Extensión probóscide Respuesta (PER) Ensayo en Drosophila

Resumen

Respuesta trompa de extensión o PER es un ensayo de comportamiento de sabor que se ha utilizado en las moscas, así como en las abejas. Cuando la trompa se pone en contacto con una sustancia atractiva, la mosca se extiende su trompa para consumir la sustancia. Soluciones de diversos azúcares son muy atractivos para la marcha.

Resumen

Respuesta trompa de extensión (PER) es un ensayo de comportamiento de sabor que se ha utilizado en las moscas, así como en las abejas.

En la superficie de la boca de la mosca (labelo), hay pelo-como las estructuras llamadas sensilla que alberga neuronas gusto. Cuando una sustancia atractiva entra en contacto con el labelo, la mosca se extiende su trompa para consumir el material. Extensión probóscide Respuesta (PER) ensayo mide la respuesta de comportamiento de gusto, y es un método útil para conocer las preferencias de alimentos en una sola mosca. Soluciones de azúcares diversos, tales como sacarosa, glucosa y fructosa, son muy atractivos para la marcha. El efecto de las sustancias aversivas también se puede probar que la reducción del PER cuando se mezcla en una solución dulce.

A pesar de la simplicidad del procedimiento básico, hay muchas cosas que pueden evitar que se trabaja. Uno de los factores que requiere atención es el estado de respuesta de la mosca. El tiempo de hambre necesaria para que la marcha para el estado de respuesta adecuada varía drásticamente de 36 a 72 horas. Hemos establecido una serie de controles para evaluar el estado de la mosca y que permite la detección de los animales individuales que no responden o hiper sensible. Otro factor importante es el nivel de impacto y la posición del contacto con el labelo, que sería difícil de describir con palabras. Esta presentación en video demuestra todo esto junto con otras mejoras que aumenten la reproducibilidad de este método.

Protocolo

Hambre

1. En primer lugar, matar de hambre al vuelo.
2. Ponga un pedazo pequeño de Kim-limpiar empapados con agua en un frasco vacío.
3. Transferencia de 20-30 bien alimentados moscas en el vial vacío.
4. Comprobar cada 12 a 24 horas para asegurarse de que el papel está húmedo.
5. Matar de hambre al volar por 36 a 72 horas.

Arreglar la marcha

1. Tome una mosca en un aspirador.
2. Coloque una punta de 200 l de color amarillo sobre la apertura. Al mismo tiempo mover de un tirón y soplando sobre ella, se puede apretar la mosca en la punta amarilla.
3. Aplicar suavemente un poco de aire para impulsar la marcha hasta un punto en el que no se puede mover.
4. Mediante el uso de una navaja de afeitar, pon una marca aproximadamente a los ojos de la mosca, y luego aspirar el vuelo de regreso y le cortó la punta.
5. Sople suavemente el vuelo de regreso a la posición, pero antes de llegar al final, hacer un corte inclinado en la posición en la trompa se va a estar ubicado. Usted puede hacer sin este corte inclinado, pero sin duda sería el siguiente proceso más fácil.

Prepare mechas sacarosa

1. Toque una banda de 6 mm de ancho de Kimwipes ® papel en un hilo, y se separan en pequeños trozos de cono-como forma de mecha (<1 cm).
2. Estas mechas pequeñas se sumergieron en soluciones de sacarosa o agua y se presentó a la trompa por la toma de contacto.

Prepare los controles y los animales de experimentación

1. Antes de probar cualquier estimulantes del gusto, dar una solución de sacarosa al 4% a la mosca. Esto actúa como un control positivo. Deseche cualquier mosca que no respondió.
2. A continuación, prueba de dH ₂ 0 sobre la marcha. Este acto como un control negativo. Deseche la marcha si se ha respondido.
3. Prueba de estos controles después de la prueba de su estimulantes.

Discusión

En esta presentación, hemos pasado por todos los pasos para el ensayo de probóscide respuesta de extensión. El método parece bastante sencillo, pero como en muchos ensayos de comportamiento de otras, muchas pequeñas cosas pueden evitar que el ensayo de trabajo. Hemos pasado por muchas etapas de tal manera que necesitan una atención especial. En este caso, me reitero algunos de los factores más importantes.

Uno de ellos es la forma de la mecha. He mostrado algunos de los ejemplos muy buenos, pero por supuesto, en realidad, tod...

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
HDR-HC1	Camera	Sony Corporation
SMZ800	Microscope	Nikon Instruments
P-IBSS	Camera Adapter	Nikon Instruments
1x DC10LN	Camera Adapter	Optem, Qioptiq Inc.
257010	Camera Adapter	Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2	Tripod	BENBO
Gorillapod SLR	Tripod	Joby
iMac G5	Computer	Apple
Power Mac G5	Computer	Apple
iMovie	Software	Apple
MPEG Streamclip	Software	SQUARED 5