Fuente: Laboratorio del Dr. B. Jill Venton - Universidad de Virginia

Cromatografía de intercambio iónico es un tipo de cromatografía que separa analitos en carga base. Una columna de relleno con una fase estacionaria cargada sobre un soporte sólido, llamado una resina de intercambio iónico se utiliza. Cromatografía de intercambio catiónico fuerte preferentemente separa a cationes mediante el uso de una resina con carga negativa mientras que la cromatografía de intercambio aniónico fuerte preferentemente selecciona a aniones usando una resina cargada positivamente. Este tipo de cromatografía es popular para la preparación de la muestra, por ejemplo en la limpieza de las proteínas o ácidos nucleicos de muestras.

Cromatografía de intercambio iónico es un proceso de dos pasos. El primer paso, la muestra se carga sobre la columna en un tampón de carga. La fijación de la muestra cargada con la resina de la columna se basa en interacciones iónicas de la resina para atraer a la muestra de la carga opuesta. Así, las muestras cargadas de polaridad opuesta a la resina están limitadas fuertemente. Otras moléculas que no están cargadas o de la carga opuesta no están limitados y se lavan a través de la columna. El segundo paso es a fin de eluir el analito que se enlaza a la resina. Esto se logra con un gradiente de sal, donde poco a poco se aumenta la cantidad de sal en el búfer. Fracciones se recogen al final de la columna como se produce la elución y la muestra purificada de interés puede ser recuperada en una de estas fracciones. Otra técnica, como la espectroscopia, puede ser necesaria para identificar la fracción que contiene la muestra. Cromatografía de intercambio iónico es especialmente útil en estudios de la proteína, para aislar las proteínas de interés que tienen una carga específica o el tamaño, tamaño puede determinar el número de interacciones con la resina.

Cromatografía de intercambio iónico es una técnica de separación más general que la cromatografía de afinidad, que es también de uso frecuente en la preparación de las muestras de proteína, donde un anticuerpo está enlazado a una columna para enlazar un analito. Debe adquirirse una nueva columna de afinidad para cada analito, mientras que el mismo tipo de columna de intercambio iónico, a menudo con diferentes condiciones de elución, se puede utilizar para limpiar muchas proteínas de la misma carga. Cromatografía de intercambio iónico puede utilizarse también en combinación con otros tipos de cromatografía que separan en base a otras propiedades. Por ejemplo, se separa de la cromatografía por exclusión de tamaño según el tamaño y podría ser utilizado antes de la cromatografía de intercambio iónico para elegir compuestos de solamente un tamaño determinado.

1. preparación de la muestra y la columna

1. En esta demostración, una mezcla de 2 proteínas se separan en una columna de intercambio catiónico: la hemoglobina y el citocromo C. agregar 0,2 mL de tampón de equilibrado (pH 8.1) a la muestra de proteína y vortex para mezclar bien. Centrifugar durante 2 min eliminar cualquier espuma.
2. Colocar la columna de intercambio catiónico en un tubo de ensayo durante 5 minutos permitir que la resina resolver. Abrazadera para el tubo de ensayo con la columna en un sop

Cromatografía de intercambio iónico es ampliamente utilizada en bioquímica para aislar y purificar las muestras de proteína. Las proteínas tienen muchos aminoácidos con grupos funcionales que se cargan. Las proteínas se separan en base a la carga neta, que es dependiente del pH. Algunas proteínas son cargadas más positivamente mientras que otros están cargados más negativamente. Además, péptido pueden ser genéticamente agregan etiquetas a una proteína para darle un punto isoeléctrico que es no en la gama ...