Ischämie Herzerkrankungen sind weltweit eine der häufigsten Todesursachen. Dieses Verfahren kann durchgeführt werden, um eine Ischämie-Reperfusionsschädigung im Herzen zu induzieren. Dieses Protokoll dient dazu, den LAD genau, sicher und konsistent zu ligieren.
Um salzhaltige, nasse Wattebällchen zuzubereiten, kneifen Sie eine kleine Portion sterile Watte ab und rollen Sie sie wiederholt zu einem Ball. Tauchen Sie die Wattebällchen in sterile 0,9%ige Kochsalzlösung und drücken Sie überschüssige Kochsalzlösung aus. Bewahren Sie die Wattebällchen in einer sauberen Schachtel auf, die mit 75%igem Ethanol sterilisiert ist.
Um Haltehaken vorzubereiten, sterilisieren Sie Clips und Gummibänder mit 75%igem Ethanol. Um eine Ligationsschlaufe vorzubereiten, legen Sie die Mitte eines 7-0-Seidenstichs in das halbkreisförmige Federöhr der Größe drei einer sich verjüngenden, nicht gekneteten chirurgischen Nadel. Um einen Snare-Loop-Controller vorzubereiten, schneiden Sie mit einer Schere ein fünf Millimeter langes Polyethylen-10-Rohr ab.
Als nächstes betäubt man für das Experiment eine acht Wochen alte männliche Sprague Dawley-Ratte und überprüft die Reflexe, indem man den Schwanz und die Hinterfüße kneift. Öffnen Sie dann das Gewebe zwischen den beiden Knorpelringen unterhalb der Stimmritze mit einer Schere und führen Sie einen drei Zentimeter langen Polyethylen-50-Schlauch ein, der als Endotrachealtubus dient. Schließen Sie den Endotrachealtubus an ein Beatmungsgerät an.
Berühren Sie die Brust und finden Sie das Manubrium und den Brustbeinwinkel. Identifiziere dann die linke Rippe, die mit dem Brustbeinwinkel verbunden ist. Identifiziere den Zwischenrippenraum unterhalb der Rippe A.Verwenden Sie eine Pinzette mit feiner Spitze, um die Haut sanft in der Nähe des Zwischenrippenraums anzuheben.
Ziehen Sie dann mit einer Schere einen einen Zentimeter schrägen Schnitt entlang der Hautspannungslinien von dem Punkt etwa fünf Millimeter links vom Brustbeinkörper. Trennen Sie die Haut- und Muskelschichten mit einer Schere vom Schnitt. Haken Sie dann die Muskelschichten außerhalb der linken vorderen Brustwand mit gebogenen Klammern nach unten ein, um die darunter liegenden Rippen freizulegen.
Nachdem Sie Rippe B unter Rippe A identifiziert haben, schneiden Sie Rippe B mit einer stumpfen Schere aus der Mitte des Rippenknorpels ab. Berühren und komprimieren Sie die Wunde einige Sekunden lang sanft mit einem feuchten Wattebausch mit Kochsalzlösung, wenn Blutungen auftreten. Haken Sie als Nächstes die vier gebogenen Clips in den Zwischenrippenmuskel und die Rippen ein, um die Brustwand sanft in vier Richtungen zu spreizen, und schaffen Sie ein rechteckiges Operationsfenster, um den Brustkorb vorsichtig vom Schnitt der Rippe B aus zu öffnen. Haken Sie vorsichtig gegen die linke Lunge und das angrenzende Gewebe, das den Perikard bedeckt, mit einem weiteren gebogenen Clip, um versehentliche Gewebeschäden während des Eingriffs zu vermeiden.
Legen Sie das Herz frei, indem Sie den dünnen Herzbeutel mit einer Pinzette entfernen. Identifizieren Sie dann den ersten Ast der linken Hauptkoronararterie (LMCA) zwischen der Pulmonalarterie und der linken Ohrmuschel. Erzeugen Sie mit einer chirurgischen Nadel eine offene Ligaturschlaufe, indem Sie den Seidenstich an einer Stelle unmittelbar distal des ersten Astes des LMCA in Richtung von links zur rechten Seite des LAD einführen und unter den LAD führen, um eine versehentliche Punktion der linken Ohrmuschel zu vermeiden.
Wenn der LAD unsichtbar ist, weil Flüssigkeit oder Blut die Herzoberfläche bedeckt, tupfen Sie vorsichtig die Herzoberfläche ab, um die Koronararterien sichtbar zu machen. Führen Sie die beiden Enden der Seidennaht auf der einen Seite der offenen Schlaufe in den Kreis der anderen Seite ein, um eine Schlingeschlaufe zu bilden. Führen Sie dann die beiden Enden der Seidennaht des Snare-Loops in den vorbereiteten Snare-Controller ein, bevor Sie den Loop schließen.
Schieben Sie den Snare-Loop-Controller entlang der Seidennaht, während Sie die Seide vorsichtig dehnen, um die Snare-Schlaufe zu schließen. Stoppen Sie den koronaren Fluss des LAD, um eine Myokardischämie für eine Stunde zu induzieren. Sobald der Loop sicher gebunden ist, halten Sie die Seide fest, um die Position des Snare-Loop-Controllers mit einer Kelly-Pinzette zu fixieren.
Legen Sie das andere Ende der Kelly-Pinzette auf den OP-Tisch. Decken Sie das chirurgische Fenster während der LAD-Ligatur mit salzhaltigen, nassen Wattebällchen ab. Öffnen Sie die Kelly-Pinzette und lassen Sie dann den Snare-Loop-Controller los, um den Koronarfluss zwei Stunden lang zu reperfusionieren.
Die Validierung der LAD-Ligationsqualität mit Evans-Blau wird gezeigt. Das Myokard mit koronarer Perfusion war blau gefärbt im Vergleich zu einer nicht perfundierten Region, die rot blieb. Eine geringe Variation des Risikobereichs oder der AAA-Prozentsatz bei den Versuchstieren zeigte die genaue Lokalisation der LAD-Ligatur an.
Weiterhin wurde die Infarktgröße als Verhältnis der Infarktfläche zum AAR in Kontroll- und Behandlungsgruppen geschätzt. Der prozentuale Anteil der Infarktgröße in der Behandlungsgruppe ist niedriger als in der kontrollierten LAD-Ligaturgruppe. Diese Technik ebnet Forschern den Weg, neue therapeutische Ansätze gegen ischämische Herzerkrankungen zu erforschen.
