Этот протокол сокращает время обработки височной кости с 9 до 10 месяцев до 10-14 дней. Основным преимуществом данной методики является то, что она позволяет быстро оценить отопатологию, которая в нашем случае актуальна для оценки COVID-19-ассоциированной патологии среднего уха. Этот метод может быть особенно полезен для чувствительных ко времени исследований височной кости.
В дальнейшем он может быть дополнительно оптимизирован для использования при изучении патологии внутреннего уха. Начинают сбор урожая во время вскрытия и резко делят черепные нервы на внутренний слуховой проход. Сделайте первый костный разрез с остеотомом параллельно и просто медиально плоской части височной кости.
Затем выполняют второй костный разрез параллельно первому на медиальной границе височной кости. Сделайте третий разрез на три-четыре сантиметра спереди и параллельно петроусному гребню. Далее сделаем четвертый разрез примерно параллельно третьему на два сантиметра кзади петрового гребня.
Используйте острое рассечение, чтобы освободить мягкие ткани, прикрепленные вдоль нижнего края образца, и удалить височную кость. После сбора урожая немедленно погружают ткань в 200-300 миллилитров 10% буферизованного формалина. Затем установите прецизионную микропилу с двумя алмазными лезвиями на расстояние до пяти миллиметров.
Для быстрой декальцификации тканей разрежьте каждый образец на три части таким образом, чтобы центральная часть височной кости имела толщину пять миллиметров, а те, что на обоих концах, имели толщину от трех до пяти миллиметров. Поместите срезы в 200-300 миллилитров 0,37-молярной ЭДТА на семь-10 дней при комнатной температуре для размягчения. Окрашивание гематоксилином и эозином слизистой оболочки среднего уха и евстахиевой трубы показало, что ткань сохраняется после обработки с использованием этого протокола.
Иммуногистохимические анализы показали наличие ACE2, трансмембранной протеазы серина и белков фурина в этих тканях, обеспечивая возможный корень инфекции SARS-CoV2 в респираторном эпителии среднего уха. Важно правильно расположить височную костную ткань внутри алмазной пилы. Альтернативные методы, которые могут быть объединены с этим методом, включают иммуногистохимию для различных белков, различных тканевых пятен и транскриптомики.
Этот метод позволил нам быстро оценить наличие белков, участвующих в инфекции SARS-CoV2 в среднем ухе во время пандемии COVID-19.
