Kolben mit einer Dichte von 2,1 x 10 6 Zellen / Kolben. Danach wird der Kolben in einen Inkubator bei 37 ° C und 5% CO 2. </li><li> Überwachen Sie die Zellen täglich von Auge und unter dem Mikroskop. Wenn Grippeid Erneuerung erforderlich ist, aseptisch aspirieren die vollständige Wachstumsmedium aus dem Kolben und entsorgen. In gleichem Volumen von frischem Vollmedium. </li></ol></li><li> Propagierung von Zellen <ol><li> Aseptisch entfernen Medium aus dem Kolben. 5 ml Dulbecco-Phosphatpuffer-Salzlösung (DPBS) Zellen zu spülen und zu verwerfen. </li><li> Lösen sich die Zellen aus dem Kolben durch Zugabe von 3 ml 0,25% Trypsin. Inkubieren Kolben bei 37 ° C und 5% CO 2 für 5 bis 10 min , enthaltend Trypsin. </li><li> Beobachten Zellen unter dem Mikroskop (10-facher Vergrößerung) und sicherzustellen, dass sie sind rund und verdrängt. </li><li> Neutralisieren Trypsin durch ein gleiches Volumen von komplettem Medium Zugabe und brechen Klumpen durch vorsichtiges Pipettieren nach oben und unten. </li><li> Zählen Sie die Zellen unter Verwendung eines Hämozytometers und übertragen die entsprechenden Zellsuspensionsvolumen an neue Kolben bei der Zelldichte in 1.2.7 erwähnt; fügen Sie genug frische Medien so das endgültige Volumen 10 ml pro Flasche ist. </li></ol></li><li> Handy SuspensIonen-Injektionspräparat Hinweis: Da die Basalmembranmatrix, hohe Konzentration, bei RT erstarrt, halten alle Materialien auf dem Eis. Legen Sie alle sterilen Pipettenspitzen und Fläschchen in den Gefrierschrank über Nacht, und auf Eis halten, während auf der Aufhängung arbeiten. <ol><li> Halten Sie eine Flasche von RPMI-Medium ohne Zusätze auf Eis. Auftauen Basalmembranmatrix, hohe Konzentration, durch Anweisungen folgenden Herstellers. Vorzugsweise aliquoten in kleinere Fläschchen , um mehrere Gefrier-Auftau - Zyklen 10 zu vermeiden. </li><li> Absaugen Medien aus allen Flaschen und spülen mit 5 ml DPBS. Wiederholen Sie alle Schritte auf dem letzten Abschnitt bis 1.3.4 zu treten. </li><li> Übertragen Inhalt in einen 15 ml konischen Röhrchen und zentrifugiert bei 125 g für 8 min bei RT. Übertragen konische Fläschchen auf die biologische Sicherheit Kabinett und erneut zu suspendieren Pellet mit 10 ml DPBS. </li><li> Pipette vorsichtig die Suspension des Pellets aufzubrechen nach oben und unten. Zählen von Zellen mit einer Zählkammer. </li><li> Zentrifuge wieder wie in s skizzierttep 1.4.3. Überstand absaugen und in Abhängigkeit von der Anzahl der Zellen, fügen geeignete Verdünnungsmittel , um 3 x 10 6 Zellen in einem Volumen von 50 &amp; mgr; l. 1 (v / v) Verhältnis: Das Verdünnungsmittel wird in einer 1 ein Gemisch von serumfreien Medien und hohe Konzentration Keller Matrix Membran sein. </li><li> Vortex die Suspension sanft und auf Eis halten zu allen Zeiten. Die Suspension ist jetzt bereit für die Injektion. </li></ol></li><li> chirurgische Implantation Hinweis: Stellen Sie sicher, dass alle chirurgischen Materialien und Instrumente sind steril. Üben Sie aseptische Techniken zu allen Zeiten. <ol><li> Legen Sie ein Heizkissen auf den Tisch und Deckel mit einem sterilen Tuch. Stellen Sie die Anästhesiegerät und sicherzustellen, alle Lieferungen in greifbarer Nähe sind. </li><li> Legen Sie die Schnauze des Tieres in die Narkosemaske und eingerichtet, um die Anästhesie bis 1 l / min Sauerstoff und 2,5% Isofluran. </li><li> Vorsichtig schrubben die Flanke des Tieres mit Jod und spülen mit 70% Ethanol. Dreimal wiederholen. </li><li> Bestätige dasTier wird durch Einklemmen der Hinterpfote vollständig betäubt. Das Tier ist völlig betäubten und bereit für die Operation, wenn keine Antwort beobachtet wird. Wenn jedoch das Tier zuckt zusammen, gewährleisten eine ausreichende Anästhesie im Verdampfer ist und lassen Sie das Tier mehr Zeit vollständig unter Narkose zu gehen. </li><li> Last etwa 200 &amp; mgr; l der Zellsuspension in ein 1,0 ml TB-Spritze mit einer 18 G-Nadel (vorher abgekühlt). Ersetzen Sie die Nadel mit einer 27 G-Nadel und zurück zum Eis bis zum Gebrauch. </li><li> Suchen Sie den allgemeinen Bereich der Milz (linken oberen Quadranten des Bauches) und mit einer Pinzette Drücken Sie die Haut an der Spitze dieser Region. Mit chirurgische Scheren einen Einschnitt machen von etwa 1,0 cm eine Tasche zu erstellen. In ähnlicher Weise eine Prise der glatten Muskulatur auf der Oberseite der Milz und durchgeschnitten, um die Bauchhöhle zu gelangen. </li><li> greifen Sie vorsichtig das Schwanzende der Milz und ziehen Sie sie aus dem Körper heraus. Die Bauchspeicheldrüse wird die Milz angebracht werden. Verbreiten Sie die Bauchspeicheldrüse ein nasses st miterile Q-Tip und den Schwanz des Pankreas finden. </li><li> die 50 &amp; mgr; l Injektion in den Schwanz des Pankreas liefern, lassen Sie die Nadel innerhalb 10 Sekunden und drehen sich langsam die Nadel aus der Bauchspeicheldrüse. Eine erfolgreiche Implantation wird aussehen wie eine oberflächliche Blase ohne Leckagen. </li><li> Rückkehr der Bauchspeicheldrüse und Milz in die Bauchhöhle. Zuerst die Muskeln umschließen und dann die Haut getrennt umschließen. Verwenden Sie einen 6-0 Naht oder Klammer den Schnitt zu schließen. Zur Vermeidung von Schmerzen im Tier, verabreichen Ketoprofen subkutan (SC) (5 mg / kg) über 24 Stunden. (- 0,1 mg / kg 0,05) alle 12 Stunden über einen 36 Stunden-Zeitraum Alternativ Buprenorphin sc verabreichen. </li><li> Gewinnen Sie das Tier aus der Narkose und wieder in seinem Käfig. Auch für Schmerzen zu überwachen. Chirurgie - Die Tiere müssen mit der Schmerzlinderung bei der (präemptive oder sogar vor) zur Verfügung gestellt werden. Zusätzliche Schmerzlinderung müssen Tiere zur Verfügung gestellt werden, die Schmerzen nach IACCUC-Protokoll auftreten oder wie sie die vorgeschriebene beidazu neigt, Tierarzt oder designee. </li></ol></li><li> In vivo Imaging Hinweis: Bildaufnahme wurde ein kommerzieller Bildsystem mit einer dunklen Kammer und den entsprechenden Filtern für GFP-Bildgebung ausgestattet unter Verwendung. Die Bildaufnahme wurde mit einer CCD-Kamera und ein optisches System durchgeführt, bestehend aus austauschbaren Anregungs- / Emissionslinsen (Anregung: 455 bis 495 nm; Emission: 513-557 nm). Hellfeldbilder wurden für jeden Zeitpunkt bei 1 x 1 Binning ohne Filter eingefangen. Die Anregung von GFP verwendet, um eine Xenon Multispektraldaten Lichtquelle. Die Tiere wurden unter Anästhesie während des gesamten Bilderzeugungsprozesses gehalten , indem die Anästhesiemaschine zu einem Gasverteiler Anästhesie in die dunkle Kammer des Abbildungssystems integriert verbindet. <ol><li> Anesthetize das Tier, wie in 1.5.2 beschrieben. Ein Narkosemaske ist im Inneren der kommerziellen dunklen Kammer des Bildgebungssystems, um das Tier unter Narkose während der Bildgebung zu haltenverarbeiten. </li><li> Stellen Sie die richtigen Anregungs- und Emissionsfilter auf. </li><li> Beginnen Sie, indem nur ein Anfangsbild mit weißem Licht zu erhalten. Halten Sie die gleiche Position des Tieres in der gesamten Imaging-Sitzung und wechseln Sie zu GFP Filter ein zweites Bild zu nehmen. </li><li> Die besten Ergebnisse erzielen beide Bilder überlagern. Analysieren Sie das Bild für fluoreszierende Fläche und Intensität. </li></ol></li></ol>

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	<li>Smyth, E., Cunningham, D., Kasper, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Harrison's Principles of Internal Medicine. , (2015).</li><li>Mahipal, A., Frakes, J., Hoffe, S., Kim, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+borderline+resectable+pancreatic+cancer.">Management of borderline resectable pancreatic cancer.</a> World J Gastrointest Oncol. 7, 241-249 (2015).</li><li>De La Cruz, M. S., Young, A. P., Ruffin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+management+of+pancreatic+cancer.">Diagnosis and management of pancreatic cancer.</a> Am Fam Physician. 89, 626-632 (2014).</li><li>Frese, K. K., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximizing+mouse+cancer+models.">Maximizing mouse cancer models.</a> Nat Rev Cancer. 7, 645-658 (2007).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+orthotopic+xenografts:+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts.">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nat Rev Cancer. 15, 451-452 (2015).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multiple+uses+of+fluorescent+proteins+to+visualize+cancer+in+vivo.">The multiple uses of fluorescent proteins to visualize cancer in vivo.</a> Nat Rev Cancer. 5, 796-806 (2005).</li><li>Jiang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+an+orthotopic+pancreatic+cancer+mouse+model:+cells+suspended+and+injected+in+Matrigel.">Establishment of an orthotopic pancreatic cancer mouse model: cells suspended and injected in Matrigel.</a> World J Gastroenterol. 20, 9476-9485 (2014).</li><li>Arranz, A., Ripoll, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+optical+imaging+for+pharmacological+studies.">Advances in optical imaging for pharmacological studies.</a> Front Pharmacol. 6, 189 (2015).</li><li>Metildi, C. A., Kaushal, S., Hoffman, R. M., Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+serial+selection+of+human+pancreatic+cancer+cells+in+orthotopic+mouse+models+produces+high+metastatic+variants+irrespective+of+Kras+status.">In vivo serial selection of human pancreatic cancer cells in orthotopic mouse models produces high metastatic variants irrespective of Kras status.</a> J Surg Res. 184, 290-298 (2013).</li><li>Kim, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+orthotopic+and+heterotopic+human+pancreatic+cancer+xenografts+in+immunodeficient+mice.">Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice.</a> Nat Protoc. 4, 1670-1680 (2009).</li><li>Katz, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+efficacy+of+adjuvant+cytosine-analogue+CS-682+in+a+fluorescent+orthotopic+model+of+human+pancreatic+cancer.">Survival efficacy of adjuvant cytosine-analogue CS-682 in a fluorescent orthotopic model of human pancreatic cancer.</a> Cancer Res. 64, 1828-1833 (2004).</li><li>Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+optical+imaging+of+primary+tumor+growth+and+multiple+metastatic+events+in+a+pancreatic+cancer+orthotopic+model.">Real-time optical imaging of primary tumor growth and multiple metastatic events in a pancreatic cancer orthotopic model.</a> Cancer Res. 62, 1534-1540 (2002).</li></ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Wir beschreiben ein orthotoper murinen Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs , die GFP zum Ausdruck bringt, so dass nicht-invasive Überwachung des Tumorwachstums unter Verwendung von ganzen Körper in vivo Fluoreszenz - Bildgebung (Abbildung 1). Diese Technik ermöglicht es, die Tumor - Entwicklung in Echtzeit (Abbildung 3) zu überwachen; es kann ein wichtiges Instrument für die Forscher, die therapeutische Wirksamkeit von neuen Wirkstoffen gegen Bauchspeicheldrüsenkrebs zu ...

Bauchspeicheldrüsenkrebs ist mit einer erhöhten Frequenz im Vergleich zu anderen Krebsarten diagnostiziert und ist das 4. häufigste Ursache der durch Krebs verursachten Todesfälle in den Vereinigten Staaten. Ab dem Zeitpunkt der Diagnose, über 90% der Patienten sterben innerhalb von fünf Jahren 1,2. Derzeit ist die chirurgische Tumorentfernung die einzige Heilung für Bauchspeicheldrüsenkrebs, aber weniger als 20% der Patienten sind berechtigt , Chirurgie vor allem , weil zum Zeitpunkt der Diagnose zu unterziehen , die Krankheit in einem fortgeschrittenen Stadium und hat 3,4 metastasiert. Der Mangel an spezifischen Symptome macht Bauchspeicheldrüsenkrebs eine stille Krankheit; einige der Symptome sind Bauchschmerzen, Rückenschmerzen, Appetitlosigkeit, Gelbsucht und Übelkeit; die als gemeinsame Verdauungskrankheiten werden kann 4 leicht zu interpretieren. Aus diesem Grund ist es wichtig, neue pharmakologische Werkzeuge zur Entwicklung in der Diagnose und Behandlung von Bauchspeicheldrüsenkrebs zu unterstützen. Die Verwendung von Tiermodellen ermöglicht es uns, die Biologie der Pancré zu verstehenatic Krebs und bietet einen Einblick in dieses Wissen auf den Menschen anzuwenden. Xenograft orthotoper Modelle von Bauchspeicheldrüsenkrebs sind realistisch, da Tumoren im Ursprungsorgan 5 wachsen. Im Gegensatz zu heterotoper Modelle, in denen Zelllinien oder Tumorfragmente subkutan implantiert werden, ermöglicht orthotoper Modellierung für die Erholung der Tumor - Mikroumgebung und ahmt die Wechselwirkung von Tumorzellen mit ihrer Umgebung 6. Das Xenograftmodell hier beschrieben leitet Tumoren aus der menschlichen Pankreas-Krebszelllinie PANC-1-GFP, die gentechnisch verändert ist das grün fluoreszierende Protein (GFP) zum Ausdruck bringen. GFP Detektion ermöglicht für eine nicht-invasive Abbildung und Überwachung von Tumorwachstum und Metastasierung 7. Tumorentwicklung erfolgt schnell, spontan und sehr ähnlich , dass von primären Tumoren des menschlichen Patienten mit Bauchspeicheldrüsenkrebs 8. Orthotope Modelle bieten eine genauere Vorhersage der Arzneimittelwirksamkeit in Reaktion auf therapeutische Mittel, währendNachahmen der Tumor-Mikroumgebung. Wie oben erwähnt, ermöglicht dieses Tiermodell Fluoreszenz Nachweis von Tumorwachstum und Metastasierung in Echtzeit. Fluoreszenznachweis ermöglicht eine direkte / Live-Bildgebung zu Lumineszenz verglichen. Mit Fluoreszenz ist das emittierte Licht das Ergebnis einer Anregung durch ein anderes Licht einer kürzeren Wellenlänge; wohingegen in Lumineszenz, ist das emittierte Licht das Ergebnis einer chemischen Reaktion und nicht starke Emission 9 aufweisen. Weiterhin ist ganzen Körper in vivo Fluoreszenzabbildung für das Tier nicht nachteilig und ermöglicht es den Forschern Tumorwachstum über die Zeit in Reaktion auf therapeutische Behandlungen zu überwachen.

<table><tbody><tr><td>RPMI media 1640</td><td>Caisson Labs</td><td>RPL03-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum&amp;nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10437-077</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin Streptomycin&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Thermo Ficher Sci</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel HC basement membrane, high concentration</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr><tr><td>SutureVet PGA 6-0 PGA</td><td>Henry Schein</td><td>39010</td><td></td></tr><tr><td>Alcare or Foamed Antiseptic Handrub</td><td>Steris</td><td>639680</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dubelcco&#039;s Phosphate-Buffered saline)&amp;nbsp;</td><td>Thermo Ficher Sci</td><td>21300025</td><td></td></tr><tr><td>TB Syringe 27 G 1/2</td><td>Becton Dickinson</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Blutler Schein</td><td>50562</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors, 5.5&quot; straight mayo&amp;nbsp;</td><td>Henry Schein</td><td>22-1600</td><td></td></tr><tr><td>PANC-1 GFP cell line&amp;nbsp;</td><td>Anticancer, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Small Animal Imaging System: iBox Scientia</td><td>UVP, LLC. Upland, CA.</td><td></td><td>Small Animal Imaging System to observe the fluorescent tumor in live animals</td></tr></tbody></table>

fluorescent orthotopic mouse model of pancreatic cancer

Bauchspeicheldrüsenkrebs bleibt eine der Krebsarten, für die das Überleben verbessert hat sich nicht wesentlich in den letzten Jahrzehnten. Nur 7% der diagnostizierten Patienten werden länger als fünf Jahre überleben. Um die Mikroumgebung von Tumoren der Bauchspeicheldrüse zu verstehen und nachzuahmen, verwendeten wir einen murinen orthotopen Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs, die in Echtzeit nicht-invasive Bildgebung von Tumorprogression ermöglicht. Bauchspeicheldrüsenkrebszellen exprimieren , grün fluoreszierendes Protein (GFP PANC-1) wurden in Basalmembran - Matrix, hoher Konzentration, ausgesetzt (zB Matrigel HC) mit serumfreiem Medium und dann in den Schwanz der Bauchspeicheldrüse durch Laparotomie injiziert. Die Zellsuspension in der hohen Konzentration Basalmembran-Matrix wird zu einer gelartigen Substanz, sobald es Raumtemperatur erreicht; daher geliert es, wenn es in Kontakt mit der Bauchspeicheldrüse kommt, um eine Dichtung an der Injektionsstelle zu schaffen und eine beliebige Zelle Auslaufen zu verhindern. Tumorwachstum und Metastasierung in andere Organe werden in lebenden wachtenTiere durch Fluoreszenz unter Verwendung. Es ist wichtig, die geeigneten Filter für die Anregung und Emission von GFP zu verwenden. Die Schritte für die orthotope Implantation sind in diesem Artikel beschrieben so Forscher leicht, das Verfahren in nackten Mäusen replizieren können. Die wesentlichen Schritte dieses Protokolls sind Herstellung der Zellsuspension, chirurgische Implantation, und der ganze Körper fluoreszierendes in vivo Bildgebung. Dieses orthotoper Modell ist entwickelt, um die Wirksamkeit neuer Therapeutika auf primären und metastatischen Tumoren zu untersuchen.

Dieses Verfahren beschreibt eine chirurgische orthotope Implantation von fluoreszierenden menschlichen Zellen Bauchspeicheldrüsenkrebs, bei der Herstellung der Zellsuspension zur Injektion, richtige Anästhesie für Nagetiere, Lieferung der Zellsuspension durch Laparotomie Fokussierung und die Verwendung von Fluoreszenz - in - vivo Kleintierbildgebung. Die Detektion eines grünen Fluoreszenzsignal (GFP - Signal) zwischen zwei und drei Wochen nach der Implantation, biet...

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Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluoreszierende orthotopen Mausmodell des Bauchspeicheldrüsenkrebs

A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

fluorescent-orthotopic-mouse-model-of-pancreatic-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

16.6K Aufrufe.  Western University of Health Sciences. A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here. 

Serie: Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less aggressive breast tumors, the 5-year survival rate of TNBC patients is 77% due to their characteristic drug-resistant phenotype and metastatic burden. Toward this end, murine models have been established aimed at identifying novel therapeutic strategies limiting TNBC tumor growth and metastatic spread. This work describes a practical guide for the TNBC orthotopic model where MDA-MB-231 breast cancer cells suspended in a basement membrane matrix are implanted in the fourth mammary fat pad, which closely mimics the cancer cell behavior in humans. Measurement of tumors by caliper, lung metastasis assessment via in vivo and ex vivo imaging, and molecular detection are discussed. This model provides an excellent platform to study therapeutic efficacy and is especially suitable for the study of the interaction between the primary tumor and distal metastatic sites.

This work presets an advanced protocol to accurately assess tumor loading by detection of green fluorescent protein and bioluminescence signals as well as the integration of quantitative molecular detection technique.

Studieren von dreifach negativem Brustkrebs mit orthotopischem Brustkrebsmodell

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Forschung

Krebsforschung

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the limitations of current treatments, as the majority of patients do not respond to immunotherapy. Development of accurate preclinical models to quickly identify novel and effective therapeutic combinations are critical to address this unmet clinical need. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDA) is a canonical example of an immune checkpoint blockade resistant tumor with only 2% of patients responding to immunotherapy. The genetically engineered KrasG12D+/-;Trp53R172H+/-;Pdx-1 Cre (KPC) mouse model of PDA recapitulates human disease and is a valuable tool for assessing therapies for immunotherapy resistant in the preclinical setting, but time to tumor onset is highly variable. Surgical orthotopic tumor implantation models of PDA maintain the immunobiological hallmarks of the KPC tissue-specific tumor microenvironment (TME) but require a time-intensive procedure and introduce aberrant inflammation. Here, we use an ultrasound-guided orthotopic tumor implantation model (UG-OTIM) to non-invasively inject KPC-derived PDA cell lines directly into the mouse pancreas. UG-OTIM tumors grow in the endogenous tissue site, faithfully recapitulate histological features of the PDA TME, and reach enrollment-sized tumors for preclinical studies by four weeks after injection with minimal seeding on the peritoneal wall. The UG-OTIM system described here is a rapid and reproducible tumor model that may allow for high throughput analysis of novel therapeutic combinations in the murine PDA TME.

We describe a protocol for the ultrasound guided implantation of murine-derived pancreatic ductal adenocarcinoma cell lines directly into the native tumor site. This approach resulted in pancreatic tumors detectable by ultrasound scanning within 2-4 weeks of injection, and significantly reduced the proportion tumor cell seeding on the peritoneal wall as compared to surgical orthotopic implantation.

Ultraschallgeführte orthotopische Implantation von murine Pankreas-Ductalsocarcinom

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer (PC). To address this deficiency, we describe a mouse model involving orthotopic implantation of PC followed by distal pancreatectomy and splenectomy. The model has been demonstrated to be safe and suitably flexible for the study of various therapeutic approaches in adjuvant and neo adjuvant settings.
In this model, a pancreatic tumor is first generated by implanting a mixture of human pancreatic cancer cells (luciferase-tagged AsPC-1) and human cancer associated pancreatic stellate cells into the distal pancreas of Balb/c athymic nude mice. After three weeks, the cancer is resected by re-laparotomy, distal pancreatectomy and splenectomy. In this model, bioluminescence imaging can be used to follow the progress of cancer development and effects of resection/treatments. Following resection, adjuvant therapy can be given. Alternatively, neoadjuvant treatment can be given prior to resection.
Representative data from 45 mice are presented. All mice underwent successful distal pancreatectomy/splenectomy with no issues of hemostasis. A macroscopic proximal pancreatic margin greater than 5 mm was achieved in 43 (96%) mice. The technical success rate of pancreatic resection was 100%, with 0% early mortality and morbidity. None of the animals died during the week after resection.
In summary, we describe a robust and reproducible technique for a surgical resection model of pancreatic cancer in mice which mimics the clinical scenario. The model may be useful for the testing of both adjuvant and neoadjuvant treatments.

In the clinical context, patients with localized pancreatic cancer will undergo pancreatectomy followed by adjuvant treatment. This protocol reported here aims to establish a safe and effective method of modelling this clinical scenario in nude mice, through orthotopic implantation of pancreatic cancer followed by distal pancreatectomy and splenectomy.

Ein orthotopisches Resektions-Mausmodell für Bauchspeicheldrüsenkrebs

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%. New therapeutic options are critically needed and depend on improved understanding of pancreatic cancer biology. To better understand the interaction of cancer cells with the pancreatic microenvironment, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression. Luciferase-tagged pancreatic cancer cells are resuspended in Matrigel and delivered into the pancreatic tail during laparotomy. Matrigel solidifies at body temperature to prevent leakage of cancer cells during injection. Primary tumor growth and metastasis to distant organs are monitored following injection of the luciferase substrate luciferin, using in vivo imaging of bioluminescence emission from the cancer cells. In vivo imaging also may be used to track primary tumor recurrence after resection. This orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and may be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Improved understanding of pancreatic cancer biology is critically needed to enable the development of better therapeutic options to treat pancreatic cancer. To address this need, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression using in vivo bioluminescence imaging.

Bioluminescent orthotopen Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

Medizin

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts to Model Pancreatic Cancer

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, immune cells, vessels, nerves, and extracellular matrix components. Over the years, different mouse models of PDAC have been developed to address the challenges posed by its progression, metastatic potential, and phenotypic heterogeneity. Immunocompetent mouse orthotopic allografts of PDAC have shown good promise owing to their fast and reproducible tumor progression in comparison to genetically engineered mouse models. Moreover, combined with their ability to mimic the biological features observed in autochthonous PDAC, cell line-based orthotopic allograft mouse models enable large-scale in vivo experiments. Thus, these models are widely used in preclinical studies for rapid genotype-phenotype and drug-response analyses. The aim of this protocol is to provide a reproducible and robust approach to successfully inject primary mouse PDAC cell cultures into the pancreas of syngeneic recipient mice. In addition to the technical details, important information is given that must be considered before performing these experiments.

Syngeneic mouse orthotopic allografts of pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) recapitulate the biology, phenotypes, and therapeutic responses of disease subtypes. Owing to their fast, reproducible tumor progression, they are widely used in preclinical studies. Here, we show common practices to generate these models, injecting syngeneic murine PDAC cultures into the pancreas.

Syngene orthotope Allotransplantate der Maus zur Modellierung von Bauchspeicheldrüsenkrebs

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, ...

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe respiratory motion artifact in the abdominal area. Orthotopic tumor models offer advantages over subcutaneous ones, because those can reflect the primary tumor microenvironment affecting blood supply, neovascularization, and tumor cell invasion. We have recently established a protocol of DCE-MRI of orthotopic pancreatic tumor xenografts in mouse models by securing tumors with an orthogonally bent plastic board to prevent motion transfer from the chest region during imaging. The pressure by this board was localized on the abdominal area, and has not resulted in respiratory difficulty of the animals. This article demonstrates the detailed procedure of orthotopic pancreatic tumor modeling using small animals and DCE-MRI of the tumor xenografts. Quantification method of pharmacokinetic parameters in DCE-MRI is also introduced. The procedure described in this article will assist investigators to apply DCE-MRI for orthotopic gastrointestinal cancer mouse models.

The goal of this protocol is to apply dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) for orthotopic pancreatic tumor xenografts in mice. DCE-MRI is a non-invasive method to analyze microvasculature in a target tissue, and useful to assess vascular response in a tumor following a novel therapy.

Dynamic Contrast Verbesserte Spintomographie von einem orthotopen Mausmodell Bauchspeicheldrüsenkrebs

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe ...

<meta charset="utf8"></head><body>Adoptive Therapie mit tumorinfiltrierenden Lymphozyten in Bauchspeicheldrüsenkrebsmodellen

Flow Cytometry-Based Isolation and Therapeutic Evaluation of Tumor-Infiltrating Lymphocytes in a Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pancreatic cancer is an aggressive malignancy with a dismal prognosis and limited therapeutic options. Adoptive cell therapy, which involves isolating and activating a patient&#39;s own immune cells, such as tumor-infiltrating lymphocytes (TILs), before re-infusing them, represents a promising experimental approach. However, techniques for adoptive cell transfer in preclinical pancreatic cancer models are not well established. Here, we describe a detailed protocol for adoptive cell therapy using TILs from a syngeneic pancreatic cancer mouse model. The procedure involves implanting live or irradiated mouse pancreatic cancer cells in fluorescence-labeled reporter mice to initiate immune cell influx, then isolating lymphocytes from primary tumors via flow cytometry sorting and/or activating and expanding tumor-reactive T cells ex vivo, and adoptively transferring these activated T cells intraperitoneally into tumor-bearing mice, followed by interleukin-2 administration.&#160;Bioluminescent tumor imaging allows for longitudinal monitoring of orthotopic tumor growth and response to therapy, especially evaluating the tumor-specific cytotoxic effects. This approach recapitulates the logistics involved in developing adoptive cell transfer therapies for pancreatic cancer patients. The results demonstrate enhanced antitumor efficacy of adoptively transferred tumor-reactive T cells compared to irrelevant lymphocyte controls. This versatile methodology enables the in vivo study of adoptive immunotherapy in pancreatic cancer as well as the optimization of cell processing parameters and combination treatment regimens.

<meta charset="utf8"></head><body>Durchflusszytometrie-basierte Isolierung und therapeutische Bewertung von tumorinfiltrierenden Lymphozyten in einem Mausmodell für Bauchspeicheldrüsenkrebs

We describe a method to utilize tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) from mice through flow cytometry for adoptive cell transfer. This protocol aims to verify the specific cytotoxicity of TILs against tumors in a syngeneic pancreatic cancer mouse model, providing insights into the development of adoptive cell therapies for pancreatic cancer.

Durchflusszytometrie-basierte Isolierung und therapeutische Bewertung von tumorinfiltrierenden Lymphozyten in einem Mausmodell für Bauchspeicheldrüsenkrebs

Pancreatic cancer is an aggressive malignancy with a dismal prognosis and limited therapeutic options. Adoptive cell therapy, which involves isolating and ...

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging study, with an abdominal imaging window, enabled visualization of the cellular dynamics in abdominal organs in vivo. However, due to the soft sheet-like architecture of the mouse pancreas that can be easily influenced by physiologic movement (e.g., peristalsis and respiration), it was difficult to perform stabilized longitudinal in vivo imaging over several weeks at the cellular level to identify, track, and quantify islets or cancer cells in the mouse pancreas. Herein, we describe a method for implanting a novel supporting base, an integrated pancreatic intravital imaging window, that can spatially separate the pancreas from the bowel for longitudinal time-lapse intravital imaging of the pancreas microstructure. Longitudinal in vivo imaging with the imaging window enables stable visualization, allowing for the tracking of islets over a period of 3 weeks and high-resolution three-dimensional imaging of the microstructure, as evidenced here in an orthotopic pancreatic cancer model. With our method, further intravital imaging studies can elucidate the pathophysiology of various diseases involving the pancreas at the cellular level.

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

In vivo high-resolution imaging of the pancreas was facilitated with the pancreatic intravital imaging window.

Stabilisierte longitudinale In Vivo Visualisierung der Bauchspeicheldrüse auf zellulärer Ebene in einem Murinenmodell mit einem Pankreas-Intravital-Bildgebungsfenster

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging ...

Fluoreszierende orthotopen Mausmodell des Bauchspeicheldrüsenkrebs

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Studieren von dreifach negativem Brustkrebs mit orthotopischem Brustkrebsmodell

Ultraschallgeführte orthotopische Implantation von murine Pankreas-Ductalsocarcinom

Ein orthotopisches Resektions-Mausmodell für Bauchspeicheldrüsenkrebs

Bioluminescent orthotopen Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs Progression

Syngene orthotope Allotransplantate der Maus zur Modellierung von Bauchspeicheldrüsenkrebs

Dynamic Contrast Verbesserte Spintomographie von einem orthotopen Mausmodell Bauchspeicheldrüsenkrebs

Durchflusszytometrie-basierte Isolierung und therapeutische Bewertung von tumorinfiltrierenden Lymphozyten in einem Mausmodell für Bauchspeicheldrüsenkrebs

Durchflusszytometrie-basierte Isolierung und therapeutische Bewertung von tumorinfiltrierenden Lymphozyten in einem Mausmodell für Bauchspeicheldrüsenkrebs

Durchflusszytometrie-basierte Isolierung und therapeutische Bewertung von tumorinfiltrierenden Lymphozyten in einem Mausmodell für Bauchspeicheldrüsenkrebs

Stabilisierte longitudinale In Vivo Visualisierung der Bauchspeicheldrüse auf zellulärer Ebene in einem Murinenmodell mit einem Pankreas-Intravital-Bildgebungsfenster