Unser Protokoll schlägt eine neue mediale Zerebralparese-Okklusionstechnik bei Ratten vor, um den Mechanismus der Entwicklung einer Depression nach dem Schlaganfall zu untersuchen und eine effizientere Therapie zu finden. Der Hauptvorteil unserer Technik ist ihre Fähigkeit, die Variabilität bei Gewichtsänderungen, Hirnödem und Infarktvolumen zu reduzieren und verfahrensbedingte Todesfälle zu minimieren. Nach der Bestätigung eines Mangels an Reaktion auf Schwanz Kneifen in einem männlichen 300 bis 350-Gramm Sprague Dawley Ratte, legen Sie das Tier auf eine 37 Grad Celsius Heizplatte und verwenden Sie eine rektale Sonde zur Überwachung der Kernkörpertemperatur.
Tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf und rasieren Sie die Haare vom Hals. Dann desinfizieren Sie die exponierte Haut mit 70 Prozent Alkohol chlorhexidin, und bedecken Sie die Ratte mit dem sterilen chirurgischen Vorhang, bevor Sie die Okklusion nach Standardtechniken durchführen. Um den neurologischen Schweregrad zu erhalten, legen Sie eine verstopfte Ratte auf eine flache Oberfläche und lassen Sie das Tier sich frei bewegen.
Nach einer Minute ziehen Sie die Ratte vorsichtig am Schwanz nach hinten und gradieren Sie die Gangantwort des Tieres. Um das Infarktvolumen zu messen, scannen Sie die vorbereiteten gebeizten Gehirnscheiben mit einer Auflösung von 1, 600 mal 1, 600 Punkten pro Zoll und schneiden Sie die Skala für alle Bilder. Laden Sie dann die standardisierten Bilder in ein entsprechendes Bildanalyse-Softwareprogramm und verwenden Sie ein Tracing-Tool, um den Bereich des markierten Pallors in sechs aufeinanderfolgenden Zwei-Millimeter-Slices zu messen, um die Infarktgröße als Prozentsatz der gesamten Gehirnscheibe zu bestimmen.
30 bis 33 Tage nach der Operation die Tiere in einen geschlossenen, ruhigen, lichtgeregelten Raum in einzelnen Käfigen bringen und 24 Stunden lang eine Flasche mit 100 Millilitern 1%Saccharoselösung in jeden Käfig legen. Am nächsten Tag die Flaschen sowie das Essen und Trinkwasser für 12 Stunden entfernen. Am Ende der Entbehrungsphase eine Flasche mit 100 Millilitern 1%Saccharoselösung und eine Flasche mit 100 Milliliter Leitungswasser in jeden Käfig für vier Stunden.
Zeichnen Sie dann das Volumen der Saccharoselösung und das verbrauchte Wasser auf, um die Berechnung der Affinität zur Saccharosepräferenz für jedes Tier zu ermöglichen. Für Porsolts Zwangsschwimmtest, 30 bis 33 Tage nach der Operation, platzieren Sie jede Ratte 15 Minuten lang in einem vertikalen Plexiglaszylinder mit 80 Zentimetern 25 Grad Celsius Wasser. Am Ende der Gewöhnungszeit lassen Sie die Ratte 15 Minuten im beheizten Gehege bei 32 Grad Celsius trocknen, bevor Sie das Tier in seinen Heimischenkäfig zurückführen.
Am nächsten Tag, geben Sie die Ratte an den Zylinder für eine letzte fünf Minuten, Aufzeichnung der fünfminütigen Test, um die Berechnung der Gesamtdauer der Unbeweglichkeit während dieses Zeitraums zu ermöglichen. Die histologische Analyse zeigt ein statistisch signifikantes Infarktvolumen als Prozentsatz des gesamten Gehirnvolumens nach DER MCAO im Vergleich zu Tieren in der Scheinkontrollgruppe. Ein statistisch signifikantes Hirnödem wird auch bei den Versuchstieren im Vergleich zur Scheinkontrollgruppe beobachtet.
MCAO-Tiere weisen niedrigere neurologische Leistungen im Vergleich zu Scheintieren bei 50 Minuten, 24 Stunden und sieben Tagen nach der Operation auf. MCAO-Ratten konsumieren auch eine deutlich geringere Menge an Saccharose und zeigen eine längere Immobilität während Porsalts Zwangsschwimmtests im Vergleich zu den Scheintieren. Dies ist ein wichtiges Modell für Verhaltensschlaganfallstudien und könnte als Instrument zur Bewertung zukünftiger Therapien oder zur Bereitstellung kritischer präklinischer Daten über die Wirksamkeit therapeutischer Substanzen dienen.
