Proboscis Erweiterung Response (PER) Assay in Drosophila

Zusammenfassung

Proboscis Extension Response oder PRO ist ein Geschmack Verhalten Assay, der in Fliegen sowie in Honigbienen verwendet wurde. Wenn der Rüssel den Kontakt mit einem attraktiven Stoff macht, erstreckt sich die Fliege ihren Rüssel, um die Substanz zu konsumieren. Lösungen verschiedener Zucker sind sehr attraktiv, die Fliege.

Zusammenfassung

Proboscis Extension Response (PER) ist ein Geschmack Verhalten Assay, der in Fliegen sowie in Honigbienen verwendet wurde.

Auf der Oberfläche der Fliege in den Mund (Labellum), gibt es Haar-ähnliche Strukturen genannt Sensillen, die Geschmack Neuronen Häuser. Wenn eine attraktive Substanz Kontakt zur Lippe macht, erstreckt sich die Fliege ihren Rüssel, um das Material zu verbrauchen. Proboscis Erweiterung Response (PER)-Assay misst diesen Geschmack Verhalten Reaktion, und es ist eine nützliche Methode, um über das Essen Vorlieben in eine Fliege zu lernen. Lösungen verschiedener Zucker wie Saccharose, Glucose und Fructose, sind sehr attraktiv, die Fliege. Die Wirkung von aversiven Substanzen können auch als Reduzierung der PER getestet werden, wenn in einem süßen gemischt.

Trotz der Einfachheit der grundlegenden Verfahren, es gibt viele Dinge, die sie von der Arbeit verhindern können. Einer der Faktoren, die Aufmerksamkeit erfordern, ist die Fliege reagiert Zustand. Die erforderliche Hungertod der Zeit, die fliegen, um die richtige Reaktion Zustand zu bringen variiert drastisch von 36 bis 72 Stunden. Wir haben eine Reihe von Kontrollen, die Fliege den Zustand und die Screening ermöglicht der non-responsive oder hyper-responsive einzelnen Tiere zu bewerten. Ein weiterer wichtiger Faktor sind die Auswirkungen auf und die Position der Kontakt zu den Labellum, was schwierig sein, die von Worten zu beschreiben wäre. Diese Videopräsentation zeigt alle diese zusammen mit einigen anderen Verbesserungen, die die Reproduzierbarkeit dieses Verfahrens erhöhen würde.

Protokoll

Hunger

1. Zunächst verhungern the fly.
2. Ein kleines Stück von Kim-wischen mit Wasser in ein leeres Fläschchen getränkt.
3. Transfer 20-30 wohlgenährt fliegt in die leere Flasche.
4. Prüfen Sie alle 12 -24 Stunden, um sicherzustellen, dass die Papier ist feucht.
5. Hungern the fly für 36-72 Stunden.

Fix the fly

1. Nehmen Sie eine in einem Aspirator fliegen.
2. Legen Sie eine 200 ul gelber Spitze über die Öffnung. Gleichzeitig spiegeln und bläst, können Sie Squeeze-the-fly in die gelbe Spitze.
3. Sanft gelten etwas Luft, die Fliege Push-up bis zu einem Punkt, wo sie sich nicht bewegen kann.
4. Durch die Verwendung einer Rasierklinge, setzen Sie ein Zeichen in etwa auf die Fliege ins Auge, dann saugen die fliegen zurück und schneiden Sie die Spitze.
5. Pusten Sie leicht die Fliege wieder in Position, aber kurz vor Erreichen der ganz am Ende, eine Schräge an der Stelle, wo der Rüssel werde lokalisiert werden geschnitten wird. Sie können ohne diese schräg geschnitten, aber es würde auf jeden Fall die folgenden Prozess zu vereinfachen.

Bereiten Saccharose Dochte

1. Twist einem 6 mm breiten Streifen Kimwipes ®-Papier in ein Gewinde und auseinander ziehen in kleine Stücke von Kegel-geformten Docht (<1 cm).
2. Diese kleinen Dochte wurden in Saccharose-Lösungen oder Wasser getaucht und präsentiert dem Rüssel durch die Kontaktaufnahme.

Bereiten Kontrollen und Versuchstieren

1. Vor der Prüfung keine Geschmacksstoffe, geben 4% Saccharose-Lösung, die Fliege. Dies wirkt wie eine positive Kontrolle. Entsorgen Sie alle fliegen, die nicht geantwortet haben.
2. Als nächstes testen dH ₂ 0 on the fly. Diese wirken als negative Kontrolle. Entsorgen Sie die fliegen, wenn sie zu reagieren haben.
3. Testen Sie diese Kontrollen nach dem Testen Sie Ihre Geschmacksstoffe.

Diskussion

In dieser Präsentation haben wir alle Schritte für Proboscis Extension Response Test gegangen. Die Methode klingt ziemlich einfach, aber wie in vielen anderen Verhalten Assays, viele kleine Dinge können den Test von der Arbeit abzuhalten. Wir haben durch viele solche Schritte, die Aufmerksamkeit brauchen gegangen. Hier noch einmal hervorzuheben, habe ich einige der wichtigsten Faktoren.

Ein solcher Faktor ist die Form der Docht. Ich habe einige der sehr guten Beispielen gezeigt wird, aber natürlich in Wirklichkeit alles wäre ei...

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
HDR-HC1	Camera	Sony Corporation
SMZ800	Microscope	Nikon Instruments
P-IBSS	Camera Adapter	Nikon Instruments
1x DC10LN	Camera Adapter	Optem, Qioptiq Inc.
257010	Camera Adapter	Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2	Tripod	BENBO
Gorillapod SLR	Tripod	Joby
iMac G5	Computer	Apple
Power Mac G5	Computer	Apple
iMovie	Software	Apple
MPEG Streamclip	Software	SQUARED 5