Inocular L.reuteri en 10 mililitros de caldo MRS que contenga un antibiótico apropiado e incubar aeróbicamente durante la noche a 37 grados centígrados. Al día siguiente, centrifugar el cultivo en una centrífuga preenfriada Deseche el sobrenadante y lave el pellet en dos mililitros de tampón P1 estándar Centrifugadora nuevamente y deseche el sobrenadante antes de volver a suspender el pellet en 250 microlitros de tampón P1 modificado. Incubar durante una o dos horas a 37 grados centígrados.
A continuación, agregue 250 microlitros de tampón P2 y mezcle invirtiendo de cuatro a seis veces. Después de cinco minutos, agregue 350 microlitros de tampón N3 y mezcle invirtiendo el tubo. Centrifugar a 10, 000 G durante 10 minutos y transferir la mayor cantidad posible de sobrenadante a una columna de centrifugado.
Centrifugar de nuevo durante 60 segundos y desechar el flujo continuo. Lave la columna de centrifugado con 500 microlitros de PB tampón y centrífuga, desechando el flujo continuo. Lave la columna de centrifugado con 750 microlitros de PE tampón y centrifugar a 10, 000 G durante 60 segundos.
Deseche el flujo y centrifugar de nuevo durante 60 segundos para eliminar cualquier tampón residual. Coloque la columna de centrifugado en un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros. Agregue de 20 a 30 microlitros de agua doble destilada sin DNASA y RNasa al filtro de columna de centrifugado y déjelo actuar durante uno o dos minutos antes de centrifugar a 10, 000 G durante 60 segundos.
Realizar una reacción de PCR estándar utilizando cebadores específicos de plásmidos con eluido que proporciona el ADN modelo, incluido un control positivo con un plásmido derivado de la mini preparación de E. coli. Ejecutar el eluido de mini-preparación a través de un gel de agarosa da como resultado un frotis, en lugar de bandas observables. Sin embargo, la PCR posterior utilizando el eluido como plantilla de ADN produce tamaños de banda esperados.
