Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, gezielt von Stammzellen abgeleitete Teratome bei Mäusen zur Bewertung der In-vivo-Wirksamkeit der externen Strahlentherapie von Kleintieren anzusprechen. Der Hauptvorteil der externen Strahlenstrahltherapie ist, dass es sich um eine gezielte Therapie für Stammzell-assoziierte Teratome handelt, die die außerhalb der Ziele gerichteten Nebenwirkungen systemisch gelieferter Therapien vermeidet. Fortschritte in der externen Strahlentherapie haben die spezifische Ausrichtung auf kleine Teratome ermöglicht und gleichzeitig Schäden an normalen Geweben vermieden, was diese Therapie ideal für die Behandlung von strahlenempfindlichen Teratomen macht.
Diese Methode kann nicht nur Einblicke in die Optimierung von Strategien für Zelltherapien geben, sie hat auch das Potenzial, klinisch in menschlichen Therapien anwendbar zu werden. Beginnen Sie mit einer Sechs-Well-Platte, die iPSCs enthält. Um die Tetratomabildung bei immundefizienten Tieren zu induzieren, fügen Sie einen Milliliter rekombinanter Zelldissoziationsenzymmischung pro Bohrkörper der 6-Well-Platte hinzu, die menschliche induzierte pluripotente Stammzellen enthält, die mit einem Doppeltenfusion-Reportergen für eine fünfminütige Inkubation bei Raumtemperatur transduziert wurden.
Am Ende der Inkubation dispergieren Sie die Zellen durch Pipettieren und stoppen Sie die enzymatische Reaktion, indem Sie jedem Brunnen ein gleiches Volumen des Zellkulturmediums hinzufügen. Ziehen Sie die Einzelzellenaufhängungen in einem 15 Milliliter konischen Rohr zum Zählen. Nach Abschluss der Zentrifugation den Überstand aspirieren und das Pellet in 30 Mikroliter matrigel Matrixlösung wieder aufhängen und die Röhre auf Eis legen.
Bei Verwendung von Doppelfusionsreportagen transfizierten Zellen sollten diese doppelt positiven Affektzellen auch in 30 Mikroliter Matrix suspendiert werden. Als nächstes laden Sie jede Zellpopulation in eine ein Milliliter-Spritze mit 28,5 Gauge Nadel ausgestattet und bestätigen einen Mangel an Reaktion auf Zehenkneifung in jeder anästhesierten acht bis zehn Wochen alten athymischen Nackt-Empfängermaus. Dann injizieren Sie subkutan eine Zellmatrixmischung in die Rückenflanke jedes Empfängertiers.
Zum geeigneten Versuchszeitpunkt nach der Impfung injizieren 375 Milligramm pro Kilogramm Deluciferon intraperitoneal in jeden Empfänger. Nach 10 Minuten Bild das Biolumineszenzsignal in jeder anästhesierten Reportersonde injizierte Tier für 30 Minuten mit einer Minute Erfassungsfenster in fünf Minuten Intervallen, nach Standard-Biolumineszenz-Bildgebungsprotokolle. Bei teratomischer Bestrahlung zum entsprechenden versuchsweisen Zeitpunkt zuerst ein anästhesiertes Empfängertier auf das Bett eines bildgesteuerten präklinischen Bestrahlungsstrahlers legen und einen Satz von 400 Projektions-Mikrotomographiebildern über 360 Grad mit einer 40-Spitzen-Kilovoltabilon, 2 Milliamp-Röntgenstrahl, erfassen und das Bild zu volumetrischen Bildern mit einer isotropen Pixelgröße von 0,2 Millimetern rekonstruieren.
Es ist wichtig, volumetrische Bilder der Teratome zu rekonstruieren. Diese Bilder werden helfen, die Strahlenbehandlungen für die spezifische Verabreichung der Therapie nur an die Teratome zu planen, während jede off-target Strahlung der umgebenden Gewebe minimiert wird. Verwenden Sie dann die Micro-CT-Bilder und das RT-Image-Softwarepaket, um ein Strahlenbehandlungsprotokoll zu planen.
Verabreichen Sie die Behandlung für drei aufeinander folgende Tage, um insgesamt 18 Grautöne an den Zieltumor zu liefern. Die injizierten Mäuse zeigen in der Regel Teratom-Wachstumsbildung vier bis igth Wochen nach Tumorzellinjektion, wie durch Biolumineszenz-Bildgebung bestätigt. Wenn die Tumore mit einer kumulativen Leistung von 18 Grautönen einen Monat nach der Zellabgabe bestrahlt werden, werden die Tumore dramatisch schrumpfen, was zu einer signifikanten deckungsgleichen Abnahme des Luziferasesignals führt.
Wichtig ist, wie diese Bilder zeigen, normale Gewebebiopsien, die fünf Milliliter von der bestrahlten Stelle geerntet wurden, keine signifikanten Schäden zu erleiden. Nachdem Sie sich dieses Video angeschaut haben, sollten Sie ein klares Verständnis davon haben, wie Sie Stammzell-abgeleitete Teratome in vivo erstellen und sie effektiv und sicher mit externer Strahlstrahlung behandeln können. Dieser einfache Ansatz erfordert die Erfassung von hochauflösenden CT-Bildern eines Subjekts, nach denen eine Reihe von Strahlenstrahltherapien verschrieben werden könnte, um die Zieltumoren zu bestrahlen und gleichzeitig angrenzendes Gewebe zu vermeiden.
Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Strahlung extrem gefährlich sein kann und dass Vorsichtsmaßnahmen, wie die Verwendung der entsprechenden Schilde, immer während der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden sollten.
