Name: assessment of plasma coagulation on liver tissue in a large animal model in vivo
Uploaded: 2018-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo at JoVE.com

Die Autoren haben keine Bestätigungen.

Vorschriften unterliegen deutschem Recht für tierexperimentelle Studien sowie die Grundsätze der Laboratory Animal Care (National Institutes of Health Publikation Hg. 8, 2011) folgten. Offizielle Erlaubnis ist aus dem staatlichen Tierpflege-Büro (Forschungsdefizite Für Natur, Umwelt Und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen, Recklinghausen, Deutschland).
(1) Tiere
<ol><li>Verwenden Sie weibliche deutsche Landrasse-Schweine (von 25-30 kg) in offenen Käfigen untergebracht.</li>
	<li>5 Tiere pro Gruppe (Argon und Helium) zu verwenden.</li>
	<li>Lassen Sie die Tiere in die Umgebung für mindestens eine Woche vor den versuchen zu akklimatisieren. Schnelle Tiere 24 Stunden vor der Operation mit freiem Zugang zu Wasser.</li>
</ol>(2) Anästhesie
<ol><li>Premedicate die Tiere mit einer intramuskulären Injektion von Ketamin (15 mg/kg Körpergewicht [BW]), Xylazin (10 mg/kg kg) und Atropin (0,1 mg/kg kg) 10 min vor der Induktion der Anästhesie.</li>
	<li>Peripheren venöser Zugang wird durch Platzierung einer 22-Gauge-Kanüle in eine Vene Ohr aufgebaut.</li>
	<li>Induzieren Sie Vollnarkose durch intravenöse Injektion von Propofol 2 mg/kg Körpergewicht.</li>
	<li>Legen Sie das Tier in Rückenlage und führen Sie einen longitudinale Hautschnitt in der Vena Nut über eine Länge von 2 cm. Locate Vene durch die stumpfe Vorbereitung des subkutanen Gewebes. Stecken Sie die Kanüle, dann Seldingertechnik Draht.</li>
	<li>Kanüle zurückziehen und 14 Fr. Katheter über den Führungsdraht einfügen. Führungsdraht zurückziehen. Verbinden Sie Katheter für die Erweiterung zu und fixieren Sie den Katheter mit einem Gurt oder einer Naht.</li>
	<li>Ziehen Sie die Zunge heraus und setzen Sie gerade Laryngoskop. Verwenden Sie die Spitze des das Laryngoskop herunterziehen der Kehldeckel. Legen Sie das Rohr durch die Stimmbänder. Manschette unter Stimmritze und aufblasen.</li>
	<li>Lüften Sie mit 40 % Sauerstoff bei 20-26 Atemzüge/min und ein Tidalvolumen von 10 ml/kg um die Ende-Gezeiten teilweise Carbon Dioxide Spannung zwischen 36 und 42 mm Hg zu halten.</li>
	<li>Pflegen Sie Anästhesie mit Isofluran in einer Konzentration von 1-1,5 % und Fentanyl bei einer Konzentration von 3 bis 4 µg/kg/h.</li>
	<li>Lieferung von Ringer Laktat-Lösung mit einer ersten Rate von 4 mL/kg/h, und erhöhen Sie nach Laparotomie, ein konstanter Infusionsrate von 8 mL/kg/h.</li>
</ol>3. Operation und Plasma Koagulation
<ol><li>Legen Sie das Tier in Rückenlage auf eine standard-OP-Tisch.</li>
	<li>Haut durch die Anwendung einer handelsüblichen chirurgischen Desinfektionsmittels desinfizieren (2-Propanol 45 g/100 g, 1-Propanol 10 g / 100g, APEO-2-Ol 0,2 g/100 g) mit einem chirurgischen Tupfer für 3 Mal.</li>
	<li>Durchführen Sie eine breite Mittellinie Laparotomie aus dem Xiphoid Prozess, um das Schambein mit einem Skalpell und installieren Sie chirurgische Retraktoren zu.</li>
	<li>Das Plasma Koagulation Gerät einschalten, Argon oder Helium Gasflasche, abhängig von der verwendeten Trägergas zu öffnen. Gasstrom 3 L/min. Wählen Sie Koagulation Gerät Ausgangsleistung wie gewünscht anpassen. Hinweis: Beide Edelgase Argon oder Helium, Plasma Koagulation einsetzbar. Koagulationseffekte sind vergleichbar. Siehe Referenz7 für Details.</li>
	<li>Durchführen Sie Plasma-Koagulation auf der linke Lappen der Leber als zuvor beschriebenen7. Verwenden Sie eine Titan-Form (quadratische Blende 1 x 1 cm2) um den koagulationsbereich zu standardisieren. Gerinnen für 5 s mit einer Sonde Abstand von 1 cm. Die Coagulations mit verschiedenen Leistungsstufen können Seite an Seite mit einem kurzen Abstand zwischen den Coagulations von 5 mm (Abbildung 1) durchgeführt werden.</li>
	<li>Teilen Sie für die Ernte der Leber alle Bänder-Verbindungen für die Leber. Isolieren Sie und teilen Sie der hepatischen pedikels oberhalb der überlegenen duodenalen Biegung lange Teile der Pfortader und choledochus verlassen. Teilen Sie die filterarme Vene oberhalb und unterhalb der Leber und Abrufen der Orgel.</li>
	<li>Nach der Ernte der Leberzellkrebs wurden die Schweine durch intravenöse Gabe von 0,16 g/kg BW Pentobarbital eingeschläfert.</li>
	<li>Resezieren Sie für die Burst-Druck-Experimente die Hälfte der linken medialen Leber Lappen mit einer scharfen Schere. Plasma-Koagulation den Schnitt Oberfläche (100W Ausgangsleistung) oder Versiegeln der Schnittflächen mit Fibrin Dichtstoff (Abbildung 2).</li>
</ol>(4) Mikrozirkulation Messung
Hinweis: Laser-Doppler-Spektroskopie bestimmen Blutfluss im Gewebe durch die Messung des Doppler-Verschiebung verursacht durch die Bewegung der Erythrozyten. Das lasersignal korreliert mit der Anzahl der beweglichen Erythrozyten. Laser-Doppler-Spektroskopie ist in der klinischen Anwendung (z. B. Transplantationsmedizin) und wurde mehrere Male15validiert.
<ol><li>Schalten Sie den Laser-Doppler-Durchflussmesser und Spektralfotometer. Eine flache Sonde verwendet werden.</li>
	<li>Baseline-Messungen für Durchfluss und Geschwindigkeit zu nehmen. Speichern Sie oder notieren Sie die Werte.</li>
	<li>Führen Sie Koagulation, wie unter 3.5 beschrieben.</li>
	<li>Legen Sie die flache Sonde auf Koagulation Websites und Maßnahme fließen und Geschwindigkeit. Wieder, speichern Sie oder beachten Sie die Werte.</li>
	<li>Wiederholen Sie für alle Leistungsstufen des Coagulator Gerätes.</li>
</ol>5. die Temperaturmessung
<ol><li>Schalten Sie die Anlage auf (Thermografische Kamera, Notebook und Infrarot-Thermometer) und mindestens 1 h laufen bevor Sie Messungen durchführen lassen.</li>
	<li>Stellen Sie Fokus und Rahmen auf die Thermografische Kamera auf der Koagulation-Website. Infrarot-Sequenzen detektiert werden, mit der räumlichen Auflösung von 1024 x 768 Pixel mit einer Temperaturauflösung größer als 20 mK. Berücksichtigen, das der Region Koagulation und das umliegende Gewebe — Wärmeübertragung betroffen — liegt in der Mitte der Ansicht. Hinweis: Es sollten möglichst viele Pixel des Rahmens wie möglich für eine optimale räumliche Auflösung enthalten.</li>
	<li>Koagulationsprozess mit der Plasma-Coagulator auf der Oberfläche der Leber mit der Thermografie Kamera über einen Zeitraum von 2-min aufnehmen.</li>
	<li>Analysieren von Bildsequenzen mit der Thermografie-Analyse-Software: interessante Regionen zu definieren. Hinweis: Software berechnet den Kurs der entsprechenden mittleren Temperatur im Laufe der Zeit.</li>
</ol>(6) Koagulation Tiefenmessung
<ol><li>Ernten Sie die linken mediale Leber Lappen mit einer scharfen Schere.</li>
	<li>Verbrauchsteuern Sie die Gerinnung Websites mit 1 cm Dicke. Schneiden Sie in 3 mm Dicke längs-Segmente zur Weiterverarbeitung.</li>
	<li>Fix Gewebeproben bei 4 ° C über Nacht mit neutralen 10 % gepuffert Formalin. Paraffin 2 ° C über dem Schmelzpunkt erhitzen und Scheiben einbetten. Prozess über Nacht.</li>
	<li>Führen Sie Hämatoxylin/Eosin Färbung.<ol>
<li>Deparaffinize und Hydrat des Gewebes durch nachträglich Eintauchen in 2 x Xylol, 100 % igem Ethanol (EtOH), 95 % EtOH, 70 % EtOH, entionisiertem H2O 2 min. lang.</li>
		<li>Führen Sie die Gewebeprobe mit Meyers Hämatoxylin Lösung für 3 min zu Flecken.</li>
		<li>Jetzt im Leitungswasser für 5 min spülen.</li>
		<li>Führen Sie das Gewebe mit Eosin-Lösung für 3 min zu Flecken.</li>
		<li>In 2 X EtOH 95 % und dann Xylol 3 min spülen. Montieren Sie mit dem standard-Montage-Medium.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Schalten Sie das System ein (Mikroskop angeschlossenen Kamera, imaging-Software). Alle Abschnitte mit 40 X Vergrößerung anzeigen.</li>
	<li>Nehmen Sie ein Bild von einem Objekt Mikrometer bei einer Vergrößerung von 40 X. Drücken Sie Recalibrate im Fenster "Ziele". Wählen Sie Manuelle Kalibrierung. Zeichnen Sie eine Linie auf das Mikrometer Bild von 100 µm. Enter 0,1 mm in das Dialogfeld ein, und drücken Sie "OK".</li>
	<li>Länge in der Ansicht auswählen > Analyse Kontrollen > Fenster Anmerkungen und Messungen. Messen Sie von der Leber Oberfläche der Koagulation Rand mit der Maus. Exportieren Sie oder notieren Sie das Ergebnis. Wiederholen Sie die Messung an einem anderen Speicherort auf derselben Folie. Hinweis: Koagulation Tiefe kann leicht von den normalen Lebergewebe durch den scharfen Rand zwischen der normalen Hepatozyten Schnüre und die Zone der Nekrose mit geschrumpften Zytoplasma, pyknotischen Kernen und Blutung Zonen unterschieden werden.</li>
	<li>Berechnen Sie Mittelwert aus beiden Messungen.</li>
</ol>(7) Burst-Druckmessung
<ol><li>Schalten Sie das System ein (automatische Pumpen, Druck-Messgerät). Bereiten Sie die Leber Proben nach der Schritt 3.7. Hinweis: Verwenden Sie zwei parallele Pumpen über ein 3-Weg-Ventil verbunden. Der maximale Druck von 1.500 mm Hg kann nicht mit einer einzigen Pumpe abgerufen werden.</li>
	<li>Isolieren Sie gemeinsame leberarterie, Pfortader und Gallengang mit einer Schere in die haptische Knochenschrauben. Pfortader mit einer Overholt Zange Spannen und verbinden mit einer Naht Monofil 4-0. Klemmen Sie gemeinsame leberarterie eine Overholt-Zange und verbinden mit einer Naht Monofil 4-0.</li>
	<li>Ch-16 Katheter in den choledochus einfügen und verbinden mit einer 2: 0 Seide Naht. Schließen Sie den Katheter an die automatische Pumpen, installieren Sie 3-Wege-Hahn mit Druck-Messgerät (Abbildung 3).</li>
	<li>Füllen Sie die Spritze Perfusion mit Kochsalzlösung.</li>
	<li>Beginnen Sie automatische Pumpen mit einer Förderleistung von 99 mL/h.</li>
	<li>Überwachen Sie Leber geschliffenen Oberfläche und Druck Meter für Leckage und Datensatz Berstdruck. Hinweis: Für einfacher Erkennung von Leckagen kann patent blau Kochsalzlösung (2 mL patent blau + 18 mL Kochsalzlösung) hinzugefügt werden. Es ist einfacher, Berstdruck zu beobachten, durch die Zeit des Verlustes des Drucks auf das Druck-Messgerät zu bemerken.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Link, W. J., Incropera, F. P., Glover, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+plasma+scalpel:+comparison+of+tissue+damage+and+wound+healing+with+electrosurgical+and+steel+scalpels.">A plasma scalpel: comparison of tissue damage and wound healing with electrosurgical and steel scalpels.</a> ArchSurg. 111, 392-397 (1976).</li><li>Kwon, A. H., Inui, H., Kamiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+laparoscopic+haemostasis+using+an+argon+beam+coagulator+for+blunt+traumatic+splenic+injury.">Successful laparoscopic haemostasis using an argon beam coagulator for blunt traumatic splenic injury.</a> EurJSurg. 167, 316-318 (2001).</li><li>Frilling, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+a+new+carrier-bound+fibrin+sealant+versus+argon+beamer+as+haemostatic+agent+during+liver+resection:+a+randomised+prospective+trial.">Effectiveness of a new carrier-bound fibrin sealant versus argon beamer as haemostatic agent during liver resection: a randomised prospective trial.</a> Langenbecks ArchSurg. 390, 114-120 (2005).</li><li>Raiser, J., Zenker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Argon+plasma+coagulation+for+open+surgical+and+endoscopic+applications:+state+of+the+art.">Argon plasma coagulation for open surgical and endoscopic applications: state of the art.</a> J Phys Appl Phys. 39 (16), 3520-3523 (2006).</li><li>Farin, G., Grund, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technology+of+argon+plasma+coagulation+with+particular+regard+to+endoscopic+applications.">Technology of argon plasma coagulation with particular regard to endoscopic applications.</a> EndoscSurgAllied Technol. 2, 71-77 (1994).</li><li>Grund, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Argon+plasma+coagulation+(APC):+ballyhoo+or+breakthrough?.">Argon plasma coagulation (APC): ballyhoo or breakthrough?.</a> Endoscopy. 29, 196-198 (1997).</li><li>Glowka, T. R., Standop, J., Paschenda, P., Czaplik, M., Kalff, J. C., Tolba, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Argon+and+helium+plasma+coagulation+of+porcine+liver+tissue.">Argon and helium plasma coagulation of porcine liver tissue.</a> J Int Med Res. , (2017).</li><li>Dowling, R. D., Ochoa, J., Yousem, S. A., Peitzman, A., Udekwu, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Argon+beam+coagulation+is+superior+to+conventional+techniques+in+repair+of+experimental+splenic+injury.">Argon beam coagulation is superior to conventional techniques in repair of experimental splenic injury.</a> JTrauma. 31, 717-720 (1991).</li><li>Go, P. M., Goodman, G. R., Bruhn, E. W., Hunter, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+argon+beam+coagulator+provides+rapid+hemostasis+of+experimental+hepatic+and+splenic+hemorrhage+in+anticoagulated+dogs.">The argon beam coagulator provides rapid hemostasis of experimental hepatic and splenic hemorrhage in anticoagulated dogs.</a> JTrauma. 31, 1294-1300 (1991).</li><li>Brand, C. U., Blum, A., Schlegel, A., Farin, G., Garbe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+argon+plasma+coagulation+in+skin+surgery.">Application of argon plasma coagulation in skin surgery.</a> Dermatology. 197, 152-157 (1998).</li><li>Carus, T., Rackebrandt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collateral+tissue+damage+by+several+types+of+coagulation+(monopolar,+bipolar,+cold+plasma+and+ultrasonic)+in+a+minimally+invasive,+perfused+liver+model.">Collateral tissue damage by several types of coagulation (monopolar, bipolar, cold plasma and ultrasonic) in a minimally invasive, perfused liver model.</a> ISRNSurg. , 518924 (2011).</li><li>Bludau, M., Vallbohmer, D., Gutschow, C., Holscher, A. H., Schroder, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+measurement+of+gastric+mucosal+microcirculation+using+a+combined+laser+Doppler+flowmeter+and+spectrophotometer.">Quantitative measurement of gastric mucosal microcirculation using a combined laser Doppler flowmeter and spectrophotometer.</a> DisEsophagus. , (2008).</li><li>Beckert, S., Witte, M. B., Konigsrainer, A., Coerper, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+the+Micro-Lightguide+O2C+for+the+quantification+of+tissue+ischemia+in+diabetic+foot+ulcers.">The impact of the Micro-Lightguide O2C for the quantification of tissue ischemia in diabetic foot ulcers.</a> Diabetes Care. 27, 2863-2867 (2004).</li><li>Erdogan, D., de Graaf, W., van Gulik, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesive+strength+of+fibrinogen-coated+collagen+patch+or+liquid+fibrin+sealant+in+an+experimental+liver+resection+model+in+pigs.">Adhesive strength of fibrinogen-coated collagen patch or liquid fibrin sealant in an experimental liver resection model in pigs.</a> Eur Surg Res Eur Chir Forsch Rech Chir Eur. 41 (3), 298-302 (2008).</li><li>Knobloch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcirculation+of+the+sternum+following+harvesting+of+the+left+internal+mammary+artery.">Microcirculation of the sternum following harvesting of the left internal mammary artery.</a> ThoracCardiovascSurg. 51, 255-259 (2003).</li><li>Kanzler, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendation+for+severity+assessment+following+liver+resection+and+liver+transplantation+in+rats:+Part+I.">Recommendation for severity assessment following liver resection and liver transplantation in rats: Part I.</a> Lab Anim. 50 (6), 459-467 (2016).</li><li>Pehb&#246;ck, D., Dietrich, H., Klima, G., Paal, P., Lindner, K. H., Wenzel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthesia+in+swine+optimizing+a+laboratory+model+to+optimize+translational+research.">Anesthesia in swine optimizing a laboratory model to optimize translational research.</a> Anaesthesist. 64 (1), 65-70 (2015).</li><li>Nykonenko, A., V&#225;vra, P., Zon&#269;a, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomic+Peculiarities+of+Pig+and+Human+Liver.">Anatomic Peculiarities of Pig and Human Liver.</a> Exp Clin Transplant Off J Middle East Soc Organ Transplant. 15 (1), 21-26 (2017).</li><li>Fechner, G., von Pezold, J., Luzar, O., Hauser, S., Tolba, R. H., M&#252;ller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+spectrometry+(O2C+device)+of+intraoperative+microperfusion+predicts+organ+function+after+kidney+transplantation:+a+pilot+study.">Modified spectrometry (O2C device) of intraoperative microperfusion predicts organ function after kidney transplantation: a pilot study.</a> Transplant Proc. 41 (9), 3575-3579 (2009).</li><li>Patterson, E. J., Scudamore, C. H., Owen, D. A., Nagy, A. G., Buczkowski, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiofrequency+ablation+of+porcine+liver+in+vivo:+effects+of+blood+flow+and+treatment+time+on+lesion+size.">Radiofrequency ablation of porcine liver in vivo: effects of blood flow and treatment time on lesion size.</a> AnnSurg. 227, 559-565 (1998).</li></ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Nager-Modelle für die Leberchirurgie werden für eine lange Zeit16gebildet. Dennoch große Tiermodellen bieten gewisse Vorteile: keine mikrochirurgische Ausrüstung ist notwendig, da operative Standardausrüstung für Menschen angewendet werden kann, Operationstechniken vergleichbar mit klinischen Verwendung sind und klinische Standardauswertung Methoden können sein übertragen auf die Experimente. Beispielsweise können ohne die Notwendigkeit für spezielle Labor-Prüfverfahren (<strong class="...

Argon-Plasma-Koagulation (APC) ist ein weit verbreitetes Instrument im Bauchchirurgie seit mehr als drei Jahrzehnten1,2. Es ist ein Standardverfahren für die Erreichung der sekundären Hämostase nach großen Hepatektomie durch Versiegelung der Leberzellkrebs Oberfläche, um zu verhindern, dass später Blutungen3geschnitten. Plasma-Koagulation ist eine spezielle Form der Radiofrequenz elektrokauter, die die elektrische Energie über einen Bogen von ionisiertem Gas liefert. Bereitstellung von monopolaren elektrothermische Blutstillung, hat diese berührungslose Technik den Vorteil, die Elektrode an das Gewebe4halten zu verhindern. Der ionisierte Gas-Strahl richtet sich automatisch auf den Bereich des geringsten elektrischen Widerstands und wird abgewiesen, wenn Widerstand aufgrund von Austrocknung auf andere Bereiche, die noch nicht ausgetrocknet steigt. Dadurch entsteht eine einheitliche begrenzte Tiefe Koagulation5,6. Faktoren, die die Gerinnung Wirkung sind die Aktivierung Zeit, Einstellung der Leistung des Geräts Koagulation und der Abstand von der Sonde des Gewebes. Helium ist ein weiteres Trägergas, die für Plasma-Koagulation7verwendet werden können. Aktuelle klinische Studien konzentriert sich auf klinische Ergebnisse anstatt histologische und funktionelle Ergebnisse3,8,9, während experimentelle Studien konzentrierte sich auf in-vitro- Untersuchungen10 oder Experimente an isolierten PERFUNDIERTEN Organen11.
Das zugrunde liegende Protokoll ermöglicht die Studie über die Auswirkungen der Plasma-Koagulation in einem großen Tier-Modell in der Nähe der klinischen Anwendung unter Verwendung von menschlichen Standardausrüstung auf Schweine: Mikrozirkulation ist nicht-invasiv durch eine Laser-Doppler-Durchflussmesser bewertet und Spektralphotometer, die klinische Standardtool für diese Indikation12,13ist. Temperaturänderungen während Koagulation werden mit einem Infrarot-Thermometer und eine Thermografische Kamera überwacht. Die Tiefe der Koagulation wird auf histologischen Hämatoxylin/Eosin befleckt Abschnitte nach der Ernte von Gewebeproben gemessen. Für den Vergleich mit anderen Mitteln zur sekundären Hämostase werden platzen Druck Versuche durchgeführt. Im Gegensatz zu den zuvor beschriebenen Techniken14, diese werden durchgeführt auf explantierten Organe auszuschließende Blutdruck im Zusammenhang mit Effekten. Zusätzlich zu den beschriebenen Untersuchungen über die lokalen Auswirkungen der Plasma-Koagulation können standard Blutuntersuchungen auch im porcinen Modell durchgeführt werden.

<table><tbody><tr><td>Xylazine 20 mg/mL</td><td>Vetoquinol GmbH</td><td>Xylapan</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine 100 mg/mL</td><td>Ceva GmbH</td><td>Ceva Ketamine Injection</td><td></td></tr><tr><td>Atropine 100 mg / 10 mL</td><td>Dr. Franz K&amp;ouml;hler Chemie GmbH</td><td>Atropinsulfat K&amp;ouml;hler 100mg Amp.</td><td></td></tr><tr><td>Propofol</td><td>Fresenius Kabi GmbH</td><td>Propofol 1% MCT Fresenius</td><td></td></tr><tr><td>Fentanyl</td><td>KG Rotexmedica GmbH</td><td>Fentanyl 0,5mg Rotexmedica</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbot GmbH</td><td>Forene 100% (V/V) 250 mL</td><td></td></tr><tr><td>Ringer&#039;s lactate solution</td><td>Baxter Deutschland GmbH</td><td></td><td>sodium 131mmol/l, potassium 5 mmol/l, calcium 2 mmol/l, cloride 111 mmol/l, lactate 29 mmol/l</td></tr><tr><td>Surgical disinfactant</td><td>Sch&amp;uuml;lke &amp;amp; Mayr GmbH</td><td>Kodan Tinktur forte gef&amp;auml;rbt 1l 104804</td><td></td></tr><tr><td>Motorized microscope</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>Eclipse TE2000-E</td><td></td></tr><tr><td>Microscope camera</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>Digitalsight DS-Qi1Mc</td><td></td></tr><tr><td>Imaging software</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>NIS elements Vers. 4.40</td><td></td></tr><tr><td>Plasma coagulator</td><td>S&amp;ouml;ring GmbH</td><td>CPC-1000</td><td></td></tr><tr><td>Argon gas</td><td>Linde AG</td><td>Argon 4.8&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Helium gas</td><td>Linde AG</td><td>Helium 4.8</td><td></td></tr><tr><td>O2C</td><td>LEA Medizintechnik GmbH</td><td>O2C Version 1212</td><td>with LF-2 or LF-3 probe</td></tr><tr><td>Infrared thermometer</td><td>Voltcraft</td><td>VOLTCRAFT IR 260-8S</td><td></td></tr><tr><td>Thermographic camera</td><td>InfraTec GmbH</td><td>VarioCAM HD head 820</td><td></td></tr><tr><td>Thermographic analysis software</td><td>InfraTec GmbH</td><td>IRBIS 3</td><td></td></tr><tr><td>Mayer&#039;s Hematoxylin solution</td><td></td><td>Merck 1.09249</td><td></td></tr><tr><td>Eosin solution</td><td>VWR International GmbH</td><td>Merck 1.09844</td><td></td></tr><tr><td>Rollerpump Masterflex L/S easy Load</td><td>Cole-Parmer Instrument Company</td><td>model 7518-10</td><td></td></tr><tr><td>Perfusorpump</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>Perfusor secura FT</td><td></td></tr><tr><td>Digital pressure meter</td><td>Greisinger electronic</td><td>GMH 3161</td><td></td></tr><tr><td>Perfusorsyringe, 50 mL</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 8728810 F</td><td></td></tr><tr><td>Perfusor line, Type IV Standard, PVC Luer lock</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 8722960</td><td></td></tr><tr><td>3-Way stopcock, Dicofix C35C</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 16494 C</td><td></td></tr><tr><td>Silk 2-0. 3 metric</td><td>Resorba</td><td>REF H5F</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0 Sutupak</td><td>Ethicon</td><td>V1224H</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0.9 %</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

assessment of plasma coagulation on liver tissue in a large animal model in vivo

Plasma Koagulation als eine Form der elektrokauter wird in der Leber Chirurgie seit Jahrzehnten zum Versiegeln Sie der große Leber Schnittfläche nach großen Hepatektomie, Blutungen zu einem späteren Zeitpunkt zu verhindern. Die genauen Auswirkungen der Plasma Koagulation im Lebergewebe sind nur unzureichend untersucht. In unserem porcinen Modell können in der Nähe der klinischen Anwendung der koagulationseffekte untersucht werden. Eine kombinierte Laser Doppler Durchflussmesser und Spektralfotometer Dokumente Mikrozirkulation ändert während Koagulation in 8 mm Gewebe Tiefe nicht-invasiv, quantifizierbare Informationen über Blutstillung jenseits der subjektive klinische Eindruck. Die Temperatur am Standort der Koagulation wird mit einem Infrarot-Thermometer Prior und Post-Koagulation und eine Thermografische Kamera während Gerinnung beurteilt, eine Messung der Gastemperatur Strahl ist nicht möglich, da die Obergrenze der Geräte. Die Tiefe der Koagulation wird mikroskopisch auf Hämatoxylin/Eosin befleckt Abschnitte nach der Kalibrierung mit einem Objekt Mikrometer gemessen und gibt eine genaue Information über das macht Einstellung-Koagulation Tiefe-Verhältnis. Die Dichtwirkung wird auf die Gallengänge untersucht, da es nicht möglich für ein Plasma-Coagulator, größere Blutgefäße zu versiegeln. Burst Druck Experimente heraus auf explantierten Organe auszuschließen Blutdruck im Zusammenhang mit Effekten.

Mikrozirkulation: Das Diagnosegerät für die Blutstillung Plasma Koagulation nach Nutzung kann durch Veränderungen der Mikrozirkulation nachgewiesen werden. Kapillarblut Strömung (angezeigt als willkürliche Einheiten (AE)) nimmt von einem Ausgangswert von 142.7 ± 76,08 AU 57.78 ± 49.57 AU bei 25 W Gerät Ausgangsleistung, 48,5 ± 7.26 AU bei 50 W und 5.04 ± 1.31 AU bei 100 W (Abbildung 4).
<p class="jove_content" fo:keep-together.w...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo at JoVE.com

Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Plasma-Koagulation in Lebergewebe in Vivoexperimentell zu beurteilen. In einem porcinen Modell Mikrozirkulation wird mittels Laser Doppler untersucht, Koagulation Tiefe bemisst sich histologisch, Temperatur am Standort der Gerinnung durch Infrarot-Thermometer und Thermografische Kamera Kanal Dichtwirkung ist dokumentiert durch Berstdruck Experimente.

Bewertung der Plasma Koagulation am Lebergewebe in einem großen Tiermodell In Vivo

Plasma coagulation as a form of electrocautery is used in liver surgery for decades to seal the large liver cut surface after major hepatectomy to prevent ...

assessment-plasma-coagulation-on-liver-tissue-large-animal-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

8.8K Aufrufe.  University of Bonn. Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Plasma-Koagulation in Lebergewebe in Vivoexperimentell zu beurteilen. In einem porcinen Modell Mikrozirkulation wird mittels Laser Doppler untersucht, Koagulation Tiefe bemisst sich histologisch, Temperatur am Standort der Gerinnung durch Infrarot-Thermometer und Thermografische Kamera Kanal Dichtwirkung ist dokumentiert durch Berstdruck Experimente.

Serie: Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

Organ engineering is a novel strategy to generate liver organ substitutes that can potentially be used in transplantation. Recently, in vivo liver engineering, including in vivo organ decellularization followed by repopulation, has emerged as a promising approach over ex vivo liver engineering. However, postoperative survival was not achieved. The aim of this study is to develop a novel surgical technique of in vivo selective liver lobe perfusion in rats as a prerequisite for in vivo liver engineering. We generate a circuit bypass only through the left lateral lobe. Then, the left lateral lobe is perfused with heparinized saline. The experiment is performed with 4 groups (n = 3 rats per group) based on different perfusion times of 20 min, 2 h, 3 h, and 4 h. Survival, as well as the macroscopically visible change of color and the histologically determined absence of blood cells in the portal triad and the sinusoids, is taken as an indicator for a successful model establishment. After selective perfusion of the left lateral lobe, we observe that the left lateral lobe, indeed, turned from red to faint yellow. In a histological assessment, no blood cells are visible in the branch of the portal vein, the central vein, and the sinusoids. The left lateral lobe turns red after reopening the blocked vessels. 12/12 rats survived the procedure for more than one week. We are the first to report a surgical model for in vivo single liver lobe perfusion with a long survival period of more than one week. In contrast to the previously published report, the most important advantage of the technique presented here is that perfusion of 70% of the liver is maintained throughout the whole procedure. The establishment of this technique provides a foundation for in vivo partial liver engineering in rats, including decellularization and recellularization.

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

We establish a novel surgical technique for an in vivo single liver lobe perfusion model in rat as a prerequisite for further studying in vivo partial liver engineering in the future.

Eine neuartige Operationstechnik als Grundlage für In Vivo teilweise Leber Engineering in der Ratte

Organ engineering is a novel strategy to generate liver organ substitutes that can potentially be used in transplantation. Recently, in vivo liver ...

Forschung

Biotechnik

Uncontrolled Hemorrhagic Shock Modeled via Liver Laceration in Mice with Real Time Hemodynamic Monitoring

Uncontrolled hemorrhage is an important cause of preventable deaths among trauma patients. We have developed a murine model of uncontrolled hemorrhage via a liver laceration that results in consistent blood loss, hemodynamic alterations, and survival.
Mice undergo a standardized resection of the left-middle lobe of the liver. They are allowed to bleed without mechanical intervention. Hemostatic agents can be administered as pre-treatment or rescue therapy depending on the interest of the investigator. During the time of hemorrhage, real-time hemodynamic monitoring via a left femoral arterial line is performed. Mice are then sacrificed, blood loss is quantified, blood is collected for further analysis, and organs are harvested for analysis of injury. Experimental design is described to allow for simultaneous testing of multiple animals.
Liver hemorrhage as a model of uncontrolled hemorrhage exists in the literature, primarily in rat and porcine models. Some of these models utilize hemodynamic monitoring or quantify blood loss but lack consistency. The present model incorporates quantification of blood loss, real-time hemodynamic monitoring in a murine model that offers the advantage of using transgenic lines and a high-throughput mechanism to further investigate the pathophysiologic mechanisms in uncontrolled hemorrhage.

Uncontrolled hemorrhage, an important cause of mortality among trauma patients, can be modeled using a standard liver laceration in a murine model. This model results in consistent blood loss, survival, and allows for testing hemostatic agents. This article provides the step-by-step process to perform this valuable model.

Unkontrollierter Hämorrhagischer Schock modelliert über Lebervernichtung bei Mäusen mit Echtzeit-Hämodynamik-Monitoring

Uncontrolled hemorrhage is an important cause of preventable deaths among trauma patients. We have developed a murine model of uncontrolled hemorrhage via ...

Medizin

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver metastases, the amount of liver tissue left behind after liver resection has become the main limiting factor of resectability of large or multiple liver tumors. A minimal amount of functional tissue is required to avoid the severe complication of post-hepatectomy liver failure, which has high morbidity and mortality. Inducing liver growth of the prospective remnant prior to resection has become more established in liver surgery, either in the form of portal vein embolization by interventional radiologists or in the form of portal vein ligation several weeks prior to resection. Recently, it was shown that liver regeneration is more extensive and rapid, when the parenchymal transection is added to portal vein ligation in a first stage and then, after only one week of waiting, resection performed in a second stage (Associating Liver Partition and Portal vein ligation for Staged hepatectomy = ALPPS). ALPPS has rapidly become popular across the world, but has been criticized for its high perioperative mortality. The mechanism of accelerated and extensive growth induced by this procedure has not been well understood. Animal models have been developed to explore both the physiological and molecular mechanisms of accelerated liver regeneration in ALPPS. This protocol presents a rat model that allows mechanistic exploration of accelerated regeneration.

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

Inducing rapid liver hypertrophy using Associating Liver Partition and Portal vein ligation for a Staged hepatectomy (ALPPS) has been proposed for resection of borderline resectable liver tumors. This model may elucidate mechanisms involved in rapid hypertrophy and allows testing of drugs that promote or block the acceleration of regeneration.

Rattenmodell der Leber Partition zuordnen und Pfortader Ligation inszenierten Hepatektomie (ALPPS) Verfahren

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Invasive Hemodynamic Characterization of the Portal-hypertensive Syndrome in Cirrhotic Rats

This is a detailed protocol describing invasive hemodynamic measurements in cirrhotic rats for the characterization of portal hypertensive syndrome. Portal hypertension (PHT) due to cirrhosis is responsible for the most severe complications in patients with liver disease. The full picture of the portal hypertensive syndrome is characterized by increased portal pressure (PP) due to the increased intrahepatic vascular resistance (IHVR), hyperdynamic circulation, and increased splanchnic blood flow. Progressive splanchnic arterial vasodilation and increased cardiac output with elevated heart rate (HR) but low arterial pressure characterizes the portal hypertensive syndrome.
Novel therapies are currently being developed that aim to decrease PP by either targeting IHVR or increased splanchnic blood flow &#8212; but side effects on systemic hemodynamics may occur. Thus, a detailed characterization of portal venous, splanchnic, and systemic hemodynamic parameters, including measurement of PP, portal venous blood flow (PVBF), mesenteric arterial blood flow, mean arterial pressure (MAP), and HR is needed for preclinical evaluation of the efficacy of novel treatments for PHT. Our video article provides the reader with a structured protocol for performing invasive hemodynamic measurements in cirrhotic rats. In particular, we describe the catheterization of the femoral artery and the portal vein via an ileocolic vein and the measurement of portal venous and splanchnic blood flow via perivascular Doppler-ultrasound flow probes. Representative results of different rat models of PHT are shown.

Here we describe a detailed protocol for invasive measurements of hemodynamic parameters including portal pressure, splanchnic blood flow, and systemic hemodynamics in order to characterize the portal hypertensive syndrome in rats.

Invasive hämodynamische Charakterisierung des Portal-hypertensiven Syndroms in zirrhotischen Ratten

This is a detailed protocol describing invasive hemodynamic measurements in cirrhotic rats for the characterization of portal hypertensive syndrome. ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

Ein kleines Tier Modell der Ex Vivo Normothermic Leber Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Ferric Chloride-induced Canine Carotid Artery Thrombosis: A Large Animal Model of Vascular Injury

Occlusive arterial thrombosis leading to cerebral ischemic stroke and myocardial infarction contributes to ~13 million deaths every year globally. Here, we have translated a vascular injury model from a small animal into a large animal (canine), with slight modifications that can be used for pre-clinical screening of prophylactic and thrombolytic agents. In addition to the surgical methods, the modified protocol describes the step-by-step methods to assess carotid artery canalization by angiography, detailed instructions to process both the brain and carotid artery for histological analysis to verify carotid canalization and cerebral hemorrhage, and specific parameters to complete an assessment of downstream thromboembolic events by utilizing magnetic resonance imaging (MRI). In addition, specific procedural changes from the previously well-established small animal model necessary to translate into a large animal (canine) vascular injury are discussed.

Here, we present the modifications necessary to a well characterized and commonly used small animal ferric chloride-induced (FeCl3) carotid artery injury model for use in a large animal vascular injury model. The resulting model can be utilized for pre-clinical trial assessment of both prophylactic and thrombolytic pharmacological and mechanical interventions.

Eisenchlorid-induzierte eckzahn Halsschlagader Thrombosen: Eine große Tiermodell der Gefäßverletzung

Occlusive arterial thrombosis leading to cerebral ischemic stroke and myocardial infarction contributes to ~13 million deaths every year globally. Here, ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic fatty liver disease, metabolic liver disease, and liver cancer) requires experimental manipulation of animal models and in vitro cell cultures. Both techniques have limitations, such as the requirement of large numbers of animals for in vivo manipulation. However, in vitro cell cultures do not reproduce the structure and function of the multicellular hepatic environment. The use of precision-cut liver slices is a technique in which uniform slices of viable mouse liver are maintained in laboratory tissue culture for experimental manipulation. This technique occupies an experimental niche that exists between animal studies and in vitro cell culture methods. The presented protocol describes a straightforward and reliable method to isolate and culture precision-cut liver slices from mice. As an application of this technique, ex vivo liver slices are treated with bile acids to simulate cholestatic liver injury and ultimately assess the mechanisms of hepatic fibrogenesis.

This protocol provides a simple and reliable method for the production of viable precision-cut liver slices from mice. The ex vivo tissue samples can be maintained under laboratory tissue culture conditions for multiple days, providing a flexible model to examine liver pathobiology.

Murine Präzisionsgeschnittene Leberscheiben als Ex-Vivo-Modell der Leberbiologie

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Porcine Liver Transplantation Without Veno-Venous Bypass As an Extended Criteria Donor Model

Liver transplantation is regarded as the gold standard for the treatment of a variety of fatal hepatic diseases. However, unsolved issues of chronic graft failure, ongoing organ donor shortages, and the increased use of marginal grafts call for the improvement of current concepts, such as the implementation of organ machine perfusion. In order to evaluate new methods of graft reconditioning and modulation, translational models are required. With respect to anatomical and physiological similarities to humans and recent progress in the field of xenotransplantation, pigs have become the main large animal species used in transplantation models. After the initial introduction of a porcine orthotopic liver transplant model by Garnier et al. in 1965, several modifications have been published over the past 60 years.
Due to specifies-specific anatomical traits, a veno-venous bypass during the anhepatic phase is regarded as a necessity to reduce intestinal congestion and ischemia resulting in hemodynamic instability and perioperative mortality. However, the implementation of a bypass increases the technical and logistical complexity of the procedure. Furthermore, associated complications such as air embolism, hemorrhage, and the need for a simultaneous splenectomy have been reported previously.
In this protocol, we describe a model of porcine orthotopic liver transplantation without the use of a veno-venous bypass. The engraftment of donor livers after static cold storage of 20 h - simulating extended criteria donor conditions - demonstrates that this simplified approach can be performed without significant hemodynamic alterations or intraoperative mortality and with regular uptake of liver function (as defined by bile production and liver-specific CYP1A2 metabolism). The success of this approach is ensured by an optimized surgical technique and a sophisticated anesthesiologic volume and vasopressor management.
This model should be of special interest for workgroups focusing on the immediate postoperative course, ischemia-reperfusion injury, associated immunological mechanisms, and the reconditioning of extended criteria donor organs.

In this protocol, a model of porcine orthotopic liver transplantation after static cold storage of donor organs for 20 h without the use of a veno-venous bypass during engraftment is described. The approach uses a simplified surgical technique with minimization of the anhepatic phase and sophisticated volume and vasopressor management.

Schweinelebertransplantation ohne veno-venösen Bypass als erweitertes Kriterien-Spendermodell

Liver transplantation is regarded as the gold standard for the treatment of a variety of fatal hepatic diseases. However, unsolved issues of chronic graft ...

Tail Vein Transection Bleeding Model in Fully Anesthetized Hemophilia A Mice

Tail bleeding models are important tools in hemophilia research, specifically for the assessment of procoagulant effects. The tail vein transection (TVT) survival model has been preferred in many settings due to sensitivity to clinically relevant doses of FVIII, whereas other established models, such as the tail clip model, require higher levels of procoagulant compounds. To avoid using survival as an endpoint, we developed a TVT model establishing blood loss and bleeding time as endpoints and full anesthesia during the entire experiment. Briefly, anesthetized mice are positioned with the tail submerged in temperate saline (37&#176;C) and dosed with the test compound in the right lateral tail vein. After 5 min, the left lateral tail vein is transected using a template guide, the tail is returned to the saline, and all bleeding episodes are monitored and recorded for 40 min while collecting the blood. If no bleeding occurs at 10 min, 20 min, or 30 min post-injury, the clot is challenged gently by wiping the cut twice with a wet gauze swab. After 40 min, blood loss is quantified by the amount of hemoglobin bled into the saline. This fast and relatively simple procedure results in consistent and reproducible bleeds. Compared to the TVT survival model, it uses a more humane procedure without compromising sensitivity to pharmacological intervention. Furthermore, it is possible to use both genders, reducing the total number of animals that need to be bred, in adherence with the principles of 3R&#39;s. A potential limitation in bleeding models is the stochastic nature of hemostasis, which can reduce the reproducibility of the model. To counter this, manual clot disruption ensures that the clot is challenged during monitoring, preventing primary (platelet) hemostasis from stopping bleeding. This addition to the catalog of bleeding injury models provides an option to characterize procoagulant effects in a standardized and humane manner.

The refined tail vein transection (TVT) bleeding model in anesthetized mice is a sensitive in vivo method for the assessment of hemophilic bleeding. This optimized TVT bleeding model uses blood loss and bleeding time as endpoints, refining other models and avoiding death as an endpoint.

Tail Vein Transection Bleeding Model bei vollnarkotisierter Hämophilie A Mäuse

Tail bleeding models are important tools in hemophilia research, specifically for the assessment of procoagulant effects. The tail vein transection (TVT) ...

Biologie

Intravital Microscopy to Study Platelet-Leukocyte-Endothelial Interactions in the Mouse Liver

Inflammation and thrombosis are complex processes that occur primarily in the microcirculation. Although standard histology may provide insight into the end pathway for both inflammation and thrombosis, it is not capable of showing the temporal changes that occur throughout the time course of these processes. Intravital microscopy (IVM) is the use of live-animal imaging to gain temporal insight into physiologic processes in vivo. This method is particularly powerful when assessing cellular and protein interactions within the circulation due to the rapid and sequential events that are often necessary for these interactions to occur. While IVM is an extremely powerful imaging methodology capable of viewing complex processes in vivo, there are a number of methodological factors that are important to consider when planning an IVM study. This paper outlines the process of conducting intravital imaging of the liver, identifying important considerations and potential pitfalls that may arise. Thus, this paper describes the use of IVM to study platelet-leukocyte-endothelial interactions in liver sinusoids to study the relative contributions of each in different models of acute liver injury.

Intravital microscopy is a powerful tool that provides insight into both the temporal and spatial relationships of rapid and/or sequential processes. Herein, we describe a protocol to assess both protein-protein interactions and platelet-neutrophil-endothelial interactions in liver sinusoids in a murine model of experimental sepsis (endotoxemia).

Inflammation and thrombosis are complex processes that occur primarily in the microcirculation. Although standard histology may provide insight into the ...