Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni della National Natural Science Foundation of China (82173991) e del Sichuan Science and Technology Program (2022YFS0442).

Vedere la Tabella 1 per informazioni sui medicinali di Pheretima, Periplaneta americana e Hirudo. Sono stati identificati dal Prof. Xu Runchun, dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese di Chengdu, come i corpi essiccati di Pheretima aspergillum (E.Perrier), Periplaneta americana L. e Whitmania pigra Whitman.
1. Estrazione del campione
<ol><li>Schiacciare Pheretima, Periplaneta americana e Hirudo con un macinino a base di erbe (vedi Tabella dei materiali), setacciare la polvere medicinale attraverso i setacci standard n. 2 (apertura del setaccio: 0,8 mm) e n. 4 (apertura del setaccio: 0,25 mm) e raccogliere la polvere tra i due setacci per ottenere la polvere campione richiesta. NOTA: Il Pheretima è soffice dopo la frantumazione, quindi la sua polvere non ha bisogno di essere setacciata.</li>
	<li>Prelevare 1 g di polvere (con precisione 0,001 g) in una provetta da centrifuga di plastica da 50 ml, aggiungere 20 ml di soluzione di acido tricloroacetico al 5% (TCA) (vedere Tabella dei materiali) e omogeneizzare a 1.000 rmin-1 per 1 minuto con un omogeneizzatore a dispersione ad alta velocità.</li>
	<li>Dopo l'omogeneizzazione, centrifugare a 1.717 x g per 5 minuti a temperatura ambiente, aggiungere un po 'di cotone assorbente nell'imbuto di vetro e filtrare il surnatante in un matraccio tarato da 50 ml.</li>
	<li>Ripetere il processo di estrazione di cui sopra due volte con 15 ml e 10 ml di soluzione TCA al 5%. Combinare il filtrato e diluirlo a 50 ml con una soluzione TCA al 5%.</li>
</ol>2. Preparazione del reagente
<ol><li>Preparare una soluzione di idrossido di sodio al 20%: pesare 20 g di idrossido di sodio e utilizzare acqua deionizzata per fissare il volume in un matraccio tarato da 100 ml.</li>
	<li>Preparare la soluzione di TCA al 5%: pesare 25 g di TCA e utilizzare acqua deionizzata per fissare il volume in un matraccio tarato da 500 ml.</li>
</ol>3. Preparazione della soluzione madre standard TMA
<ol><li>Preparare la soluzione madre standard TMA: pesare 0,0162 g di campione standard di TMA cloridrato, scioglierlo in una soluzione TCA al 5% e fissare il volume a 100 ml, pari alla concentrazione di 100 μg/ml di soluzione madre standard TMA. Conservare a 4 °C.</li>
	<li>Preparare la soluzione standard TMA: prelevare un certo volume di soluzione madre standard TMA e diluirla passo dopo passo con una soluzione TCA al 5% a concentrazioni di 0,1 μg/mL, 0,5 μg/mL, 1 μg/mL, 2 μg/mL, 5 μg/mL e 10 μg/mL soluzione standard TMA.</li>
</ol>4. Elaborazione dello spazio di testa del campione
<ol><li>Pesare accuratamente 2 mL di soluzione di idrossido di sodio e 0,5 g di paraffina solida (punto di fusione: 58-60 °C) in un flaconcino da 20 mL dello spazio di testa (vedere Tabella dei materiali).</li>
	<li>Introdurre il flaconcino dello spazio di testa in forno a 70 °C per circa 30 minuti. La paraffina solida si scioglie completamente.</li>
	<li>Toglierlo e lasciarlo raffreddare a temperatura ambiente in modo che la paraffina si solidifichi. La paraffina solidificata sigillerà l'idrossido di sodio.</li>
	<li>Prelevare 2 ml di ciascuna soluzione di estrazione del campione e metterla sopra lo strato di paraffina, premere il tappo e sigillare.</li>
	<li>Posizionare il flaconcino sigillato dello spazio di testa sulla macchina (vedere Tabella dei materiali) per la misurazione.</li>
</ol>5. Impostazione delle condizioni di analisi HS-GC-MS/MS
<ol><li>Vedere la Tabella 2 per le condizioni dello spazio di testa e le condizioni GC-MS.</li>
	<li>Vedere la Tabella 3 per informazioni sugli ioni.</li>
</ol>6. Disegno della curva standard
<ol><li>Fare riferimento all'elaborazione dello spazio di testa del campione nei punti 4.1-4.3 per preparare il flaconcino dello spazio di testa contenente lo strato sigillante di liscivia e paraffina.</li>
	<li>Aspirare 2 mL di soluzione standard TMA da 0,1 μg/mL, 0,5 μg/mL, 1 μg/mL, 2 μg/mL, 5 μg/mL e 10 μg/mL in un flaconcino da 20 mL, sigillare il cappuccio e misurare sulla macchina.</li>
</ol>7. Test di precisione
<ol><li>Fare riferimento all'elaborazione dello spazio di testa del campione nei punti 4.1-4.3 per preparare il flaconcino dello spazio di testa contenente la liscivia e lo strato sigillante di paraffina.</li>
	<li>Aspirare 2 mL di soluzione standard TMA da 0,1 μg/mL in un flaconcino dello spazio di testa da 20 mL e sigillare il cappuccio. Eseguire sei prove parallele nella macchina seguendo le istruzioni del produttore (vedi Tabella dei materiali).</li>
</ol>8. Esperimento sul tasso di recupero
<ol><li>Prendi una partita di Pheretima, Periplaneta Americana e Hirudo (S02, S05, S07; Tabella 1) come farmaci rappresentativi per l'esperimento del tasso di recupero.</li>
	<li>Prelevare diversi lotti di polvere campione (S02, S05, S07) e cuocerli in forno a 50 °C per 72 ore fino a quando non viene rilevata alcuna TMA.</li>
	<li>Fare riferimento al metodo di preparazione del campione nei paragrafi 4-6 per rilevare il contenuto di TMA nella polvere del medicinale da forno.</li>
	<li>Prendere 1 g di polvere cotta (con precisione 0,001 g), metterla in una provetta da centrifuga di plastica da 50 ml e aggiungere 50 μL di soluzione standard TMA. NOTA: La concentrazione della soluzione standard TMA è di 100 μg/mL, 1000 μg/mL e 10000 μg/mL.</li>
	<li>Aggiungere 20 ml di soluzione TCA al 5% e omogeneizzare a 1000 rmin-1 per 1 min.</li>
	<li>Dopo l'omogeneizzazione, centrifugare a 1717 x g per 5 minuti, aggiungere un po 'di cotone assorbente nell'imbuto di vetro e filtrare il surnatante in un matraccio tarato da 50 ml.</li>
	<li>Ripetere il processo di estrazione di cui sopra due volte con 15 ml e 10 ml di soluzione TCA al 5%; unire il filtrato e diluirlo a 50 mL con una soluzione TCA al 5%.</li>
</ol>9. Determinazione dei limiti di rilevazione (LOD) e quantificazione (LOQ)
<ol><li>Determinare il LOD in base alla concentrazione corrispondente quando il rapporto segnale/rumore (S/N) = 3.</li>
	<li>Determinare il LOQ in base alla concentrazione corrispondente quando S/N = 10.</li>
</ol>10. Determinazione del contenuto di TMA campione
<ol><li>Prendi circa 1 g di polvere fine di Pheretima, Periplaneta americana e Hirudo , rispettivamente, estrai il campione secondo il metodo sopra e determinalo sulla macchina.</li>
</ol>

Rilevamento della trimetilammina nella medicina di origine animale mediante Headspace GC-MS

<ol>
	<li>Fan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Material+basis+of+stench+of+animal+medicine:+a+review.">Material basis of stench of animal medicine: a review.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 47 (20), 5452-5459 (2022).</li><li>Deng, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+on+formation+and+taste-masking+technology+of+stench+of+animal+medicines.">Progress on formation and taste-masking technology of stench of animal medicines.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (10), 2353-2359 (2020).</li><li>Casaburi, A., Piombino, P., Nychas, G. J., Villani, F., Ercolini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+populations+and+the+volatilome+associated+to+meat+spoilage.">Bacterial populations and the volatilome associated to meat spoilage.</a> Food Microbiology. 45 (Pt A), 83-102 (2015).</li><li>Rouger, A., Tresse, O., Zagorec, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+contaminants+of+poultry+meat:+sources,+species,+and+dynamics.">Bacterial contaminants of poultry meat: sources, species, and dynamics.</a> Microorganisms. 5 (3), 50 (2017).</li><li>Bali&#241;o-Zuazo, L., Barranco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+liquid+chromatography-mass+spectrometric+method+for+the+simultaneous+determination+of+trimethylamine,+dimethylamine+and+methylamine+in+fishery+products.">A novel liquid chromatography-mass spectrometric method for the simultaneous determination of trimethylamine, dimethylamine and methylamine in fishery products.</a> Food Chemistry. 196, 1207-1214 (2016).</li><li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-efficient+trimethylamine+gas+sensor+based+on+Au+nanoparticles+sensitized+WO3+nanosheets+for+rapid+assessment+of+seafood+freshness.">Ultra-efficient trimethylamine gas sensor based on Au nanoparticles sensitized WO3 nanosheets for rapid assessment of seafood freshness.</a> Food Chemistry. 392, 133318 (2022).</li><li>Bota, G. M., Harrington, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+detection+of+trimethylamine+in+meat+food+products+using+ion+mobility+spectrometry.">Direct detection of trimethylamine in meat food products using ion mobility spectrometry.</a> Talanta. 68 (3), 629-635 (2006).</li><li>Neyer, P., Bernasconi, L., Fuchs, J. A., Allenspach, M. D., Steuer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivatization-free+determination+of+short-chain+volatile+amines+in+human+plasma+and+urine+by+headspace+gas+chromatography-mass+spectrometry.">Derivatization-free determination of short-chain volatile amines in human plasma and urine by headspace gas chromatography-mass spectrometry.</a> Journal of Clinical Laboratory Analysis. 34 (2), e23062 (2020).</li><li>Mitsubayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trimethylamine+biosensor+with+flavin-containing+monooxygenase+type+3+(FMO3)+for+fish-freshness+analysis.">Trimethylamine biosensor with flavin-containing monooxygenase type 3 (FMO3) for fish-freshness analysis.</a> Sensors &amp; Actuators B: Chemical. 103 (1-2), 463-467 (2004).</li><li>National Health and Family Planning Commission of the People's Republic of China. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> GB 5009. 179-2016. , 12 (2016).</li><li>Liu, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+material+basis+and+processing+principle+of+fishy+smell+of+Pheretima+aspergillum+by+electronic+nose+and+HS-GC-MS.">Study on material basis and processing principle of fishy smell of Pheretima aspergillum by electronic nose and HS-GC-MS.</a> Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 26 (12), 154-161 (2020).</li><li>Zheng, X., Sun, F., Du, L., Huang, Y., Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+on+changes+of+volatile+components+in+Gecko+before+and+after+processing+by+HS-SPME-GC-MS.">Comparison on changes of volatile components in Gecko before and after processing by HS-SPME-GC-MS.</a> Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 28 (15), 145-152 (2022).</li><li>Yoshiharu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Odor olfactory measurement. , (2004).</li><li>Jia, Z. W., Mao, B. P., Miao, S., Mao, X. H., Ji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+sulfur+dioxide+residues+in+sulfur+fumigated+Chinese+herbs+with+headspace+gas+chromatography.">Determination of sulfur dioxide residues in sulfur fumigated Chinese herbs with headspace gas chromatography.</a> Acta Pharmaceutica Sinica. 49 (2), 277-281 (2014).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

I medicinali di origine animale provengono da tutto il corpo, organi o tessuti, prodotti fisiologici o patologici, escrezioni o secrezioni e prodotti trasformati di animali. La TMA è un'importante fonte di odore di pesce nei medicinali di derivazione animale; è una tipica sostanza maleodorante con una soglia olfattiva molto bassa (0,000032 × 10-6 V/V) e un forte odore di pesce13. Allo stato attuale, il metodo HS-GC-MS comunemente usato non è in grado di rilevare la TMA nei medicinal...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65291">An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry</a>. The Authors section was updated from:
Hui Ye1 
Xuemei Liu1 
Haozhou Huang2 
Lin Huang1 
Yang Bao1 
Hongyan Ma1 
Junzhi Lin3 
Xiaoming Bao4 
Dingkun Zhang1 
Runchun Xu1 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
3TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
4Shimadzu (China) Co., Ltd
to:
Hui Ye1 
Xuemei Liu1 
JiaBao Liao2 
Haozhou Huang3 
Lin Huang1 
Yang Bao1 
Hongyan Ma1 
Junzhi Lin4 
Xiaoming Bao5 
Dingkun Zhang1 
Runchun Xu1 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2China Resources Sanjiu Modern Chinese Medicine Pharmaceutical Co., Ltd 
3Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
4TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
5Shimadzu (China) Co., Ltd

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65291">An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry</a>. The Authors section was updated.

Erratum: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

Il trattamento delle malattie umane utilizzando prodotti derivati da parti animali e / o loro sottoprodotti (indicati qui come medicinali di derivazione animale) sta ricevendo maggiore attenzione. Svolgono un ruolo importante nel trattamento del cancro, delle malattie cardiovascolari, della cirrosi epatica, della mastite e di altre malattie, con i vantaggi di un forte effetto, piccoli dosaggi e un'efficacia clinica significativa e specifica. Tuttavia, i farmaci di origine animale hanno generalmente un odore di pesce prominente, che influisce notevolmente sulla compliance dei pazienti e sono particolarmente sfavorevoli per i bambini 1,2. L'odore di pesce proviene principalmente dalle proteine, dagli amminoacidi, dai grassi e da altre sostanze contenute nel medicinale, che vengono decomposti attraverso l'ossidazione degli acidi grassi, la degradazione degli amminoacidi e altri modi per produrre una varietà di sostanze con un odore di pesce 2,3,4. Tra questi, la trimetilammina (TMA) è un gas volatile con un odore di pesce che esiste ampiamente negli alimenti di origine animale marci o marci5.
Fino ad ora, la gascromatografia (GC), la cromatografia liquida (LC), la cromatografia ionica, la spettrofotometria, la cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) e i metodi dei sensori sono stati comunemente utilizzati per rilevare TMA nell'ambiente, negli alimenti e nelle urine 6,7,8,9. In considerazione della bassa contaminazione della colonna GC e del sistema di iniezione, nonché dell'elevata sensibilità, riproducibilità e basso limite di rivelazione (0,1-1 mg/kg), è stato preferito il metodo della gascromatografia-spettrometria di massa dello spazio di testa (HS-GC-MS) per l'analisi alimentare e biologica8. Al momento, solo la Cina ha stabilito uno standard nazionale per TMA negli alimenti e HS-GC-MS è il primo metodo nello standard GB5009.179-201610. Pertanto, il suddetto metodo HS-GC-MS è stato selezionato per rilevare la TMA nella medicina di derivazione animale. Nella fase iniziale, il nostro gruppo di ricerca ha scoperto che lo standard di rilevamento HS-GC-MS per TMA negli alimenti potrebbe rilevare l'odore di pesce in diversi farmaci di origine animale. In combinazione con i risultati degli studi11,12, è stato possibile dimostrare che la TMA è la sostanza chiave comune dell'odore di pesce nei medicinali di derivazione animale. Tuttavia, si è riscontrato che la riproducibilità dei risultati sperimentali era scarsa e c'erano problemi come la fuga di TMA e la scarsa stabilità, che non potevano essere verificati dalla metodologia. Ciò potrebbe essere dovuto al fatto che la liscivia è stata iniettata nella fiala dello spazio di testa e la rapida reazione acido-base ha portato ad un aumento della pressione nel flaconcino, quindi TMA è fuoriuscito dal poro di iniezione, impedendo il rilevamento stabile e accurato di TMA. Pertanto, questo studio ha proposto un metodo di rilevamento migliorato per la spettrometria di massa quadrupolare tandem dello spazio di testa (HS-GC-MS / MS) per affrontare questi problemi.
Il protocollo migliora il pretrattamento del campione separando i reagenti acido-base nel pretrattamento con l'aiuto di paraffina solida, un buon materiale a cambiamento di fase solido-liquido. Mentre la paraffina si liquefaceva lentamente con l'aumento della temperatura del forno termostatico, anche il TMA veniva rilasciato lentamente nella fiala sigillata dello spazio di testa, evitando l'aumento di pressione causato dalla violenta e rapida reazione acido-base e garantendo un rilevamento stabile e accurato del TMA. Inoltre, l'iniezione dello spazio di testa combinata con le modalità di monitoraggio delle reazioni multiple (MRM) in GC-MS / MS ha efficacemente soppresso l'interferenza chimica della matrice e ha garantito l'affidabilità dei risultati. I risultati della convalida metodologica hanno dimostrato che la linearità, il test di precisione e il tasso di recupero del metodo di rilevamento migliorato potevano soddisfare i requisiti, con una buona riproducibilità e un'elevata sensibilità.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter Trading (China) Co.</td>
			<td>SSC-2-0213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chinese herbal medicine grinder</td>
			<td>Zhejiang Yongkang Xi&#39;an Hardware and Pharmaceutical Factory</td>
			<td>HX-200K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Convection oven</td>
			<td>Sanyo Electric Co., Ltd</td>
			<td>MOV-112F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Decapper for 20 mm Aluminum caps</td>
			<td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td>
			<td>V1750004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Shimadzu Corporation Japan</td>
			<td>AUW220D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatography mass spectrometry</td>
			<td>Shimadzu Corporation Japan</td>
			<td>TQ-8050 NX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Headspace Vial</td>
			<td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td>
			<td>25760200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer</td>
			<td>Shanghai biaomo Factory</td>
			<td>FJ200-SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preassembled Cap</td>
			<td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td>
			<td>L4150050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample sieve</td>
			<td>Zhenxing Sieve Factory</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SH-Volatile Amine</td>
			<td>Chengdu Meimelte Technology Co., Ltd</td>
			<td>227-3626-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd</td>
			<td>2022101401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid paraffin wax</td>
			<td>Shanghai Hualing Kangfu apparatus factory</td>
			<td>20221112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloroacetic acid</td>
			<td>Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd</td>
			<td>2022102001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethylamine hydrochloride</td>
			<td>Chengdu Aifa Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>AF22022108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-pure water system</td>
			<td>Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd</td>
			<td>UPR-11-5T</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved technique for trimethylamine detection in animal-derived medicine by headspace gas chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry

I farmaci di origine animale hanno caratteristiche distintive e significativi effetti curativi, ma la maggior parte di essi ha un evidente odore di pesce, con conseguente scarsa conformità dei pazienti clinici. La trimetilammina (TMA) è uno dei componenti chiave dell'odore di pesce nella medicina di derivazione animale. È difficile identificare con precisione la TMA utilizzando il metodo di rilevamento esistente a causa dell'aumento della pressione nella fiala dello spazio di testa causato dalla rapida reazione acido-base dopo l'aggiunta di liscivia, che causa la fuoriuscita di TMA dalla fiala dello spazio di testa, bloccando il progresso della ricerca sull'odore di pesce della medicina di derivazione animale. In questo studio, abbiamo proposto un metodo di rilevamento controllato che ha introdotto uno strato di paraffina come strato di isolamento tra acido e liscivia. La velocità di produzione di TMA potrebbe essere efficacemente controllata liquefacendo lentamente lo strato di paraffina attraverso il riscaldamento termostatico del forno. Questo metodo ha mostrato linearità soddisfacente, esperimenti di precisione e recuperi con buona riproducibilità e alta sensibilità. Ha fornito supporto tecnico per la deodorizzazione della medicina di derivazione animale.

Treating human diseases by utilizing products derived from animal parts and/or their by-products (referred to here as animal-derived medicines) is receiving increased attention. They play an important role in treating cancer, cardiovascular disease, liver cirrhosis, mastitis, and other diseases, with the advantages of a strong effect, small dosage, and significant and specific clinical efficacy. However, animal-derived medicines generally have a prominent fishy odor, which greatly affects patients&#39; compliance, and are especially unfavorable for children1,2. The fishy odor mainly comes from the proteins, amino acids, fats, and other substances contained in the medicine, which are decomposed through fatty acid oxidation, amino acid degradation, and other ways to produce a variety of substances with a fishy odor2,3,4. Among them, trimethylamine (TMA) is a volatile gas with a fishy odor that widely exists in rotting or rotten animal-derived foods5.
Until now, gas chromatography (GC), liquid chromatography (LC), ion chromatography, spectrophotometry, liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), and sensor methods have commonly been used to detect TMA in the environment, food, and urine6,7,8,9. In view of the low contamination of the GC column and injection system, as well as the high sensitivity, reproducibility, and low detection limit (0.1-1 mg/kg), the headspace gas chromatography-mass spectrometry (HS-GC-MS) method was preferred for food and biological analysis8. At present, only China has established a national standard for TMA in food, and HS-GC-MS is the first method in the GB5009.179-2016 standard10. Therefore, the above HS-GC-MS method was selected to detect TMA in animal-derived medicine. In the early stage, our research group found that the HS-GC-MS detection standard for TMA in food could detect the fishy odor in several animal-derived medicines. Combined with the results of the studies11,12, it could be proved that TMA is the common key substance of fishy odor in animal-derived medicines. However, it was found that the reproducibility of the experimental results was poor, and there were problems such as TMA escape and poor stability, which could not be verified by the methodology. This could be due to the fact that the lye was injected into the headspace vial and the rapid acid-base reaction led to increased pressure in the vial, thus TMA escaped from the injection pore, preventing the stable and accurate detection of TMA. Therefore, this study proposed an improved headspace gas chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry (HS-GC-MS/MS) detection method to address these problems.
The protocol improves the sample pretreatment by separating the acid-base reactants in the pretreatment with the help of solid paraffin, a good solid-liquid phase change material. As the paraffin slowly liquefied with the temperature rise of the thermostatic furnace, TMA was also slowly released in the sealed headspace vial, avoiding the pressure increase caused by the violent and rapid acid-base reaction and ensuring stable and accurate TMA detection. Further, the headspace injection combined with multiple reaction monitoring (MRM) modes) in GC-MS/MS effectively suppressed matrix chemical interference and ensured the reliability of the results. The results of the methodological validation proved that the linearity, precision test, and recovery rate of the improved detection method could meet the requirements, with good reproducibility and high sensitivity.

Autore in primo piano: Una tecnica migliorata per la rilevazione della trimetilammina nella medicina di origine animale mediante gascromatografia nello spazio di testa-spettrometria di massa a quadrup

Una tecnica migliorata per il rilevamento della trimetilammina nella medicina di derivazione animale mediante gascromatografia dello spazio di testa-spettrometria di massa a quadrupolo tandem

The scope of our research is a material basis in the variation of fish odor in animal medicine. This protocol provides a simple pretreatment method and accurate detection of trimethylamine in animal medicines. The simple pretreatment methods and the programmed parameters of HS-GC mass/mass of this protocol, need to be further optimized, and we still have a lot of work to do.Our protocol adopts the multi-direction monitoring mode of GC mass/mass, combined with a unique, simple pretreatment, which is not only the first pretreatment for trimethylamine analysis, but also the first analytical mode to be used.

I diagrammi schematici del principio di pre-elaborazione e del funzionamento di questo protocollo sono mostrati rispettivamente nella Figura 1 e nella Figura 2. Il tempo di picco della TMA è stato di 2,3 minuti, con una forma a picco nitida e nessuna interferenza da altre impurità (Figura 3). Misurando l'intervallo lineare della soluzione standard TMA 0,1-10 μg/mL, con concentrazione TMA come ascissa e area di picco come ordinata...

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Qui viene descritto un metodo di spettrometria di massa a quadrupolo tandem (HS-GC-MS/MS) dello spazio di testa adatto per la determinazione della trimetilammina (TMA) in medicinali di derivazione animale. Il protocollo include il pretrattamento del campione, il trattamento dello spazio di testa, le condizioni di analisi, la convalida metodologica e la determinazione della TMA nei medicinali di derivazione animale.

Animal-derived medicines have distinctive characteristics and significant curative effects, but most of them have an obvious fishy odor, resulting in the ...

Lo scopo della nostra ricerca è una base materiale nella variazione dell'odore del pesce nella medicina animale. Questo protocollo fornisce un semplice metodo di pretrattamento e un rilevamento accurato della trimetilammina nei medicinali animali. I semplici metodi di pretrattamento e i parametri programmati di massa/massa HS-GC di questo protocollo, devono essere ulteriormente ottimizzati e abbiamo ancora molto lavoro da fare.Il nostro protocollo adotta la modalità di monitoraggio multidirezionale di massa/massa GC, combinata con un pretrattamento unico e semplice, che non è solo il primo pretrattamento per l'analisi della trimetilammina, ma anche la prima modalità analitica da utilizzare.

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Research

JoVE Journal

Chemistry

An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

1.3K Views.  Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. Lo scopo della nostra ricerca è una base materiale nella variazione dell'odore del pesce nella medicina animale. Questo protocollo fornisce un semplice metodo di pretrattamento e un rilevamento accurato della trimetilammina nei medicinali animali. I semplici metodi di pretrattamento e i parametri programmati di massa/massa HS-GC di questo protocollo, devono essere ulteriormente ottimizzati e abbiamo ancora molto lavoro da fare.Il nostro protocollo adotta la modalità di monitoraggio m...

Video: Autore in primo piano: Una tecnica migliorata per la rilevazione della trimetilammina nella medicina di origine animale mediante gascromatografia nello spazio di testa-spettrometria di massa a quadrup