Extensão Proboscis Response Assay (PER) em Drosophila

Resumo

Proboscis resposta extensão ou PER é um ensaio de comportamento gosto que tem sido utilizado em moscas, bem como em abelhas. Quando a tromba faz contato com uma substância atrativa, a mosca estende sua tromba para consumir a substância. Soluções dos vários açúcares, são muito atraentes para a mosca.

Resumo

Proboscis resposta extensão (PER) é um ensaio de comportamento gosto que tem sido utilizado em moscas, bem como em abelhas.

Sobre a superfície da boca da mosca (labelo), existem cabelo-como estruturas chamadas sensilla que abriga neurônios gosto. Quando uma substância atraente faz contato com o labelo, a mosca estende sua tromba para consumir o material. Extensão Proboscis Response ensaio (PER) mede a resposta comportamento, gosto e é um método útil para aprender sobre as preferências alimentares em uma única mosca. Soluções dos vários açúcares, como sacarose, glicose e frutose, são muito atraentes para a mosca. O efeito de substâncias aversivo também pode ser testada como a redução do PER, quando misturado em uma solução doce.

Apesar da simplicidade do procedimento básico, existem muitas coisas que podem impedi-lo de trabalhar. Um dos fatores que requer atenção é o estado de resposta da mosca. O tempo necessário para trazer a fome a voar para o estado adequado de resposta varia drasticamente de 36 a 72 horas. Nós estabelecemos uma série de controles para avaliar o estado da mosca e que permite a triagem de não-responsivos ou hiper-sensíveis animais individuais. Outro fator importante é o nível de impacto ea posição do contato com o labelo, que seria difícil descrever com palavras. Esta apresentação em vídeo demonstra todos juntos estes com várias outras melhorias que poderiam aumentar a reprodutibilidade deste método.

Protocolo

Fome

1. Primeiro, morrer de fome a voar.
2. Coloque um pequeno pedaço de Kim-wipe encharcada com água em um tubo vazio.
3. Transferência de 20-30 bem alimentados voa para o frasco vazio.
4. Verifique a cada 12 -24 horas para fazer se o papel está úmido.
5. Fome a voar por 36-72 horas.

Fix the fly

1. Tome uma mosca em um aspirador.
2. Coloque uma ponta de 200 mL amarela sobre a abertura. Simultaneamente lançando e soprando sobre ele, você pode espremer a voar para a ponta amarela.
3. Aplicar suavemente um pouco de ar para empurrar a voar até um ponto onde ele não pode se mover.
4. Usando uma navalha, colocar uma marca de cerca de olho da mosca, em seguida, sugar a voar de volta e cortou a ponta.
5. Suavemente soprar a voar de volta para a posição, mas apenas antes de chegar ao fim, faça um corte inclinado na posição em que a tromba vai ser localizado. Você pode fazer sem este corte viés, mas com certeza gostaria de fazer o seguinte processo mais fácil.

Prepare pavios sacarose

1. Torça uma faixa de 6 mm de largura Kimwipes ® papel em um thread, e separe em pedaços pequenos de pavio cone-like forma (<1 cm).
2. Essas mechas pequenas foram mergulhados em soluções de sacarose ou água e apresentado ao proboscis fazendo o contato.

Prepare os controles e animais experimentais

1. Antes de testar qualquer tastants, dar uma solução de sacarose 4% para a mosca. Isto age como um controle positivo. Descartar qualquer mosca que não respondeu.
2. Em seguida, teste dH ₂ 0 na mosca. Este ato como um controle negativo. Descartar a voar se o fez responder.
3. Testar esses controles depois de testar o seu tastants.

Discussão

Nesta apresentação, nós passamos por todas as etapas para Proboscis ensaio de resposta de extensão. O método parece muito simples, mas como em muitos ensaios outro comportamento, muitas coisas pequenas podem impedir que o ensaio de trabalhar. Nós já passamos por diversas etapas que necessitam de atenção especial. Aqui, eu enfatizar alguns dos fatores mais importantes.

Um desses fatores é a forma do pavio. Eu tenho mostrado alguns dos exemplos muito bons, mas é claro que, na realidade, tudo seria um espectro contínuo entr...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
HDR-HC1	Camera	Sony Corporation
SMZ800	Microscope	Nikon Instruments
P-IBSS	Camera Adapter	Nikon Instruments
1x DC10LN	Camera Adapter	Optem, Qioptiq Inc.
257010	Camera Adapter	Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2	Tripod	BENBO
Gorillapod SLR	Tripod	Joby
iMac G5	Computer	Apple
Power Mac G5	Computer	Apple
iMovie	Software	Apple
MPEG Streamclip	Software	SQUARED 5