Dispositivo de montaje acústico tridimensional para la fabricación en masa de esferoides celulares

Resumen

Los esferoides celulares se han considerado un modelo potencial en el campo de las aplicaciones biológicas. Este artículo describe los protocolos para la generación escalable de esferoides celulares utilizando un dispositivo de ensamblaje acústico 3D, que proporciona un método eficiente para la fabricación robusta y rápida de esferoides celulares uniformes.

Resumen

Los esferoides celulares son modelos tridimensionales (3D) prometedores que han adquirido amplias aplicaciones en muchos campos biológicos. Este protocolo presenta un método para fabricar esferoides celulares de alta calidad y alto rendimiento utilizando un dispositivo de ensamblaje acústico 3D a través de procedimientos maniobrables. El dispositivo de montaje acústico consta de tres transductores de titanato de circonato de plomo (PZT), cada uno dispuesto en el plano X/Y/Z de una cámara cuadrada de polimetacrilato de metilo (PMMA). Esta configuración permite la generación de un patrón de matriz de puntos 3D de nodos acústicos levitados (LAN) cuando se aplican tres señales. Como resultado, las células de la solución de gelatina de metacriloilo (GelMA) pueden ser conducidas a las LAN, formando agregados celulares uniformes en tres dimensiones. A continuación, la solución GelMA se fotocura con UV y se reticula para que sirva como andamio que soporta el crecimiento de los agregados celulares. Finalmente, se obtienen masas de esferoides maduros y se recuperan disolviendo posteriormente los andamios GelMA en condiciones suaves. El nuevo dispositivo de ensamblaje de células acústicas 3D propuesto permitirá la fabricación a escala de esferoides celulares, e incluso organoides, ofreciendo una tecnología de gran potencial en el campo biológico.

Introducción

Los modelos de cultivo in vitro en 3D, que proporcionan características estructurales y morfológicas más similares a las de in vivo en comparación con los modelos de cultivo 2D convencionales, han sido reconocidos como sistemas prometedores en diversas aplicaciones biomédicas, como la ingeniería de tejidos, el modelado de enfermedades y el cribado de fármacos ^1,2,3. Como un tipo de modelo de cultivo 3D, los esferoides celulares suelen referirse a la agregación celular, creando estructuras esferoidales 3D caracterizadas por interacciones mejoradas célula-célu....

Protocolo

1. Fabricación del dispositivo de montaje acústico 3D

1. Comience preparando cuatro láminas de PMMA de 1 mm de espesor mediante corte láser³⁰, y luego proceda a pegarlas para formar una cámara cuadrada con un ancho interior de 21 mm y una altura de 10 mm.
2. A continuación, coloque otra lámina de PMMA de 1 mm de grosor en el fondo de la cámara para que sirva de soporte para la biotinta.
3. Fije cuidadosamente tres transductores de titanato de circonato de plomo (PZT) (cada uno de 20 mm de largo, 10 mm de ancho, 0,7 mm de espesor y con una frecuencia de resonancia primaria de 3 MHz, consulte la Tabla....

Discusión

La fabricación eficiente y estable de esferoides celulares con alto rendimiento utilizando tecnologías como el dispositivo de ensamblaje acústico 3D es muy prometedora para el avance de la ingeniería biomédica y el cribado de fármacos ^1,2,3. Este enfoque simplifica la producción masiva de esferoides celulares a través de procedimientos sencillos.

Sin embargo, hay factores críticos a tener en .......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22-μm filter	Merck	SLGSM33SS	Used for GelMA solution sterilization
35 mm-cell culture dish	Corning	430165	Used for culturing cells
Confocal microscope	Nikon	A1RHD25	Fluorescent cell observation
DiO dye	Beyotime	C1038	Dye used to stain cells
DMEM	Gibco	12430054	Cell culture media
FBS	Gibco	10099141C	Cell culture media supplement
Function generator	Rigol	DG5352	For RF signal generation
GelMA	Regenovo	none	Used to prepare bioink
GelMA lysis buffer	EFL	EFL-GM-LS-001	Used to dissolve GelMA scaffolds
Inverted microscope	Nikon	Ti-U	Cell observation
LAP	Sigma-Aldrich	900889	Used as photoinitiator
Live-Dead kit	Beyotime	C2015M	Cell vability analysis
PBS	Gibco	10010002	Used as buffer
Penicillin-streptomycin	Gibco	15070063	Prevent cell culture contamination
Power amplifer	Minicircuit	LCY-22+	Increase the voltage amplitude of the RF signal
PZT transducers	Yantai Xingzhiwen Trading Co.,Ltd.	PZT-41	Functional units for acoustic assembly device
T25 cell culture flask	Corning	430639	Used for culturing cells
Trypan blue	Gibco	15250061	Cell counting
Trypsin-EDTA	Gibco	25200056	Cell dissociation enzyme