Diese Methode kann verwendet werden, um wichtige Fragen über die Rolle der Knochenmark-Mikroumgebung und das Überleben von transplantierten Myelomtumoren zu beantworten. Der Hauptvorteil dieses Verfahrens ist, dass es auf Längs-Anti-Drogen-Studien angewendet werden kann und verwendet werden, um mehrere biochemische Wege in einer nicht-invasiven Weise zu assay. Am Tag des Experiments zuerst waschen die 8226 Luciferase transfactd Zellen dreimal in eiskalten PBS bei 200 RCF für fünf Minuten pro Centrifigation und setzen Das Pellet in frischen eiskalten PBS bei fünf mal zehn bis sechs Zellen pro 200 Mikroliter eiskalte PBS pro Maus.
Als nächstes bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf Zehenkneifen in einer anästhesierten vier bis sechs Wochen alten NOG-Maus und wenden Sie ophthalmologische Salbe auf die Augen des Tieres an. Laden Sie die Zellen in eine Ein-Milliliter-Insulinspritze, die mit einer 26-Spur-Nadel ausgestattet ist. Injizieren Sie das gesamte Volumen der Zellen in die Schwanzvene des Tieres, bevor Sie die Maus in ihren Käfig zurückbringen und bis zur vollständigen Genesung überwachen.
Zehn bis zwanzig Tage nach der Herausforderung, injizieren Jedes transplantierte Tier mit 200 Mikroliter in vivo Grad D-Luciferin Substrat in sterile saline Intraperitonealy. Die anästhesierten Tiere innerhalb von 5 bis 10 Minuten nach der Injektion in die Rückenlage in ein Bildgebungssystem für Kleintiere bringen. Messen Sie die durchschnittliche Ausstrahlung in ausgewählten Interessenbereichen innerhalb der entsprechenden Bildgebungssoftware.
Für die gezielte Therapie der 8226 Luciferase-Tumoren, Nach der Messung der Basisbiolumineszenz bei jedem Tier, wie gerade gezeigt, randomisieren Sie die Tiere in Behandlungsgruppen und behandeln Sie jede Maus mit einer Reihe von 200 Mikroliter IP-Injektion von Temsirolimus oder eine Saline-Kontrolle. Messen Sie die Luciferase-Aktivität zweimal pro Woche und zeichnen Sie die Veränderungen der Biolumineszenz im Laufe der Zeit. Um Veränderungen im Tumorstoffwechsel zu messen, entfernen Sie zuerst die Nahrung aus dem Hauskäfig der Mäuse für 24 Stunden, um eine übermäßige unspezifische radioaktiv markierte Fludeoxyglucose-Aufnahme zu vermeiden.
Am nächsten Tag 500 bis 100 Mikrocuries von 18 fluormarkierten Fludeoxyglucose-Sonde in steriler Saline auf ein Endvolumen von 100 Mikroliter pro Maus verdünnen und die Zeit und Aktivität der Sonden mit einem Dosiskalibrator aufzeichnen. Wenn die Sonden bereit sind, legen Sie das erste beästhesierte Tier auf ein Heizkissen mit dem Kopf nach vorn und verwenden Sie eine abgeschirmte Ein-Milliliter-Insulinspritze, die mit einer 26-Spur-Nadel ausgestattet ist, um 100 Mikroliter der Sonde in die Schwanzvene zu injizieren. Messen Sie die Restradioaktivität in der Nadel und Spritze mit dem Dosiskalibrator und notieren Sie die Aktivität und die Zeit.
Messen Sie dann die radioaktiv markierte Fludeoxyglucose-Aktivität in ausgewählten Regionen von Interesse, die den transplantierten Tumoren in einem kleintierischen PET CT-Bildgebungssystem entsprechen. Eine erfolgreiche Knochenmarktumorentransplantation kann durch Biolumineszenz-Bildgebung bestätigt werden, wie nachgewiesen. Serielle Bildgebung von mehreren Tieren kann verwendet werden, um die Verteilung des Knochenmarks transplantiert mehrere Myelom-Tumoren zu visualisieren.
Zusätzlich zeigt die optische Röntgenanalyse eine schnelle und nicht-invasive Bestimmung der genauen Lage und Verteilung der multiplen Myelomtumoren im Mausskelett. Die von diesen transplantierten Tumorzellen erzeugte Biolumineszenz kann seriell und nichtinvasiv gemessen werden, um Veränderungen im Tumorwachstum zu bewerten. Darüber hinaus kann das Überleben von Mäusen, die mit dem mTOR-Hemmer Temsirolimus behandelt werden, überwacht werden und die Positronenemission und die Computertomographieanalyse für die tumorradioaktiv markierte Fludeoxyglucose-Aufnahme können verwendet werden, um Temsirolimus vermittelte Veränderungen des Glukosestoffwechsels nachzuweisen.
Während der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, die Zellen IEV zu injizieren. Wir haben festgestellt, dass das Versäumnis, die Zellen in die Vene zu injizieren, zur Bildung von nicht-markierten Tumorzellen in der Nähe der Injektionsstelle führt. Im Anschluss an dieses Verfahren können andere Methoden wie Immunhistochemie und Mikro-CT verwendet werden, um Fragen über die Auswirkungen von Tumoren auf die Knochenarchitektur und die nicht-tumorzellulären und molekularen Komponenten der Markumgebung zu beantworten.
