Dieses Protokoll reduziert die Zeit für die Verarbeitung von Schläfenbeinknochen von 9 bis 10 Monaten auf 10 bis 14 Tage. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie eine schnelle Beurteilung der Otopathologie ermöglicht, die in unserem Fall für die Beurteilung der COVID-19-assoziierten Mittelohrpathologie relevant ist. Diese Technik kann besonders hilfreich für zeitkritische Studien des Schläfenbeins sein.
In Zukunft könnte es für die Untersuchung der Innenohrpathologie weiter optimiert werden. Beginnen Sie die Ernte während der Autopsie und teilen Sie die Hirnnerven scharf auf den inneren Gehörgang auf. Machen Sie den ersten knöchernen Schnitt mit dem Osteotom parallel zum und nur medial zum Plattenepithelbereich des Schläfenbeins.
Führen Sie dann den zweiten knöchernen Schnitt parallel zum ersten an der medialen Grenze des Schläfenbeins durch. Machen Sie den dritten Schnitt bei drei bis vier Zentimetern vor und parallel zum Petrousgrat. Als nächstes machen Sie den vierten Schnitt ungefähr parallel zum dritten zwei Zentimeter nach dem Petrousrücken.
Verwenden Sie eine scharfe Dissektion, um das Weichgewebe zu befreien, das entlang der unteren Kante der Probe befestigt ist, und entfernen Sie das Schläfenbein. Nach der Ernte tauchen Sie das Gewebe sofort in 200 bis 300 Milliliter 10% gepuffertes Formalin ein. Stellen Sie dann eine Präzisions-Mikrosäge mit zwei Diamantklingen auf einen Abstand von fünf Millimetern.
Für eine schnelle Gewebeentkalkung schneiden Sie jede Probe in drei Abschnitte, so dass der zentrale Abschnitt des Schläfenbeins fünf Millimeter dick und die an beiden Enden drei bis fünf Millimeter dick sind. Legen Sie die Abschnitte in 200 bis 300 Milliliter 0,37-Mol-EDTA für sieben bis 10 Tage bei Raumtemperatur zur Erweichung. Hämatoxylin- und Eosinfärbungen der Mittelohrschleimhaut und der Eustachischen Röhre zeigten, dass das Gewebe nach der Verarbeitung mit diesem Protokoll erhalten bleibt.
Immunhistochemische Analysen zeigten das Vorhandensein von ACE2-, Transmembranprotease-Serin- und Furinproteinen in diesen Geweben, was eine mögliche Wurzel für eine SARS-CoV2-Infektion im respiratorischen Epithel des Mittelohrs darstellt. Es ist wichtig, das Schläfenknochengewebe innerhalb der Diamantsäge entsprechend zu positionieren. Alternative Techniken, die mit dieser Methode kombiniert werden können, umfassen die Immunhistochemie für verschiedene Proteine, verschiedene Gewebeflecken und Transkriptomik.
Diese Technik ermöglichte es uns, das Vorhandensein der Proteine, die an der SARS-CoV2-Infektion im Mittelohr während der COVID-19-Pandemie beteiligt sind, schnell zu beurteilen.
