ソース: 研究所博士 b. ジル Venton - ヴァージニアの大学の

イオン交換クロマトグラフィーは、分離電荷に基づく分析クロマトグラフィーのタイプです。イオン交換樹脂と呼ばれる強固な支援に荷電固定相で満ちている列が使用されます。強陽イオン交換クロマトグラフィーを優先的に強い陰イオン交換クロマトグラフィーを優先的に陰イオンを荷電の樹脂を使用して選択する中に負荷電の樹脂を使用して陽イオンを分離します。クロマトグラフィーのこのタイプは、タンパク質や核酸のサンプルのクリーンアップでたとえば、サンプル準備のため人気があります。

イオン交換クロマトグラフィーは、2 段階のプロセスです。最初のステップでは、サンプルが読み込みバッファーの列に読み込まれます。列樹脂有償サンプルのバインドは、電荷が逆のサンプルを引き付けるために樹脂のイオン相互作用に基づいています。したがって、樹脂に逆極性の電荷サンプル強くバインドされます。満たされないまたは反対の電荷の他の分子はバインドされず、列を洗っています。2 番目のステップは、樹脂にバインドされている検体を溶出することです。これは、塩のグラデーション、バッファー中の塩の量が徐々 に増加しています。分数は、溶出が発生し、これらの画分のいずれかで関心の精製サンプルを回復できるよう、列の最後に収集されます。分光学、といった別のテクニックは、どの分画にはサンプルが含まれていますを識別するために必要かもしれない。イオン交換クロマトグラフィーは、蛋白質の調査のサイズは樹脂との相互作用の数を確認できます、特定の請求またはサイズを持つ興味の蛋白質を分離するのに便利です。

イオン交換クロマトグラフィーは、アフィニ ティー ・ クロマトグラフィーもしばしば抗体が 1 つの特定の試料をバインドする列にアタッチされている蛋白質のサンプルの準備で使用されているよりもより一般的な分離手法です。同じ料金の多くの蛋白質をクリーンアップするイオン交換カラム、頻繁に異なる溶出条件の同じ型を使用できますが、新しいアフィニ ティー ・ カラムは各試料の購入されなければなりません。イオン交換クロマトグラフィーは、分離の他のプロパティに基づくクロマトグラフィーの他のタイプと組み合わせても使用できます。たとえば、サイズ排除クロマトグラフィー分離サイズに基づいて、イオン交換クロマトグラフィーの前にだけ与えられたサイズの化合物を選択される可能性があります。

1. サンプルと列を準備します。

1. このデモで 2 つのタンパク質の混合物を陽イオン交換カラムで分離されます: ヘモグロビンやチトクロム c. 追加 0.2 mL 平衡バッファー (pH 8.1) 蛋白質のサンプルし、徹底的にミックスする渦。任意の泡を削除に 2 分間遠心します。
2. レジンの解決を許可するように 5 分間テスト チューブに陽イオン交換カラムを配置します。それは直立させるリング スタンドに列を持つテスト チューブをクランプします。
3. 列のトップ キャップ、ボトム キャップを開きます。試験管に重力を点滴する列のバッファーを許可します。
4. 洗って二度と列列のボリューム (この場合は列ボリュームは 0.3 mL) 平衡バッファーの。廃棄物のバイアルにうち平衡バッファー点滴の 2 番目の列ボリュームを追加する前に最初の列ボリューム (0.3 mL) をみましょう。この手順では、平衡の平衡バッファーで列をことができます。樹脂を邪魔しないようにこの手順でゆっくりと平衡バッファーを追加します。

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イオン交換クロマトグラフィーは、分離し、蛋白質のサンプルを浄化する生化学で使用されています。蛋白質はあるベビーベッド利用の官能基を持つ多くのアミノ酸です。タンパク質は pH に依存している純充満に基づいて区切られます。いくつかのタンパク質は、一方、他の人はより負荷電にもっと積極的に追加料金です。さらに、ペプチドのタグが、遺伝的にみるはない通常蛋白質の範囲...