Quelle: Labor von Dr. B. Jill Venton - University of Virginia

Ionenaustausch Chromatographie ist eine Art der Chromatographie, die Analyten basierend auf Ladung trennt. Eine Spalte wird verwendet, die mit einem aufgeladenen stationären Phase auf einer festen Unterlage, genannt ein Ionenaustausch Harz gefüllt ist. Starke Kationenaustausch-Chromatographie trennt bevorzugt kationen mit einem negativ geladenen Harz während starkes Anion-Austausch-Chromatographie bevorzugt, Anionen wählt mit einem positiv geladenen Harz. Diese Art der Chromatographie ist beliebt für die Probenvorbereitung, zum Beispiel in der Reinigung von Proteinen oder Nukleinsäuren Proben.

Ionenaustausch Chromatographie ist ein zweistufiger Prozess. Im ersten Schritt wird die Probe auf die Säule in einem Laden Puffer geladen. Die Bindung der aufgeladenen Probe zu der Spalte Harz basiert auf ionische Wechselwirkungen des Harzes, die Probe der entgegengesetzten Ladung zu gewinnen. Somit sind stark geladene Proben von entgegengesetzter Polarität in das Harz gebunden. Andere Moleküle, die nicht geladen oder der entgegengesetzten Ladung sind nicht gebunden und werden durch die Säule gewaschen. Der zweite Schritt ist die Analyten eluieren, der an das Harz gebunden ist. Dies geschieht mit einem Salz Verlauf, wo die Menge des Salzes in den Puffer langsam erhöht wird. Brüche werden am Ende der Spalte gesammelt, wie der Elution auftritt und die gereinigte Probe von Interesse in einer dieser Fraktionen gewonnen werden kann. Eine andere Technik, wie z. B. Spektroskopie, kann erforderlich sein, um welchen Bruchteil die Probe enthält zu identifizieren. Ionenaustausch Chromatografie eignet sich besonders in Protein Studien interessierender Proteine, die eine spezifische Ladung Größe oder, zu isolieren, da Größe die Anzahl der Interaktionen mit dem Harz feststellen kann.

Ionenaustausch Chromatographie ist eine allgemeinere Trennung Technik als Affinitätschromatographie, die auch häufig verwendet wird bei der Vorbereitung Proteinproben, wo ein Antikörper in einer Spalte eines bestimmtes Analyten binden befestigt. Eine neue Spalte Affinität muss für jeden Analyten erworben werden, während die gleiche Art von Ionenaustausch Spalte, oft mit unterschiedlichen Medikamentenfreisetzende Bedingungen verwendet werden kann, zu viele Proteine die gleiche Ladung bereinigen. Ionenaustausch Chromatographie kann auch in Verbindung mit anderen Arten der Chromatographie verwendet werden, die basierend auf andere Eigenschaften trennen. Zum Beispiel Größe-Ausschluss Chromatographie trennt basierend auf Größe und konnte vor dem Ionenaustausch Chromatographie verwendet werden, um Verbindungen von nur einer bestimmten Größe wählen.

1. Vorbereitung der Probe und die Spalte

1. In dieser Demo wird eine Mischung aus 2-Proteine auf einer Kationenaustausch Spalte getrennt werden: Hämoglobin und Cytochrom C. Add 0,2 mL Gleichgewichtherstellung Puffer (pH 8.1) die Protein-Probe und Wirbel, gründlich mischen. Zentrifuge für 2 min, Schaum zu entfernen.
2. Setzen Sie die Kationenaustausch Säule in einem Reagenzglas für 5 min Harz zu begleichen zu ermöglichen. Klemmen Sie das Reagenzglas mit der Spalte auf einen Ring Stand, um sicherzustellen,

Ionenaustausch Chromatographie ist weit verbreitet in Biochemie zu isolieren und reinigen Proteinproben. Proteine haben viele Aminosäuren mit funktionellen Gruppen, die berechnet werden. Proteine sind je nach Nettoladung, getrennt die pH-Wert abhängig ist. Einige Proteine sind mehr positiv geladen, während andere mehr negativ geladen sind. Darüber hinaus können genetisch Peptid Tags hinzugefügt werden, um ein Protein, es einen isoelektrischen Punkt geben, der nicht im Bereich des normalen Proteine machen es möglic...