Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Клеточные сфероиды рассматривались как одна из потенциальных моделей в области биологических приложений. В данной статье описываются протоколы для масштабируемой генерации клеточных сфероидов с использованием 3D-акустического сборочного устройства, которое обеспечивает эффективный метод надежного и быстрого изготовления однородных клеточных сфероидов.

Аннотация

Клеточные сфероиды являются перспективными трехмерными (3D) моделями, получившими широкое применение во многих областях биологии. В этом протоколе представлен метод изготовления высококачественных и высокопроизводительных клеточных сфероидов с использованием устройства 3D-акустической сборки с помощью маневренных процедур. Устройство акустической сборки состоит из трех преобразователей из титаната цирконата свинца (PZT), каждый из которых расположен в плоскости X/Y/Z квадратной камеры из полиметилметакрилата (ПММА). Эта конфигурация позволяет генерировать 3D-точечную матрицу левитирующих акустических узлов (ЛВС) при подаче трех сигналов. В результате ячейки в растворе желатина метакрилоила (GelMA) могут быть перемещены в ЛВС, образуя однородные клеточные агрегаты в трех измерениях. Затем раствор GelMA подвергается УФ-фотоотверждению и сшивается в качестве каркаса, поддерживающего рост клеточных агрегатов. Наконец, массы зрелых сфероидов получают и извлекают путем последующего растворения скаффолдов GelMA в мягких условиях. Предлагаемое новое 3D-устройство для сборки акустических клеток позволит масштабировать производство клеточных сфероидов и даже органоидов, предлагая большой потенциал технологии в биологической области.

Введение

3D-модели культивирования in vitro, которые обеспечивают больше структурных и морфологических характеристик in vivo по сравнению с обычными 2D-моделями культивирования, были признаны перспективными системами в различных биомедицинских приложениях, таких как тканевая инженерия, моделирование заболеваний и скрининг лекарств 1,2,3. Как один из типов 3D-модели культуры, клеточные сфероиды обычно относятся к клеточной агрегации, создавая трехмерные сфероидальные структуры, характеризующиеся усиленными межклеточными и межклеточными и межкле....

протокол

1. Изготовление устройства 3D акустической сборки

  1. Начните с подготовки четырех листов ПММА толщиной 1 мм с помощью лазерной резки30, а затем склейте их вместе, чтобы сформировать квадратную камеру с внутренней шириной 21 мм и высотой 10 мм.
  2. Затем прикрепите еще один лист ПММА толщиной 1 мм к нижней части камеры, который будет служить держателем для биочернил.
  3. Аккуратно прикрепите три преобразователя из цирконат-титаната (PZT) (каждый размером 20 мм в длину, 10 мм в ширину, 0,7 мм в толщину и с первичной резонансной частотой 3 МГц, см. таблицу материалов) к внешней стороне трех орто....

Результаты

В этом исследовании было разработано устройство 3D-акустической сборки для массового производства клеточных сфероидов. Акустическое устройство состояло из квадратной камеры с двумя преобразователями PZT, прикрепленными к плоскостям X и Y на внешней поверхности камеры, и одним преобразо.......

Обсуждение

Эффективное и стабильное изготовление клеточных сфероидов с высокой пропускной способностью с использованием таких технологий, как устройство 3D-акустической сборки, имеет большие перспективы для развития биомедицинской инженерии и скрининга лекарств 1,2,3

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Работа была поддержана Национальной ключевой программой исследований и разработок Китая (2022YFA1104600) и Фондом естественных наук провинции Чжэцзян Китая (LQ23H160011).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
0.22-μm filterMerckSLGSM33SSUsed for GelMA solution sterilization
35 mm-cell culture dishCorning430165Used for culturing cells
Confocal microscopeNikonA1RHD25Fluorescent cell observation
DiO dyeBeyotimeC1038Dye used to stain cells
DMEMGibco12430054Cell culture media
FBSGibco10099141CCell culture media supplement
Function generatorRigolDG5352For RF signal generation
GelMARegenovononeUsed to prepare bioink
GelMA lysis bufferEFLEFL-GM-LS-001Used to dissolve GelMA scaffolds
Inverted microscopeNikonTi-UCell observation
LAPSigma-Aldrich900889Used as photoinitiator
Live-Dead kitBeyotimeC2015MCell vability analysis
PBSGibco10010002Used as buffer
Penicillin-streptomycinGibco15070063Prevent cell culture contamination
Power ampliferMinicircuitLCY-22+Increase the voltage amplitude of the RF signal
PZT transducersYantai Xingzhiwen Trading Co.,Ltd.PZT-41Functional units for acoustic assembly device
T25 cell culture flaskCorning430639Used for culturing cells
Trypan blue Gibco15250061Cell counting
Trypsin-EDTA Gibco25200056Cell dissociation enzyme

Ссылки

  1. Eiraku, M., et al. Self-organizing optic-cup morphogenesis in three-dimensional culture. Nature. 472 (7341), 51-56 (2011).
  2. Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. Organogenesis in a dish: modeling develop....

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

200GelMA

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены