Este protocolo reduz o tempo para processamento temporal ósseo de 9 para 10 meses para 10 a 14 dias. A principal vantagem dessa técnica é que permite a rápida avaliação da otopatologia, que no nosso caso é relevante para a avaliação da patologia do ouvido médio associada ao COVID-19. Esta técnica pode ser particularmente útil para estudos sensíveis ao tempo do osso temporal.
No futuro, pode ser ainda mais otimizado para uso no estudo da patologia do ouvido interno. Comece a colheita durante a autópsia e divida os nervos cranianos bruscamente para o canal auditivo interno. Faça a primeira incisão óssea com o osteotome paralelo e apenas medial à porção escânica do osso temporal.
Em seguida, realize a segunda incisão óssea paralela à primeira na borda medial do osso temporal. Faça a terceira incisão de três a quatro centímetros anterior e paralela à cordilheira petrosa. Em seguida, faça a quarta incisão aproximadamente paralela à terceira a dois centímetros posteriores ao cume do petroo.
Use dissecção afiada para liberar o tecido mole preso ao longo da borda inferior da amostra e remover o osso temporal. Após a colheita, submerga imediatamente o tecido em 200 a 300 mililitros de formalina 10%. Em seguida, coloque uma microsserra de precisão com lâminas de diamante dupla a uma distância de cinco milímetros.
Para descalcificação rápida do tecido, corte cada amostra em três seções de tal forma que a seção central do osso temporal tem cinco milímetros de espessura e as de cada extremidade têm de três a cinco milímetros de espessura. Coloque as seções em 200 a 300 mililitros de 0,37-molar EDTA por sete a 10 dias em temperatura ambiente para amaciamento. A hematoxilina e a coloração de eosina da mucosa do ouvido médio e do tubo eustáquio mostraram que o tecido é preservado após o processamento usando este protocolo.
Análises imunohistoquímicas mostraram a presença de proteínas ACE2, transmembrana protease e furina dentro desses tecidos, fornecendo uma possível raiz para a infecção por SARS-CoV2 no epitélio respiratório do ouvido médio. É importante posicionar adequadamente o tecido ósseo temporal dentro da serra de diamante. Técnicas alternativas que podem ser combinadas com este método incluem imunohistoquímica para diferentes proteínas, diferentes manchas de tecido e transcriptômica.
Esta técnica nos permitiu avaliar rapidamente a presença das proteínas envolvidas na infecção pelo SARS-CoV2 no ouvido médio durante a pandemia COVID-19.
